高二生物(基因工程的基本操作程序).ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,生物选修3,1.2基因工程的基本操作程序,专题1 基因工程,三、目的基因导入受体细胞,1,、什么是转化？,2,、目的基因导入植物细胞常用的方法是什么？具体过程是怎样的？,3,、目的基因导入动物细胞常用的方法是什么？基本操作程序是怎样的？,4,、目的基因导入大肠杆菌的方法是怎样的？钙离子有什么作用？,转化,目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内,维持稳定和表达,的过程。,三、目的基因导入受体细胞,1.,目的基因导入植物细胞,常用的方法,:,农杆菌转化法、,基因枪法、花粉 管通道法,农杆菌的特点,:,a.,易感染双子叶植物和祼子植物。,b.,具有趋化性。,c.Ti,质粒上的,T-DNA,可转移到受体细胞，并整合到受体细胞染色体的,DNA,上,三、目的基因导入受体细胞,三、目的基因导入受体细胞,1.,目的基因导入植物细胞,农杆菌转化法的导入过程,:,构建基因表达载体,转入,农杆菌,植物细胞,导入,稳定维持和表达,.,目的基因导入动物细胞,常用的方法,:,显微注射技术,操作程序：,三、目的基因导入受体细胞,a.,先提纯含目的基因的表达载体,b.,从动物体内取出卵,(,受精卵）,c.,显微注射仪进行显微注射,d.,将含目的基因的受精卵移植到输卵管或子宫中发育成新个体,3.,目的基因导入微生物细胞,原核生物的特点,:,繁殖快，多为单细胞，遗传物质相对较少。,大肠杆菌的转化过程,:,用,Ca,2+,处理细胞,增加细胞壁的透性，与细胞膜无关,三、目的基因导入受体细胞,感受态细胞,重组表达载体,DNA,分子与感受态细胞混合,感受态细胞吸收,DNA,分子,四、目的基因的检测与鉴定,1,、导入目的基因后需要检测哪些方面？各采取什么方法？,2,、什么是,DNA,分子探针？检测时的,DNA,探针通过什么原理来检测目的基因和相应的,mRNA,？,3,、利用抗体抗原杂交检测的原理是什么？,1.,目的基因是否插入受体细胞染色体的,DNA,上,目的基因的检测内容和方法,检测方法,:,DNA,分子杂交技术,DNA,探针：,用放射性同位素等作标记的含有目的基因的,DNA,片段。,四、目的基因的检测与鉴定,2.,目的基因是否转录出,mRNA,目的基因的检测内容和方法,检测方法,:,分子杂交技术,用,DNA,探针与,mRNA,杂交。,四、目的基因的检测与鉴定,目的基因的检测内容和方法,检测方法,:,抗原,抗体杂交,3.,目的基因是否翻译出蛋白质,四、目的基因的检测与鉴定,4,、个体生物学水平的鉴定,四、目的基因的检测与鉴定,珠蛋白是动物血红蛋白的重要组成成分，当它的成分异常时，动物可能患某种疾病，如镰刀型细胞贫血症，假如让你用基因工程的方法使大肠杆菌生产出鼠的,珠蛋白，想一想，应该如何设计？,思考与探究,思考与探究,1.,从小鼠中克隆出,珠蛋白基因的编码序列（,CDNA,）。,2.,将,cDNA,前接上在大肠杆菌中可以适用的启动子，另外加上抗四环素的基因，构建成一个表达载体。,3.,将表达载体导入无四环素抗性的大肠杆菌中，然后在含有四环素的培养基上培养大肠杆菌。如果表达载体未进入大肠杆菌中，大肠杆菌会因不含有抗四环素基因而死掉；如果培养基上长出了大肠杆菌菌落，则表明,珠蛋白基因已进入。,4.,培养进入了,珠蛋白基因的大肠杆菌，收集菌体，破碎后从中提取,珠蛋白。,