药物分析液相色谱基础.ppt

Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Thrid Level,液相色谱基础知识,关于色谱,色谱是一种分离工具，而不是传统意义上的分析仪器,常见的分离方式：,蒸馏、离心、电泳、过滤、超滤,等等,色谱,是其中一种分离工具,色谱法简介,色谱法（,Chromatography,）,溯源,俄国科学加,1903,年发现色谱的吸附原理，开创了应用吸附原理分离植物色素的新方法并见诸于俄文的文献,1906,年正式命名（见诸文献）,色谱法；,Chromatography,50,年代开始广泛研究和应用,主要是气相色谱及薄层色谱,高效液相色谱法的广泛应用始于,70,年代,色谱的发明人,俄国科学家：,M.S.,Tswett,正式命名“色谱”的文献,一、色谱起源,石油醚,碳酸钙颗粒,色素,玻璃柱,经典液相色谱,色谱分离的机理,分离是一个物理的过程,流动相（,Mobile Phase,）,固定相（,Stationary Phase,）,样品（溶解于流动相中的溶质）,什么是液相色谱,气相色谱：流动相是气相,液相色谱：流动相是液相,什么是高效液相色谱,High Performance Liquid Chromatography,高效液相色谱法，简称：,HPLC,是一种区别于经典液相色谱；基于仪器方法的高效能分离手段：,高性能的色谱柱，高精度、耐高压的输液泵以及高灵敏度的检测器,广泛应用于各个领域：,医药,/,环保,/,石化,/,生命科学,/,食品及农业,在技术，理论及应用上仍处于发展阶段,液相,色谱的基本流程图,流动相,泵,色谱柱,检测器,泵,输,液,分离,检测,记录,A,E,G,B,C,D,F,进样阀,进样,HPLC,的仪器配置,色谱泵,自动进样器,色谱柱及柱温箱,检测器,数据处理系统,溶剂,HPLC,的应用,在食品研究中的分析应用,食品中的天然成分,碳水化合物,类脂化合物、甘油三酸酯、胆固醇,脂肪酸和有机酸,蛋白、肽、氨基酸,食品添加剂,酸味剂、甜味剂、香精、乳化剂,抗氧化剂、防腐剂,颜料和染料（色素,维生素,污染物,霉菌（黄曲霉毒素,农药和,兽药残留,多环芳烃（,PAHS,和亚硝酸,HPLC,的应用,在兽药研究中分析应用,在医药研究中分析应用,药物分析有,USP,、,BP,、,CP,等标准,常用药物研究中的应用：解热镇痛药、镇静药、安定药、心血管药、磺胺类消炎药等。,甾体药物研究中的应用：肾上腺皮质激素、雄性激素、雌性激素和孕激素等。,抗菌素类药物研究中的应用：青霉素、头孢菌素、庆大毒素、四环素、氯霉素、诺氟沙星等。,中草药研究中的应用：生物碱、甙类,(,皂甙、强心甙、黄酮甙等,),、萜类,手性药物,研究中的应用：光学异构体的拆分,(,如解毒剂,D-,青霉胺毒性小，,L-,异构体毒性很强),医疗药物的检测、新药研究、药物代谢、药代动力学研究。,HPLC,的应用,在生物化学和生物工程中的应用,氨基酸、多肽和蛋白质的分析研究,核碱、核苷、核苷酸和核酸的分析研究,生物胺的分析研究（儿茶酚胺类,),在精细化工分析中的应用,醇、醛和酮、醚的分离分析,酸和酯的分离分析,表面活性剂的分析,聚合物的分析研究,药物、农药、染料、炸药等工业产品,在无机离子分析中应用,饮用水、酸雨、土壤中阴离子和阳离子分析,HPLC,的应用,在公安、刑警破案工作需要,毒品分析等,在环境污染分析中的应用,废气、废水、废渣中多环芳烃、多氯联苯、农药残留、酚类和胺类的检测,*,2004,年获悉，世界上化合物总数达到,4700,万，其中绝大部分是有机化合物，而大约有,70,以上是不挥发的。对,HPLC,来说，只要被分析物质在流动相溶剂（各种各样中有一定的溶解度便可分析。所以，,HPLC,在各行各业有着广泛的应用潜力。,高效液相色谱基本概念,色谱图：,HPLC,图形,结果（,Chromatogram,）,色谱图,即色谱柱流出物通过检测器时所产生的响应信号对时间的曲线图，其纵坐标为信号强度，横坐标为保留时间。,色谱峰,保留时间（分）,基线,峰高,峰宽,响应值,液相色谱图相关术语,色谱峰,Peak,色谱柱流出组分通过检测器时产生的响应信号的微分曲线,峰底,Peak Base,峰的起点与终点之间连接的直线,峰高,Peak Height,峰最大值到峰底的距离,峰宽,Peak Width,在峰两侧拐点处所作切线与峰底相交两点之间的距离,半（高）峰宽,Peak Width at Half Height,通过峰高的中点作平行于峰底的直线，其与峰两侧相交两点之间的距离,液相色谱图相关术语,峰面积,Peak Area,峰与峰底之间的面积,又称响应值,标准偏差；,Standard Error,0.607,倍峰高处所对应峰宽的一半,拖尾峰,Tailing Peak,后沿较前沿平缓的不对称峰,前伸峰,Leading Peak,前沿较后沿平缓的不对称峰,鬼峰,Ghost Peak,并非由试样所产生的峰,；亦称假峰,液相色谱图相关术语,基线,Baseline,在正常操作条件下,，,仅由流动相所产生的响应信号的曲线,基线飘移,Baseline Drift,基线随时间定向的缓慢变化,基线噪声；,N,Baseline Noise,由各种因素所引起的基线波动,谱带扩展,Band Broadening,由于纵向扩散,传质阻力等因素的影响,使组分在色谱柱内移动过程中谱带宽度增加的现象,液相色谱图相关术语,死时间，,t,0,Dead time,不被固定相滞留的组分，从进样到出现峰最大值所需的时间,保留时间，,t,R,Retention time,组分从进样到出现峰最大值所需的时间,死体积,，,V,0,Dead volume,不被固定相滞留的组分，从进样到出现峰最大值所需的流动相体积,保留体积，,V,R,Retention volume,组分从进样到出现峰最大值所需的流动相体积,液相色谱应用：制备型液相色谱,分离及纯化样品是液相色谱原理的直接利用,对分离及纯化的要求,化合物的稳定性,样品的复杂性,制备量的要求,纯度的要求，及纯度的鉴定,方法的安全性,液相色谱应用：分析型液相色谱,定量分析主要基于与标准品的比较,是其最大应用领域,定性分析；不是色谱的强项,基于样品的保留时间比较,借助于和其联用的紫外、质谱或其他检测器,对定量及定性分析的要求,灵敏度、精度及准确度的要求,样品量的要求；复杂样品的分析能力,容易使用,液相色谱实验所需的基本参数,液相色谱实验所需的基本参数,流动相：种类及配比，等度或梯度,固定相：色谱柱类型及内径、长短,流动相输送系统参数：流速,检测器参数：紫外检测波长，灵敏度等,温度控制,进样量,以上参数即构成一个具体的,HPLC,方法；亦称色谱条件,评价液相色谱方法的标准,问题：什么样的分离结果是好的？分离度？灵敏度？,什么是色谱的分离度,分离度的公式：,R,：,分离程度的量度,容量因子,k,与峰高的关系,改变,k,值的方法：,调节流动相的极性（比例）、,pH,、,离子强度等,梯度淋洗,改变容量因子,K,的例子,谱图,、,k,及,N,如何控制分离度,