1、Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,液相色谱基础知识,Waters LC School,培训教材,蒸馏,离心,电泳,过滤,超滤,色谱,常见的分离方式,色谱法的分类,HPLC,分离的机理,典型的仪器配置,液相色谱的应用（一）,“,分析型液相色谱,”,定性及定量分析,灵敏度的要求,样品的复杂性,样品量的要求,精度及准确度的要求,容易使用,液相色谱的应用（二）,“,制备型液相色谱,”,分离及纯化,化合物的稳
2、定性,样品的复杂性,制备量的要求,纯度的要求，及纯度的鉴定,方法的安全性,开发液相色谱方法,问题什么样的分离结果是好的?分辨率?,什么是色谱的分辨率？,分辨率的公式：,影响分辨率的因素：,K，,a,，,N,分辨率的方程,k,是容量因子，表达了样品与柱填料的作用强弱。,a,是选择性系数，描述两化合物分离的好坏程度。是化学因素。,N,是理论塔板数，描述色谱峰的谱带展宽程度。,色谱柱的柱效,N,理论塔板数计算公式：,W,s,方法,W,tan,16,切线法,W,h,5.54,半峰高,W,3,s,9 3,s,W,4,s,16 4,s,W,5,s,25 5,s,I,nject,Inject,用,“,切线,
3、法计算柱效,不好的色谱柱的柱效反而比好色谱柱的要高，因为其拖尾部分测不出来,Good Column,Bad Column,Inject,Inject,用,“,5,”,法计算柱效,提高柱效的方法,色谱柱本身,减小填料的颗粒度,找到最佳的流速(根据不同内径),合适的温度,降低溶剂的粘度,增加柱长,其他影响柱效的因素,柱外效应,连接管路,进样器、检测器,进样体积,进样量,容量因子,k,改变,k,值的方法,调节流动相的极性、,pH、,离子强度等,梯度淋洗,与峰高的关系,与,R,的关系,选择性系数,a,定义,a,=1,时两组分分不开，,改变,a,的途径,改变固定相,改变流动相,改变温度,改变样品的本身性质,a,，k，,N,如何控制分辨率?,液相色谱的检测模式,灵敏度、选择性、及适应能力,色谱条件的优化,开发液相色谱方法,分辨率是色谱分离中主要考虑的因素,在开发色谱方法时，有很多因素是很重要的。除分辨率之外，以下几个因素都要考虑。,灵敏度,载样量,分析速度,溶剂损耗,成本,容易使用,色谱柱寿命,效率,
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