第03章 药物检查new.ppt

Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,*,JILIN UNIVERSITY,COLLEGE OF LIFE SCIENCE,*,药品检验工作的基本程序,取样,鉴别,检查,含量测定,写出检验报告,1,第,三,章 药物的杂质检查,第一节 杂质和杂质限量检查,一、药物的纯度,药物的纯度是指药物的纯净程度。杂质是在生产和贮藏过程中引入的，有的杂质没有治疗作用，有的影响疗效和稳定性，有的甚至危害人体健康。,检查药物中的杂质控制其纯度是确保用药安全有效保证药品质量的一个重要方面。,杂质检查收载在药物的“检查”项下，包括检查方法。,评价药物的纯度包括性状、理化常数、杂质检查和含量测定等。,3,药物的纯度要求,药物的纯度,指药物的纯净程度,杂质检查,也称纯度检查,杂质（,impurity）,无治疗作用，影响药物稳定性和疗效，对人体健康有害的物质。,注意,药物纯度与化学纯度的区别,4,二、药物中的杂质来源,在生产过程中引入：反映物、中间体、副产物、有机溶剂、试剂等。例如盐酸普鲁卡因、在高温灭菌过程中可产生对氨基苯甲酸和二乙氨基乙醇。,在贮藏过程中产生：水解、氧化、分解、异构化、晶型转变、聚合、潮解、发霉等,药物中的杂质按来源可分为一般杂质和特殊杂质。按其性质可分为信号杂质和有害杂质,5,种类：,按来源分：,按结构分：,按性质分：,无机杂质有机杂质,一般杂质,特殊杂质,信号杂质,有害杂质,6,三、杂质的限量检查,杂质限量（,L,）=,式中：杂质最大允许量=(浓度,C,体积,V,),标,所以：,L=C,V/S,100%,杂质最大允许量,供试品量（,S,）,100%,7,例1 对乙酰氨基酚中检查氯化物。取对乙酰氨基酚2.0,g,加水100,ml,加热溶解后冷却，滤过，取滤液25,ml，,依法检查氯化物，发生的浑浊与标准氯化钠溶液5.0,ml（,每1,ml,相当于10,ug,的,Cl,）,制成的对照液比较不得更浓。问氯化物的限量是多少？,C V,L=,100%,S,10 5,2 25,100,1000000,100%=0.01%,8,例2 葡萄糖中检查重金属。取葡萄糖4.0,g，,加水23,ml,溶解后，加醋酸盐缓冲液(,pH3.5)2ml，,依法检查重金属，含重金属不得过百万分之五。问应取标准铅溶液多少,ml（,每1,ml,相当于10,ug,的,Pb,）?,L S,V=,C,4 5/1000000,10 1/1000000,=2(ml),9,例3 溴化钠中砷盐检查，规定含砷量不得过0.0004%，药典规定，取标准砷液2.0,ml（1ugAs/ml）。,应取供试品多少克？,C V,S=,L,2 1/1000000,0.0004%,=0.5(g),10,例4 磷酸可待因中检查吗啡。取本品0.10,g，,加盐酸溶液（91000）使溶解成5,ml，,加亚硝酸钠试液2,ml，,放置15分钟，加氨试液3,ml，,所显颜色与吗啡溶液取无水吗啡2.0,mg，,加盐酸溶液（9 1000）使溶解成100,ml5.0ml,用同一方法制成的对照液比较，不得更深。问限量为多少？,C V,L=,100%,S,2.0/100 5.0,0.10 1000,100%=0.1%,11,第三章 药物的杂质检查,第二节 一般杂质的检查方法,一、氯化物检查法,供试液：取规定量供试品，加水溶解成,25ml,，加,稀硝酸,10ml,；,如不澄清，应过滤，置,50ml,纳氏比色官中，加水成,40ml,标准液：规定量标准氯化钠溶液，加稀硝酸,10ml,，,置,50ml,纳氏比色官中，加水成,40ml,于供试液、标准液中，分别加入硝酸银,1.0ml,，,用水稀释到,50ml,，,在暗处放,5min,，,在黑色背景下从上到下比较。,13,二、硫酸盐检查法,供试液：取规定量供试品，加水溶解成,40ml,，,如不澄清，应过滤，置,50ml,纳氏比色官中，加稀盐酸,2ml,，,摇匀。,标准液：规定量标准硫酸钾溶液，置,50ml,纳氏比色官中，加水成,40ml,，,加稀盐酸,2ml,，,摇匀。,于供试液、标准液中，分别加入,25%,氯化钡,5ml,，,用水稀释到,50ml,，,在暗处放,10min,，,在黑色背景下从上到下比较。,14,三、铁盐检查法,O,H,SCN,NO,H,SCN,HNO,2,2,+,+,+,+,-,-,+,+,+,+,+,+,2,4,4,2,4,3,8,2,2,4,2,),(,2,),(,2,SO,SO,NH,Fe,O,S,NH,Fe,H,F,e,3,+,+,6,S,C,N,-,H,+,F,e,(,S,C,N,),6,3,-,15,供试液：取规定量供试品，加水溶解成,25ml,，,置,50ml,纳氏比色官中，加稀盐酸,4ml,与过硫酸铵,50mg,，,加水稀释成,35ml,后，加,30%,硫氰酸铵,3ml,，,再加水至,50ml,，,摇匀。,标准液：取规定量硫酸铁按，加水溶解成,25ml,，,置,50ml,纳氏比色官中，加稀盐酸,4ml,与过硫酸铵,50mg,，,加水稀释成,35ml,后，加,30%,硫氰酸铵,3ml,，,再加水至,50ml,，,摇匀。,16,四、重金属检查法,重金属是指在实验条件下能与,S,2-,作用显色的金属杂质，如银、铅、贡、铜等。主要以铅为主。,17,硫代乙酰胺法,取各药品项下规定量的供试品,加醋酸盐缓冲液,(pH3.5)2ml,与水适量使成,25ml,加硫代乙酰胺,2ml,放置,2min,后,与标准铅溶液一定量按同法制成的对照液所形成的棕色进行比较。,.,CH,3,CSNH,2,+H,2,O CH,3,CONH,2,+H,2,S,H,2,S+Pb,2+,PbS,+2H,+,18,第二种方法,将,供试品炽灼破坏后检查或取炽灼残渣项下遗留的残渣进行检查,用于在水、乙醇中难溶或能与重金属形成配位化合物而干扰检查的有机药物。,温度影响较大，,500600,度为宜。,必须蒸干除尽氧化氮。否则形成亚硝酸可氧化硫化氢析出硫，影响比色。,蒸干后加盐酸使成盐酸盐，再蒸干残留的盐酸，加水溶解，以氨调,pH,至中性，加醋酸盐缓冲液,(Ph3.5),微热溶解，依法测量。,对照液按同法处理，保持平行,19,第三法 在碱性条件下，以硫化钠为试液，适合于不溶于稀酸而溶于碱的药物。,取供试品适量+,NaOH+H,2,O,溶解+,Na,2,S,试液，与一定量标准铅液同法处理后的颜色比较。,第四法 微孔滤膜过滤法，适合于重金属含量低的药物（原理与一法同）。,显色后用 50,ml,注射器转移至滤器中进行压滤，取下滤膜，干燥，比较生成的斑点颜色。,20,上盖,上盖,垫圈,滤膜,辅助 滤板,连接头,滤器下部支撑器,滤器下部支撑器,21,注意,供试品溶液有色：在对照管中加少量稀焦糖溶液，（也可加其他无干扰的指示剂等）使两管色调一致。如果外消色法不能消除干扰，可采用内消色法。,供试品含有微量,Fe,3+,：,会氧化,H,2,S,析出,S，,可加,VitC,0.5-1.0g，,使Fe,3+,Fe,2+,，,同时在对照管中加等量的,VitC,，,再依法测定。,22,五、砷盐检查法,砷盐是有毒的物质,中国药典（,2000,年版）采用古蔡法和二乙基二硫代氨基甲酸银法（,Ag-DDC,）,检查药物中的砷盐。,23,第一法 古蔡法,原理:,As,3+,+3Zn+3H,+,AsH,3,+3Zn,2+,AsO,3,3,+3Zn+9H,+,AsH,3,+3Zn,2+,+3H,2,O,AsH,3,+3HgBr,2,3HBr+As(HBr)3（,试纸）砷斑,与2,ml,标准砷溶液同法,操作,。,砷斑：,As(HgBr),3,(,黄色)；,AsH(HgBr),2,(,棕色)；,As,2,Hg,3,(,棕黑色),24,第二法,二乙基二硫代氨基甲酸银法 简称,Ag(DDC),法,AsH,3,+6Ag(DDC)+3,吡啶,As(DDC),3,+6Ag（,红色胶态银,）,+3,吡啶,HDDC,于510,nm,波长处测定吸收度，以,Ag(DDC),溶液为空白。,25,古蔡法,测砷瓶,测砷管,Hg(Br),试纸,Pb(Ac)2,棉花,反应液,玻璃试管,Ag(DDC),Ag(DDC),法,(KI,SnCl2),26,六、炽灼残渣（,Residue on ignition）,炽灼残渣也称硫酸盐灰分-有机药物经炽灼炭化，加硫酸湿润，低温加热至硫酸蒸气除尽后，于高温（700800）炽灼灰化逸出，残留下非挥发性无机杂质（金属氧化物或无机盐类）成为硫酸盐。,限量一般控制在0.1-0.2%,取样量为1-2,g,27,注意,遗留的炽灼残渣需留作重金属检查时，炽灼温度应控制在500-600,C,炽灼至恒重的第二次称重应在规定温度继续炽灼30分钟以上。,恒重,连续二次称重重量差0.3,mg。,含氟药物对磁坩埚有腐蚀，应采用铂坩埚。,28,七、干燥失重（,Loss on drying）,是指药物在规定的条件下经干燥后所减失的重量。主要指水分，也包括其他挥发性杂质。测定方法有：,1,常压恒温干燥法（105,）,适用于受热较稳定的药物。,将样品（研细）平铺于扁称量瓶中，厚度5,mm。,干燥时间一般在达到指定温度后干燥2-4,h，,称重，再干燥，直至恒重。,29,2,干燥剂干燥法,本法适用于受热易分解或易挥发的药物。将样品置干燥器内干燥至恒重。,常用干燥剂有：,硅胶、硫酸、无水氯化钙、五氧化二磷等。,其中五氧化二磷吸水效力最强，但,P,2,O,5,吸水后产生,H,3,PO,4,，,若样品对酸不稳定，可能会受影响。,30,3,减压干燥法,适用于,mp,低，受热不稳定及难除去水分的药物。减压干燥时可用减压干燥器或恒温干燥箱，一般压力2.67,KPa20mmHg,。,通常分析一个药物时，干燥失重与含量测定应同时进行，然后根据干燥失重%，将样品折算成干燥品，再计算含量。,31,4,热分析法（,Thermal analysis）,热分析是指在程序控制温度下，测量物质的物理、化学变化与温度关系的一类技术。,物质在加热（冷却）过程中，往往会脱水、挥发或发生相变（熔化、冷凝、升华、沸腾）及发生分解、氧化、还原等化学变化，热分析就是将这些变化作为温度的函数来进行研究和测定。,常用方法有：,32,八、水分测定法,I,2,+SO,2,+H,2,O=2HI+SO,3,(A-B)F,供试品中水分含量,=*100%,W,33,九、有机溶剂残留量测定法,用以检查药物在合成过程中引入的有害有机溶剂。,ChP,规定：,二氧六环 0.038%,吡啶 0.02%,苯 0.0002%,甲苯 0.089%,氯仿 0.006%,二氯甲烷 0.06%,环氧乙烷 0.001%,34,Ch.P,对残留有机溶剂采用,GC,法测定,第一法-直接进样法,内标法,RSD5%（n=5）,外标法-,RSD10%（n=5）,第二法-顶空进样法,可免去样品萃取、浓集等步骤，并可避免非挥发性组分对色谱柱的污染，但要求待测物有足够的挥发性。,35,10-20,ml,玻璃瓶（具有硅橡胶隔垫片盖）,1-2,g,固体或1-5,ml,液体（平衡30-60,min）,恒温水浴,样品,顶空分析法（,head space chromatography,）,也称液上气相色谱分析，是指用气相色谱法来分析封闭系统中与液体或固体样品相平衡的气体的一种方法。,36,第三节 特殊杂质检查方法,色谱法（,TLC,、,HPLC,、,GC,）,光谱法,化学分析法,物理分析法,37,TLC,法,杂质对照品法（,A）,供试品自身对照法（高低浓度法）（,B）,对照物质法（,C）,不允许有杂质斑点（以方法灵敏度来控制杂质量）,样 对,样 对,样 对,A B C,38,HPLC（GC）,法,峰面积归一化法,A,杂总,/,A,总,100%=,杂%,A,总,=,A,杂1,A,杂2,A,样,杂1 杂2 样,39,内标法,校正因子测定液=对照品内标,样品测定液=样品同样量内标,分别进样，记录色谱图。,校正因子,F=A,内,/,A,对,m,对,/,m,内,m,杂,=,F,A,杂,/A,内,m,内,杂质限量%=,m,杂,/,W,样,100%,40,F=(A,内,/,A,对,),(m,对,/,m,内,),m,杂,=,F,(A,杂,/A,内,),m,内,对照,样品,杂质限量%=,m,杂/,W,样,100%,41,外标法,m,杂,=,A,杂,/A,对,m,对,杂质限量%=,m,杂,/,W,样,100%,杂质对照品,样品,42,不加校正因子的主成分自身对照法,A,杂总,/,A,自,C,自,/取样100%=杂质%,样品测定液,1 2 3,A,杂总,=,A,1,A,2,A,3,自身对照液,（1%）,43,第三章 药物的杂质检查,药物的纯度概念,杂质的来源,(,生产和贮藏,),杂质的种类,(,一般和特殊,),杂质的限量检查,(L=C,V/S,100%),一般杂质检查,(Cl,SO4,Fe,重金属,砷等,),特殊杂质检查,(TLC,HPLC,UV,等,),44,AsO,杂质,原理,反应条件,适宜浓度范围,标准溶液,氯化物,Cl,+Ag,AgCl,(,白,),稀硝酸,50,80,g/50ml,(,标准液,5,8ml),氯化钠,(10,g,Cl,/ml),硫酸盐,SO4,2,+Ba,2+,BaSO4(,白,),稀盐酸,100,500,g/50ml,(,标准液,1,5ml),硫酸钾,(100,g,SO4/ml),铁,Fe3+6SCN Fe(SCN)63(,红,),盐酸,10,50,g/50ml,(,标准液,1,5ml),硫酸铁铵,(10,g,Fe/ml),重金属,Pb,2+,+S2,PbS,（黄,-,黑）均匀混悬液,醋酸盐缓冲液,(pH3.5),10,20/27ml,(,标准液,1,2ml),硝酸铅,(10,g,Pb,/ml),砷盐,AsO,3,3-,+3Zn+9H,+,AsH,3,+Zn,2+,AsH,3,+2HgBr,2,(,试纸,),砷斑,盐酸,2,g/,反应液中,(,标准砷液,2ml),三氧化二砷,(1,g,As/ml),45,杂质,加酸的作用,供试品不澄明,供试品有色,氯化物,加速,AgCl,，产生好的乳浊，避免,Ag,2,CO3,Ag,2,O,Ag,3PO,4,的形成,用含硝酸的水洗净滤纸中,Cl,后过滤供试液,内消色法或外消色法,硫酸盐,防止,BaCO,3,Ba,3,(PO4),2,形成,用含盐酸的水洗净滤纸中,(SO4),2,后过滤供试液,内消色法或外消色法,铁,防止,Fe,3+,水解。,Fe,2+,无反应，加过硫酸铵氧化,Fe,2+,Fe,3+,标准液与样品液色调不一致，用正丁醇或异戊醇提取红色产物,重金属,PbS,完全。若酸度增大，呈色变浅，甚至不呈色。,加稀焦糖液或用内消色法,46,TLC,法,杂质对照品法,供试品自身对照法（高低浓度法）,对照药物法,不允许有杂质斑点（以方法灵敏度来控制杂质量）,HPLC（GC）,法,峰面积归一化法,不加校正因子的主成分自身对照法,加校正因子的主成分自身对照法,内标法,外标法,47,