临检4—细胞计数技术.ppt

单击此处编辑母版标题样式,*,检验医学教研室,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,第 一,章 血液学一般检验,六、,血细胞显微镜计数法,Xingyue,检验医学教研室,1,检验医学教研室,细胞计数,是检验工作者最基本、也是最常用的技术之一，,直接计数法,显微镜计数法,间接计数法,计数方法,半自动,血细胞分析仪法 多参数分析,全自动,Xingyue,2,检验医学教研室,血细胞计数,人工显微镜计数法,自动血细胞计数仪法,Xingyue,直接计数法,间接计数法,半自动,（二、三分群）,全自动,（五分群）,3,检验医学教研室,显微镜细胞计数法,【,测定方法及评价,】,将样本做适当稀释（或浓缩），有时还需特殊染色，充入细胞计数池，在显微镜下计数计数板中一定体积内细胞数，经换算得每升标本的细胞数。,如：血液,RBC,、,WBC,、,PLT,、,嗜酸细胞、嗜碱细胞、淋巴细胞和单核细胞直接计数，体液细胞计数（,尿中细胞管型、精液中精子计数、脑脊液及浆膜腔积液细胞计数）,等。,该法计数误差较大，费时、费力，已不能适应大批量标本的测定，将逐渐被血细胞分析仪所取代。,Xingyue,4,检验医学教研室,【,试剂,】,各种不同的专用稀释液或染色稀释液。,【,器材,】,（,1,）,显微镜,（,2,）,微量吸管,：,Hb,吸管：,10,、,20,l,两刻度,毛细玻璃吸管：,10,、,20,l,两刻度,一人一管，定期用水银称重法进行校正,误差应,1%,（,3,）,计数板,：血细胞计数板，常用改良,Neubauer,计数板,计数板的构造,：,（,4,）,血盖片,规格,24mm,20mm0.6mm,，,要求：表面平整（,不平整性,0.002mm,），,高倍镜检查无裂痕，且本身有一定的重量。,Xingyue,5,检验医学教研室,血细胞计数板的构造,24,200.6mm,6,检验医学教研室,计数池划线,1 mm,1mm,7,检验医学教研室,计数池划线,美国国家标准局（,NBS,）,1941,年规定：计数池大方格每边长度的误差应在,1%,内（,10.01mm,）,;,血盖片与计数池间缝隙深度应在,2%,以内,(0.10.002mm),。,8,检验医学教研室,计数池的参数,区 域 边长（,mm,）,面积（,mm,2,）,深度（,mm,）,体积（,mm,3,）,计数池,3 9 0.1 0.9,大方格,1 1 0.1,0.1,计,WBC,中方格,0.25 0.0625 0.1 0.00625,计,RBC,中方格,0.2 0.04 0.1 0.004,计,RBC,小方格,0.05 0.0025 0.1 0.00025,9,检验医学教研室,【,操作,】,（以血,WBC,计数为例）,WBC,稀释液,0.38ml,+,血,20l,混匀后,30s,后灌板,静置,2,3min,后,以低倍镜计数四角,4,个大方格内,WBC,数,（,计数原则,）,计算,WBC,数,/L,=,四个大方格细胞数,/4102010,6,/L,=,四个大方格细胞数,0.0510,9,/L,Xingyue,10,检验医学教研室,【,注意事项,】,(1),计数的标本必须新鲜,及时计数。,(2),稀释液要过滤,试管、吸管、计数板要清洁，避,免杂质等污染。,(3),采血量要准确，避免凝血，要擦去吸管外的血液，,放血时用上清液冲洗管壁,2,3,次。,(4),灌板前要充分混匀，适当用力快速震荡,30s,，,但要避,免产生过多的气泡，要一次充满。,(5),加盖片方式：,WHO,推荐采用“推式”，较“盖式”更,准确。,(6),注意区别灰尘、杂质。,Xingyue,11,检验医学教研室,【,质量控制,】,显微镜技术的误差可分为,技术误差,和,固有误差,两种,1,.,技术误差,：由于操作不正规或使用器材不精确造成的误差。这类误差通过主观努力可以避免或显著减小，属系统误差。,常见技术误差,：,使用器材不符合要求：,采血部位不当，,稀释倍数不准；,充液不当；,如未混匀、冲液过多、产生气泡、盖片移,动、操作台不平等。,血液凝固。,误认,Xingyue,12,检验医学教研室,2.,固有误差,：,显微镜计数法中包括,计数域误差、吸管误差、计数室误差,三种。,（,1,）,计数域误差,：即使一个技术熟练的人，使用同一器材，同一份稀释细胞悬液，多次重复计数，结果仍有一定的误差。这是由于充池后细胞在计数室内分布不可能完全相同所造成的误差，叫,固有误差,或,计数域误差,，此属偶然误差。这种误差可因计数更多的细胞而减少，但不能完全消除。,如：在同一计数池中，计数,100,个细胞将可能出现,4%,的误差，若计数,1000,个细胞时，误差将减少至,2.9%,。,根据统计学原理，血细胞在计数室内分布的不均一性符合,Poisson,分布，,s=,m ,CV(%)=s/m,100=1/,m,100,说明,在计数室内计数面积越大，计数的细胞越多，计数域误差越小,。,Xingyue,13,检验医学教研室,2.,固有误差,：,（,2,）,吸管误差,和,计数室误差,是由吸管和计数室不精密引起。,Bekson,（,1940,）,固有误差公式：,CV,=,(0.92100),2,/,b,+(4.6),2,/,c,+(4.7),2,/,p,b,:,实际计的细胞数,c,：,计数室使用次数,p,：,吸管使用次数,认为，当使用一支吸管和计数板的一边计数室，计数,0.2mm,2,面积的细胞数,CV,值可望达到能接受的,7%,以内。,14,检验医学教研室,思考题,1,.,血细胞计数板的构造、划线及细胞计数的计算方法。,2.,计数池、血盖片、微量吸管有何技术要求？,3.,血细胞显微镜计数的误差有哪些？,15,检验医学教研室,白细胞计数区域及计数原则,16,检验医学教研室,