色谱应用与化合物提纯.ppt

由于载体对被分离物,质吸附太强所致.解决办法是:,对硷性化合物,在展开剂中添加,比其极性强的不干扰测定的硷性物.,如氨水、三乙胺等，置换解决。,对酸性化合物，在展开剂中添,加比其极性强的不干扰测定的酸性,物.如甲酸、冰乙酸等，置换解决,举例见幻灯片5.,边沿效应问题：特别是对铝泊,板，可用食指与拇指沿边沿上下抚,平整后，先空白爬行一次看是否有,边沿效应，无则热风吹干后使用。,TLC方法建立-,甲氟奎,Synthetic process,(1):过渡物 (2):产品,TLC方法建立及其验证,某药物-中间体监控TLC方法建立,中间体1检测TLC方法建立,分离试验:,R,f,=0.10,满足,分离要求.,检测限试验:中间体1为3.00,g,SM为,2.02,g.,加样试验:SM取检测限的2-3,倍(最少),中间体1取SM量的50-60,倍,然后混合.,SM:中间体1=4.69:250,某药物-中间体监控TLC方法建立,中间体结构式,中间体2,中间体3,中间体4,极性:中间体4,32,3、氧化杂质（反应方程式如下）,Kirchner J G.,三、定义：根据不同的目的在点样处点加试剂或以其他方式使 被测物质在点样原位处进行化学反应，当反应完成后再进行展开，从而测定反应进行情况。,一条经验：当在HP6890型GC上安装30M毛细管柱，且当载气流速为1.,对酸性化合物，在展开剂中添,反相测定HPLC图显示极性顺序为ABNifedipine，杂质A、B为致癌物质，均不得超过0.,举例物质中可能含有的杂质,对酸性化合物，在展开剂中添,四、研究内容：氧化还原、光解、水解、脱水、卤化、酯化、硝化、重氮化等反应以及制备衍生物都可以用此方法进行。,检测限试验:中间体1为3.,总结2-吸附-固体萃取应用！,纯品双异丙酚是无色液体，在TLC板上展开时如不显色则看不出，但在点样原点处将其用氧化剂氧化后生成了玫瑰红色的醌类物质，展开时可见红色斑点在上行。,除去杂质方法：碱溶液处理、过滤、滤液酸处理，过滤、洗涤即可。,平整后，先空白爬行一次看是否有,利用色谱分析图构思分离方法,极性:中间体432,拖尾问题:由于载体对被分离物,利用色谱分析图构思分离方法,板，可用食指与拇指沿边沿上下抚,薄层原位化学反应简介,一、创立时间,：1953年由Miller及Kirchner提出,二、原始发表文章：Miller M.Kirchner J G.Analchem，1953,三、定义：,根据不同的目的在点样处点加试剂或以其他方式使 被测物质在点样原位处进行化学反应，当反应完成后再进行展开，从而测定反应进行情况。,四、研究内容：,氧化还原、光解、水解、脱水、卤化、酯化、硝化、重氮化等反应以及制备衍生物都可以用此方法进行。,薄层原位化学反应的应用,药物稳定性研究,化学反应摸索,化学鉴别反应,应用举例,硝苯地平对光稳定性研究,硝苯地平对光的稳定性,硝苯地平的氧化反应,硝苯地平氧化反应TLC检测,脱水反应举例,尼群地平中间体制备,TLC方法演示,双异丙酚的氧化,纯品双异丙酚是无色液体，在TLC板上展开时如不显色则看不出，但在点样原点处将其用氧化剂氧化后生成了玫瑰红色的醌类物质，展开时可见红色斑点在上行。,利用色谱分析图构思分离方法,利用GC谱图研究蒸馏、精馏过程,HPLC谱图与重结晶、吸附工艺关系,举例说明,利用色谱分析图构思分离方法,利用GC谱图研究蒸馏、精馏过程,组分出峰顺序及其依据,一、,对一般常用的毛细管气相色谱柱和填充柱来说：各被测定组分主要按照由低到高的沸点顺序、由小（大）到大（小）的极性顺序依次出峰。,二、a.程序升温情况下，各组分按照由低到高的沸点顺序 依次出峰。,b.沸点相近的组分，如使用极性柱分离，则按照由小到大的极性顺序依次出峰；反之相反。,应用举例,利用GC谱图研究蒸馏、精馏过程,应用举例(程序升温),1、氟苯、氯苯、溴苯的分离,沸点顺序：氟苯氯苯溴苯,GC谱图,利用GC谱图研究蒸馏、精馏过程,2、沸点相近组分的分离,a.组分A与B,利用GC谱图研究蒸馏、精馏过程,2、沸点相近组分的分离,b.组分A与B分离色谱图（A极性大于B）,GC图谱与蒸馏、精馏的关系,未知沸点的液体组分分离（程序升温情况下）,当保留时间差（,RT）很大时，可直接用蒸馏的方法分离。,当保留时间差较小时，只能考虑用精馏的方法分离 或分子蒸馏技术。,一条经验：当在HP6890型GC上安装30M毛细管柱，且当载气流速为1.6ML/min时，如,RT1min，则可以用精馏的方法提纯组分，理论塔板数一般小于50；如,RT0.5min，则较难用精馏的方法提纯。,分子蒸馏：高真空较低温度下，利用液体组分间挥发时具有的分子平均自由程差进行分离的一种技术。,HPLC谱图与重结晶、吸附工艺关系,反相色谱与正相色谱概念,1、反相色谱：柱子极性小于流动相,2、正相色谱：柱子极性大于流动相,出峰顺序,1、,反相色谱：极性大的组分先出峰，小的后出。,2、正相色谱：极性小的组分先出峰，大的后出。,举例说明,1、硝苯地平（Nifedipine）,2、某药物,HPLC谱图与重结晶、吸附工艺关系,举例说明1（硝苯地平）,反相测定HPLC图显示极性顺序为ABNifedipine，杂质A、B为致癌物质，均不得超过0.2%,HPLC谱图与重结晶、吸附工艺关系,举例说明1（硝苯地平）,重结晶提纯工艺设计,1、原重结晶用溶剂-95%工业乙醇,2、根据HPLC图设计现用重结晶用溶剂-80%乙醇+1%HOAc（混合溶剂）,3、硝苯地平粗品及其杂质（B）在两种溶剂中的溶解度（60下测定）,名称,用量,工业乙醇,混合溶剂,硝苯地平粗品,1g,5ml,7ml,杂质（B）,1g,6ml,2ml,HPLC谱图与重结晶、吸附工艺关系,举例说明1（硝苯地平）,用混合溶剂重结晶后：收率有所提高，HPLC显示几乎全部去掉了杂质A及B,HPLC谱图与重结晶、吸附工艺关系,举例说明2（抗高血压药）,反相测定HPLC图显示该产品粗品中主要杂质M-IP极性远小于主物质,该药物与主要杂质结构分析,1.药物分子结构中含有磺酰氨基，为强极性基团。,2.杂质分子结构中不含有磺酰氨基。,3.除去杂质方法：碱溶液处理、过滤、滤液酸处理，过滤、洗涤即可。,HPLC谱图与重结晶、吸附工艺关系,举例说明2（抗高血压药）,重结晶：原用变性乙醇重结晶进一步去除杂质，后用正丁醇重结晶去除杂质，效果更好。（因为正丁醇极性小于乙醇）,总结1-相似相溶原理应用！,在反相HPLC图中：一般先出峰的组分极性较强，可用极性溶剂重结晶将其除去。,在反相HPLC图中：一般后出峰的组分极性较弱，可用非极性或弱极性溶剂重结晶将其除去。,总结2-吸附-固体萃取应用！,在反相HPLC图中：一般先出峰的组分极性较强，可用硅胶或硅藻土吸附将其除去。,在反相HPLC图中：一般后出峰的组分极性较弱，可用活性炭吸附将其除去。,