血液系统疾病动物模型的制备.pptx

Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,11/7/2009,#,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,血液系统疾病动物模型的制备,第一页，共64页。,血栓形成的动物模型,贫血的动物模型,DIC,的动物模型,血液系统疾病动物模型制备及应用,第二页，共64页。,一,.,血栓形成的实验动物模型,在活体心血管系统内血液成分形成固体,质块的过程称为,血栓形成,(thrombosis),。,第三页，共64页。,血管的止血功能,血液凝固反应,血小板的作用,3,机体的止、凝血功能,血小板,纤维蛋白,第四页，共64页。,血,管壁,的损伤：内皮损伤，内皮下基质,(ECM),裸露,血流状态的改变：血流缓慢或涡流形成,血,液性质,的改变：高凝状态,血栓形成的,机,理,：,第五页，共64页。,血管内皮损伤,损伤的因素：,感染、免疫因素、机械性损伤、,化学物质和代谢产物的作用,促血栓形成机制：,内皮屏障缺失:暴露内皮下粘附分子，促血小板聚集,内皮下的胶原纤维暴露，从而激活,因子，内源性凝血系统被激活。,内皮促凝作用增强：表达组织因子,激活外凝系统,抗凝作用减弱：TFPI、AT-III、TM减少,纤溶作用减弱：t-PA和PAI-1比例失调，t-PA减少,血管收缩和痉挛：ET、PAF增多，PGI2和NO减少 血流变慢，有利于,血栓形成,第六页，共64页。,图,9-1,凝血瀑布反应过程：,TF,：组织因子；,PL,：磷脂；,Fbg,：纤维蛋白原；,SFM,：,可溶性纤维蛋白单体,；,Fibrin,：交联的纤维蛋白；,“,a”,的表示活化因子,凝血酶原激活物的形成,凝血酶的形成,纤维蛋白的形成,4,万倍,凝 血 系 统,第七页，共64页。,血小板的粘附与活化,形成纤维蛋白,纤维蛋白原,聚合,血管性血友病因子,粘附,释放,因子,I,纤维蛋白原,、,因子,II,凝血酶原,、,因子,III,组织因子,第八页，共64页。,抑制,II,X,活化,促,t-PA,u-PA,释放,抗 凝 血 系 统,体液抗凝系统,(续),第九页，共64页。,纤溶酶原 纤溶酶 抑制物,外激活途经,：,t-PA,u-PA,内激活途径,：,IIa,f,K,Fbg FDP Fbn,(A,B,C,X,Y,D,E),1,、纤溶酶原的激活,2,、纤维蛋白的降解,纤 溶 系 统,第十页，共64页。,1.,兔体外血栓形成模型,造模,原理,：,血流缓慢或有涡流,血小板进入边流,增加黏附于管壁的可能性,凝血因子易于在局部堆积和活化，启动,凝血过程,血液接触异物能使凝血系统和血小板激活,第十一页，共64页。,造模方法,：,Rabbits anesthetized with intramuscular injections of 5 mg/kg xylazine(,甲苯噻嗪,)and 30 mg/kg ketamine hydrochloride,maintained diluted ketamine(2 mg/ml,IV)at a rate of 1.53 mg/kg/hr,Mechanical ventilation via a tracheotomy,Body temperature monitored with a rectal probe and maintained at 37C using a water-jacketed heating blanket.,Extracorporeal circulation(ECC,4hrs)by cannulating the left carotid artery for ECC inflow and left femoral vein,（,or right external jugular vein,）,for ECC outflow,通过肌内注射,5mg/kg,赛拉嗪（甲苯噻嗪）和,30mg/kg,氯胺酮盐酸盐麻醉的兔子以,1.53mg/kg/hr,的速率维持稀释的氯胺酮（,2mg/ml,，,IV,）,通过,机械通气行,气管切开术,用直肠探针监测体温，并使用水套加热毯维持在,37,。,体外循环（,ECC,，,4,小时），通过插管用于,ECC,流入的左颈动脉和用于,ECC,流出的左股静脉（或右外颈静脉）,第十二页，共64页。,15cm,，,1/4 inch,polyurethane,catheter,15cm,，,1/4inch,亚安酯,catheter,颈总动脉,股静脉,造模方法,聚氨酯导管,第十三页，共64页。,Platelet aggregation using a Chrono-Log optical aggregometer.,Obtain,PRP and PPP by centrifugation,100%light transmission set by PPP and 0%by PRP,模型评估和应用,第十四页，共64页。,Flowcytometry detection:,Platelet activation,P-selectin(CD62P)expression,Activated GP IIb/IIIa(fibrinogen receptor),Leukocyte activation,Monocyte MAC-1(CD11b/CD18)and CD14,expression Nutrophil MAC-1 and CD14 expression,Platelet-leukocyte adhesion,Platelet marker(CD61,CD42)and leukocyte marker,(CD11b),double stained,流式细胞术检测：,血小板活化,P-,选择素（,CD62P,）表达，,活化,GP IIb/IIIa,（纤维蛋白原受体）,白细胞活化,单核细胞,MAC-1,（,CD11b/CD18,）和,CD14,表达,Nutrophil MAC-1,和,CD14,表达,血小板白细胞粘附,血小板标志物（,CD61,，,CD42,）和白细胞标志物,（,CD11b,），双染,模型评估和应用,第十五页，共64页。,Thrombus quantitation:,Circuits removed after 4 hrs on ECC,Rinsed with normal saline,Residual thrombus in the larger tubing of ECC,photographed,Image quantitated using Image J imaging software,血栓定量：,在,ECC,上,4,小时后，移除电路,用生理盐水冲洗,拍摄在,ECC,的较大管中的残余血栓,使用,Image J,成像软件进行图像定量,模型评估和应用,第十六页，共64页。,Biomaterials.2010 Apr;31(10):2736.,模型评估和应用,第十七页，共64页。,造模,原理,：,血小板接触粗糙面发生粘附激活,血小板因,粘附而激活，,因激活,而聚集，形成白色血栓,2.,大鼠,血栓形成模型,第十八页，共64页。,造模方法：,麻醉后,行,气管插管,分离一侧颈总动脉和另侧颈外静脉,（股,静脉,）,颈总动脉和,股,静脉之间接三段相连的聚乙烯管,管中充满肝素生理盐水,中段内放一段丝线,经一定时间后取出沿丝线形成的血栓,第十九页，共64页。,颈总动脉股静脉,造模方法,第二十页，共64页。,模型评估和应用：,剥离,沿丝线形成的血栓,，直接,称,量,血栓,湿重和干重,方法简便可靠，应用于检测处理因素（如,药物,）对血小板粘附和聚集功能,的,影响,第二十一页，共64页。,3.,冠状动脉,血栓形成模型,造模原理,:,直流电（,1.5mA,）刺激颈动脉壁可使血管损伤,血管内膜变得粗糙不平,引起血小板黏附、聚集和释放反应,促进凝血活性；同时，受损内膜暴露胶原纤维激活内源性凝血系统,还可通过释放组织因子激活外源性凝血系统,导致动脉管腔内逐渐形成肉眼可见的混合血栓。,第二十二页，共64页。,造模方法,犬经麻醉、人工呼吸、开胸剪开心包膜,左房插管备注射,药物用。,分离冠状动脉左旋支,用,1.5mA,直流电刺激左旋支,6,小时以,破坏血管壁,促进血栓形成。,同时记录冠脉血流量、动脉血压、心外膜电图。,6,小时后处死动物并从左心房插管注射,20%,活性蓝,(1ml/5kg),以测定左室心肌梗塞的大小。,观察血栓形成,的百分,率,，并称量,血栓重量,第二十三页，共64页。,模型评估和应用,该,模型,所形成的血栓组成和形态近似人,冠状动脉,，适用于冠状动脉急性血栓形成的机制、防治研究。,第二十四页，共64页。,4.,家兔耳缘静脉血栓,形成模型,血流速度变慢，促进血液凝固,凝血酶,使纤维蛋白原转变成纤维蛋白单体,凝血酶,使,XIII,激活，后者使纤维蛋白单体转变,成纤维蛋白多聚体，导致血液凝固,凝血酶,激活蛋白,C,导致,tPA,释放，后者使纤溶酶,原,激活,凝血酶,同时能直接,激活纤溶酶,，使纤维蛋白多,聚体降解导致血栓溶解,造模原理,:,第二十五页，共64页。,家兔耳缘静脉分离出,2cm,长的静脉段,用,丝线,同时,结扎,远心,端,和近心,端,并用,血管,夹夹住两侧分枝以阻止血流,流入,用,针头抽去该段血液,注入凝血酶,(20NIH,凝血酶单位,/,毫升,),松,开,血管,夹使血,液,流入,再夹住分枝使静脉段内形成血块,撤去血管,夹,放开结扎线,用透射光观察血栓消失及血流恢,复时间,造模方法：,第二十六页，共64页。,模型评估和应用,本模型形成的血栓为红色血栓,方法简便,主要用于溶栓,药物,溶栓,作用,的观察。,第二十七页，共64页。,二,.DIC,的动物模型,第二十八页，共64页。,第二十九页，共64页。,弥散性血管内凝血,(DIC),是一种由不同原因引起的以,全身性血管内凝血系统激活,为特征的获得性综合征，表现为先发生广泛性,微血栓形成,，,继而因大量凝血因子和血小板,被消耗,（,有时伴有,纤溶亢进,），,导致多部位,出血、休克、器官功能障碍及微血管病性溶血性贫血,。,第三十页，共64页。,DIC,高凝期:,血小板的激活,1)血小板激活物：凝血酶,ADP,TXA,2,PAF,胶 原,FN,vWF,等,2),血小板的作用：为凝血因子提供表面反应场所,*,变形、粘附、聚集、收缩,*,释放,ADP,5-HT,PAF,TXA,2,第三十一页，共64页。,DIC,的发病机制示意图,DIC,的发生发展机制,第三十二页，共64页。,发生机制,主要表现,实验室检查,高凝期,凝血系统与,Pt,激活,IIa,微血栓形成,血液处于高凝状态,凝血时间缩短,粘附性,消耗性低凝期,凝血因子和血小板因消耗而减少,血液处于低凝状态,有出血表现,血小板计数,凝血酶原时间,纤维蛋白原含量,出血时间,凝血时间,继发性纤溶亢进期,产生大量纤溶酶；纤维蛋（原）降解产物形成,明显出血,FDP,凝血酶时间,3,P,试验（+）,血小板,纤溶系统激活,高凝状态 微血栓 低凝状态,DIC,的发生发展机制,多发性出血,第三十三页，共64页。,实验对象：成年家兔，雌雄随机,1.,家兔,DIC,模型的复制,第三十四页，共64页。,造模原理,正常体内循环血液中不含组织因子，当组织损伤或内皮细胞和白细胞激活时，组织因子能释放或暴露于循环血液启动外源性凝血过程。兔脑粉含有组织因子，静脉注射兔脑粉后通过激活外源性凝血途径引起,DIC,.,第三十五页，共64页。,兔脑粉浸液的制备：,健康成年家兔安乐处死后,即刻开颅摘,取兔脑，除去血管、脑膜和其它结缔组织，用,PBS,洗净后，置于研钵中伴丙酮研磨成粥状悬液，静置数分钟后弃上清液，再,加入丙酮研磨重复前述步骤多次，直至脑组织完全脱水成白色粉末，置,4,o,C,保存待用。,造模方法：,第三十六页，共64页。,称重后，用,20%,乌拉坦,4ml/kg,耳缘静脉注射麻醉,动物,用生理盐水配制,4,兔脑粉溶液，按,2ml,kg,体重计算兔脑粉溶液，加生理盐水稀释至,20m1,后，由耳缘静脉缓慢注入（,10min,）。,分别于注入兔脑粉溶液前,15min,、注入后,15min,和,45min,，记录家兔的血压和呼吸，并取血置于有肝素的注射器中，以测定,3P,试验、,PT,、纤维蛋白原、血小板计数。,造模方法,复制,DIC,模型：,第三十七页，共64页。,凝血酶原时间,(PT),测定,P,试液配制：取兔脑粉,02g,，加入,5ml NS,充分混匀，置,C37,o,C,恒温水浴箱内孵育,1hr,，孵育期间用玻璃棒搅拌,3,至,4,次，孵育后混匀、离心,(1000rpm x 5min,）,取上清液与等量氯化钙（,0.025mol,L,）溶液混匀。,取被检血浆,0.1ml,，置于小试管内放于,37,水浴中。,取待测血浆,0.1ml,加入,P,试液,0.2ml,，轻轻地侧动，直至液体停止流动或出现粗颗粒，即为凝血酶原时间,.,重复,3,次，取平均值,家兔正常值为,6,8sec,。,造模方法,检查急性,DIC,的几种血液学常规方法：,第三十八页，共64页。,血小板计数,吸,取,20l,全血加入到,0.38ml,血小板稀释液,中混匀，,用滴管将上述混悬液一小滴滴入,血球计数板内,，静置,15min,后，用高倍镜计数。数,5,个方格内之血小板数，乘以,1000,，即得每立方毫米,血小板数,。,造模方法,第三十九页，共64页。,鱼精蛋白副凝实验,(,3P,实验,),取全血置于,EP,管中，离心（,5000rpm x 3min,）后，取上清液即血浆。,取血浆,0.4ml,置于试管中，加入,0.1ml 1%,硫酸鱼精蛋白液混匀。,室温下静置,30min,后摇动试管，出现白色纤维或凝块者为阳性，均匀浑浊而没有出现白色纤维者为阴性,。,造模方法,第四十页，共64页。,鱼精蛋白,游离单体(,FM),多聚体凝块(Fbn),Fbg FM Fbn,a,X,a,FDP,PLn PLn,FMX,(,可溶性复合物,),(,A,B,C,X,Y,),3,P,试验:,血浆鱼精蛋白副凝试验,（,plasma protamin paracoagulation test,）,第四十一页，共64页。,血清纤维蛋白,(,原,),含量测定,(,饱和盐水法,),取血浆,0.5m1,置于,12X100mm,的试管中，加入饱和氯化钠溶液,4.5m1,，充分混匀，置于,37,水浴中孵育,3min,，取血后再次混匀，用,721,型分光光度计比色，测定光密度,.,以生理盐水代替饱和氯化钠溶液，进行同样操作作为对照。,对照管调零点，测出光密度,(,波长,520mm),后，按下式计算纤维蛋白原含量：,测定管光密度,1000=mg%,0.5,造模方法,第四十二页，共64页。,动物死后观察各脏器 的 变 化,造模方法,尸检,第四十三页，共64页。,三,.,贫血的动物模型,贫血,是指人体外周血红细胞容量减少，低于正常范围下限的一种常见的临床症状。,第四十四页，共64页。,1,、缺铁性贫血动物模型,造模原理：,缺铁性贫血,（,iron deficiency anemia,，,IDA,）是,指各种原因引起的,缺,铁导致红细胞生成减少而导致的贫血。通过,低铁饲料,喂养动物使,铁,摄入减少，外,加多次少量放血,使铁丢失，造成体内,铁,的,缺乏,第四十五页，共64页。,造模方法,实验动物：选用,4,周龄,SD,大鼠，雌雄不拘，体重,65g,左右，,HGB130g/L,。,建模方法：采用,EDTA,浸泡处理以去除饲料中的铁,（,低铁饲料,）后喂养动物,。,采用去离子水作为动物饮水，以排除饮水中铁离子的影响,。,在低铁饲料饲喂,2,周后进行，常用尾静脉放血法，,1,1.5ml/,次，,2,次,/,周。,第四十六页，共64页。,饲料中的含铁量是诱导,IDA,模型的关键,：,（,1,）,饲喂含铁量,15.63mg/Kg,的饲料,35,天，,SD,大鼠出现典型,IDA,表现,；（,2,）,饲喂含铁,40.30mg/Kg,的饲料,SD,大鼠出现缺铁，但并不表现贫血症状。,模型指标：（,1,）,HGB100g/L,；（,2,）血象：红细胞体积较正常红细胞偏小，大小不一，中心淡染区扩大，,MCV,减小、,MCHC,降低；（,3,）血清铁降低，,60mol/L,。,用于,缺铁性贫血,药物作用和,缺铁性贫血,机制的研究,，,但,不,适用,于铁吸收不良相关的防治研究。,模型评估和应用,第四十七页，共64页。,2,、溶血性贫血动物模型,溶血性贫血,(hemolytic anemia,),是一种常见的贫血类型，是指由于某种原因使红细胞存活期缩短,(15-20,天）,，破坏增加，超过了骨髓代偿能力,（,6-8,倍）,所引起的一类贫血，是常见的造血系统疾病。,第四十八页，共64页。,造模原理：,动物注射一定量的乙酰苯肼,(acetylphenylhydrazine,APH),，,APH,是一种强氧化剂，能特异性地对红细胞起缓慢而进行性地氧化损伤作用，尤其是干扰红细胞内的葡萄糖,-6-,磷酸脱氢酶，促进血红蛋白变性而形成海氏小体，也可直接破坏红细胞的膜蛋白和脂类，使膜溶解破裂，红细胞崩解，造成溶血性贫血。,第四十九页，共64页。,造模方法,：,小鼠第,1,、,4,、,7,天皮下注射,APH,生,理,盐水溶液,0.2g/kg,、,0.1g/kg,、,0.2g/kg,，第,9,天造模成功，其,他给药方法也可以造成此模型。,大鼠,第,1,、,4天,皮,下,注射,APH,生理盐水溶液,0.16g/kg,、,0.08g/kg,，第,8,天造模成功；或两次剂,量均为,0.2g/kg,，第,10,天造模成功。,家兔 以,2,APH,生理盐水溶液给实验动物皮下或,肌内注,射,2,3,次，剂量为,0.1g/kg,，即可建立溶,血性贫血模型。,第五十页，共64页。,外周血血红蛋白和红细胞进行性下降；网织红细胞、海氏小体和白细胞总数则显著增多。,本方法建模周期短，操作简便，模型动物症状和外周血象、血细胞的生化学变化与人类溶血性贫血基本相似，为研究实验性溶血性贫血提供了一种简易模型。,模型评估和应用,第五十一页，共64页。,3.,失血性贫血动物模型造模原理：,急性失血后贫血,(posthemorrhagic anemia),是快速大量出血引起的贫血；慢性失血后贫血是由于长期中度出血所致的小细胞性贫血。,通过人为放血导致动物血容量和血细胞的减少，从而导致动物出现短期的贫血特征，以此制作失血性贫血模型。,第五十二页，共64页。,造模方法,：,小鼠,:,眼眶后静脉丛放血,6,8,滴,(,约,0.5ml),，隔日,放血,1,次，连续,5,次可形成慢性失血性贫血模型。,每天剪尾放血,0.5ml,，连续,7,天，也可造成贫血。,大鼠,:,大鼠剪尾放血,1.5,2ml,，隔日,1,次，连续,5,次，可形成慢性失血性贫血。,家兔或犬,:,从动物静脉或者动脉采集全血容量的,1/3,，每天,1,次，反复几次，即可造成失血性贫血,动物模型。,第五十三页，共64页。,模型评估和应用,：,通过较短时间内向体外大量放血，造成急性失血性贫血。也可通过反复多次放血，造成慢性失血性贫血。,该方法操作简单，指标明确，但样本间失血量较难控制完全一致。该模型用于一般失血性贫血的发病机制及其新药药效学筛选研究。,第五十四页，共64页。,4,、再生障碍性贫血动物模型,再生障碍性贫血（,aplastic anemia,），简称再障，系多种病因引起的造血系统退行性变，红骨髓总容量不断减少，黄骨髓不断增加，造血衰竭，以全血细胞减少为主要表现的一组综合征。,建模方法包括,化学,建模、物理建模及免疫介导等。,再障的发病机制尚未完全阐明。,第五十五页，共64页。,化学方法建模,：,造模原理：,化学药物的毒副作用抑制骨髓造血功能，诱导,再生障碍性贫血,。,腺嘌呤可导致肾脏病变，使,促,红细胞生成素（,EPO,）分泌不足，进而导致红系和巨核系造血障碍,。,白消安可,选择性抑制骨髓,。,苯类化学物质进入动物体内后，在骨髓富集（可达血清浓度的,20,倍），对骨髓有较强的抑制作用，可导致再障,。,第五十六页，共64页。,腺嘌呤致大鼠肾性贫血模型,：,实验动物：,SD,大鼠，雌雄不拘。,利用饲喂含腺嘌呤,0.75%,，投饲量,300mg/kg/d,，连续喂养,6-7,周，获得肾衰竭贫血模型,实验动物红细胞、血红蛋白及红细胞压积等主要红系指标均、血小板均显著下降。,第五十七页，共64页。,白消安,致骨髓抑制的再障模型,：,实验动物：小鼠、,SD,大鼠、家兔，雌雄不拘。,建模方法：,白消安（,马利兰,）,（,1,）口服给药，,15mg/kg/,周或,30mg/kg/,周，总给药剂量达到,120-150mg/kg,时，可致家兔的再障，出现全血细胞减少、淋巴细胞比值增加、骨髓黄化和骨髓纤维化。（,2,）一次性给药，,20-35mg/kg,腹腔注射，可致大鼠再障。（,3,）小鼠,每天,腹腔注射,15mg/kg,，持续,8-9,天，停药,60,天后，可使,骨髓,造血功能抑制。,出现血细胞减少和骨髓有核细胞降低，建模稳定、实验动物存活率高。,第五十八页，共64页。,苯致骨髓抑制的再障模型,：,实验动物：,CD1,小鼠、家兔。,建模方法：苯类化学物质进入动物体内后，在骨髓富集（可达血清浓度的,20,倍），对骨髓有较强的抑制作用，可导致再障。,（,1,）皮下注射给药，苯与玉米油,1:1,混合物，,4.0ml/kg,，,3,次,/,周，共给药,25,次，可致,CD1,小鼠再障，表现为全血细胞减少、骨髓黄化、脂肪细胞等非造血细胞数目增多，骨髓间质血窦充血、出血伴水肿。,（,2,）皮下注射给药，纯苯，,0.5-1.0ml/kg/,天，,3,次,/,周，连续给药,2-3,周，可致全血细胞减少、造血细胞减少。,第五十九页，共64页。,化学毒物诱导,再障动物模型,与人类,再生障碍性贫血,有相似之处，该模型成功率高，结果稳定，但造模时间过长，易造成骨髓永久损害。,可作再生障碍性贫血的发病机制研究、疾病进展研究和治疗药物筛选的动物模型。,模型评估和应用,第六十页，共64页。,物理方法建模,造模原理：,放射,物质产生的,高能射线可穿透机体，起,DNA,损伤，干扰,DNA,复制，阻断有丝分裂，对造血干细胞等分裂增值活跃的细胞有强抑制作用,，可使动物,造血干细胞,和袓细胞减少，破坏骨髓,造血细胞,的增殖能力。,第六十一页，共64页。,造模方法,-,外部照射建模法,：,实验动物：小鼠雌雄不拘。,建模方法：,射线等高能射线可穿透机体，起,DNA,损伤，丝分裂，对造血干细胞等分裂增值活跃的细胞有强抑制作用。,使用钴,60,等放射性同位素，,照射剂量,3-4Gy,（戈瑞），可使造血干细胞数量减少；,亚致死剂量（,6.0Gy,）,照射,以后，可致小鼠全血再障，维持时间较长，但辐照的剂量不好控制，稍大易致小鼠死亡，稍低则个别小鼠不易达到造血抑制效果。,第六十二页，共64页。,造模方法,-,内部照射建模法,：,实验动物：小鼠，雌雄不拘。,建模方法：,放射性同位素,153Sm,（钐）、,89Sr,（锶）、,32P,（,32,磷）、,186Re(186,铼,),、,188Re(188,铼,),、,105Rh,（,105,铑）、,177LU,（,177,镥）和,60Co,（,60,钴），能产生,射线及亲骨性特点，进入人体后对造血组织进行内照射。,将,32,磷,给小鼠一次静脉注射,1.4mCi/kg,体重可致再障；,氯化锶，按每克体重,6,或,2 Ci,（居里）,腹腔注射给予,1112,周龄的小鼠，,6Ci,组动物于,35d,后全部死亡,2Ci,组动物全部存活。,6Ci,组的小鼠于,21d,后股骨骨髓显示为脂肪髓。全血细胞减少，骨髓有核细胞数和,CFU-S,产率都减少。,第六十三页，共64页。,本,模型,与人类,再生障碍性贫血,相似，该模型成功率高，结果稳定，但需要特殊设备及防护，亦为防护照射损伤的研究提供了良好实验方法。,模型评估和应用,第六十四页，共64页。,