激活剂抑制剂.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验十二,激活剂和抑制剂对酶活性的影响,一、,实验目的,(1)了解激活剂和抑制剂对酶活性的影响。,(,2),学习鉴定激活剂和抑制剂影响酶活性的原理和方法。,二、,实验原理,在酶促反应过程中，酶的活性常常受某些物质的影响，有些物质能使酶的活力增加，称为酶的,激活剂,；有些物质它们并不引起酶蛋白变性，但能使酶分子上的某些必需基团发生变化，使酶的活性降低，称这些物质为酶的,抑制剂。,酶的激活剂种类：,一些简单的无机离子，如,Na,+,、,K,+,、,Ca,2+,、,Mg,2+,、,Zn,2+,等阳离子和,Cl,、Br,、,I,、,PO,4,3,、,NO,3,等阴离子；,一些中等大小的有机分子，如抗坏血酸、半胱氨酸、谷胱苷肽等；,能除去抑制剂的物质也称为激活剂，如,EDTA,能除去重金属，因而能解除重金属对酶的抑制作用。,酶的抑制剂种类：,重金属离子,(Ag,+,、,Hg,2+,、,Pb,2+,、,Cu,2+,等,),、砷化物、氟化物、生物碱、有机磷农药等都是抑制剂。,抑制作用的类型,不可逆性抑制,(irreversible inhibition),可逆性抑制,(reversible inhibition),：,竞争性抑制,(competitive inhibition),非竞争性抑制,(non-competitive inhibition),反竞争性抑制,(uncompetitive inhibition),有机磷化合物对羟基酶的抑制,激活剂和抑制剂影响酶活性常具有特异性，如,Mg,2+,对脱羧酶、烯醇化酶等有提高活力的作用，而对肌球蛋白,ATP,酶则有降低活力的作用,激活剂和抑制剂影响酶活性的剂量是很少的，并且同一种酶可因激活剂的浓度不同而作用不同，如,Cl,在低浓度时为唾液淀粉酶的激活剂，而在高浓度时（达到,1,3,饱和度）就可抑制唾液淀粉酶的活性。,唾液,由三对大唾液腺（下颌腺、肋腺和舌下腺）分泌的液体和口腔壁上许多小粘液腺分泌的粘液，里面含有,唾液淀粉酶,淀粉酶一般作用于,可溶性淀粉,、直链淀粉、糖元等,1,，,4-,葡聚糖，,水解,1,，,4-,糖苷键的酶。根据作用的方式可分为,-,淀粉酶,（,EC3,2,1,1,）与,-,淀粉酶,（,EC3,2,1,2,）。可以催化淀粉水分解为麦芽糖。唾液淀粉酶发挥作用的最适,pH,值在中性范围内。,在本实验中，以稀释的唾液作为淀粉酶液。唾液内的淀粉酶可将淀粉逐步水解为不同阶段的产物，它们遇碘呈不同的颜色，以此来定性研究激活剂和抑制剂对淀粉酶活性的作用,(,Cl,是唾液淀粉酶的激活剂，而,Cu,2+,则是它的抑制剂,),。直链淀粉,(,即可溶性淀粉,),不同水解阶段的产物与碘反应的颜色如下：,不同水解的产物：淀粉,紫色糊精,红色糊精,麦芽糖及少量葡萄糖,与碘的颜色：呈,蓝色,呈,紫色,呈,红色,不显色,三、,实验仪器与试剂,1,实验材料,新鲜唾液，淀粉。,2,实验器材,普通试管：,20mL,4,；移液管：,lmL,4,，,2mL,1,，,5mL,l,；,100mL,容量瓶，,150mL,三角瓶；恒温水浴箱；试管架；漏斗。,3,实验试剂,：,0.1%,淀粉溶液,1%NaCI,溶液,1%CuSO4,溶液,1%Na2SO4,溶液,KI-I2,溶液：称取碘化钾,3g,及碘,1g,溶于,100mL,蒸馏水中。,0.2mol/L pH6.6,的磷酸缓冲液,四、操作方法,1,唾液淀粉酶液的制备：取唾液,lmL,放人,100mL,容量瓶中，用蒸馏水稀释至,100mL,，用脱脂棉花过滤至,150mL,三角瓶，备用。唾液稀释倍数因人而异，可稀释,50,400,倍，甚至更高。,2,激活剂和抑制剂对唾液淀粉酶活性的影响,取试管,4,支，按下表操作。,五,注意事项,如,1,，,2,，,3,，,4,管呈色反应无明显差别，可能是唾液淀粉酶活力太高或太低，若酶活力太高可将酶稀释后重做；若酶活力太低，可延长保温时间或增加酶的浓度。,