筛选杂交瘤细胞细胞培养筛选.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体,1、,概念,动物细胞融合,也称细胞杂交,，是指,两个或多个,动物细胞形成一个细胞的过程,一、,动物细胞融合,2、原理：,膜的流动性,一、,动物细胞融合,3、结果：形成杂交细胞。,杂交细胞：,融合后,形成的,具有原来两个或多个细胞遗传信息的,单核,细胞,。,4、诱导方法：,聚乙二醇（PEG）、,灭活的病毒、电激等。,5、过程：,3、过程：,细胞相互凝集,膜上蛋白质分子和脂质分子重新排布,细胞膜打开,细胞发生融合,病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜的糖蛋白发生作用，使细胞相互凝集。,6、优点：,突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能,7、应用：,用于研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培养等的重要手段。,最重要的用途：制备单克隆抗体,2、,动植物细胞在结构上有何区别？这与它们杂交或融合过程有什么影响？,3、植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？,离心、振动、电激等物理方法；PEG等化学方法,问题讨论,动物细胞无细胞壁，动物细胞融合过程中不须去除细胞壁和再生出细胞壁。,、植物体细胞杂交最终得到的是完整的植物个体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗？,不能，只能得到杂交细胞,4、动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还有其他方法吗？,能,，,还可以利用灭活的病毒（生物方法）进行诱导,问题讨论,、动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理是否相同？,相同，都是细胞膜的流动性,问题讨论,6、为什么要用,灭活,的病毒？,病毒一般对生物体是有伤害的。,仙台病毒,物理或,化学方法,丧失感染活性,保留融合活性,主要用于制备,单克隆抗体,获得杂种植株,物理、化学方法,（同左）,灭活的病毒,物理（离心、振,荡、电激）,化学（聚乙二醇）,使细胞分散后诱,导细胞融合,去除细胞壁后诱,导原生质体融合,细胞膜的流动性,细胞膜的流动性,用途,诱导方法,步骤,融合的原理,动物细胞融合,植物体细胞杂交,比较项目,8、,植物、动物细胞融合的比较,抗体是由何种细胞产生的？2.抗体是如何产生的？,？,二、,单克隆抗体,（一）获得抗体的传统方法,1、方法：,向动物体内反复注射某种抗原，使动物产生抗体，从动物血清中分离所需抗体。,2、缺点：,产量少、纯度低、特异性差,.,.,3、解决问题的设想:,免疫反应过程中，,每一个,B淋巴细胞,只分泌一种,特异性抗体。,克隆单一的B淋巴细胞，形成细胞群，获得大量的单一抗体。,4、面临的新问题：,一个,B淋巴细胞不可能在体外培养条件下无限增殖的。,.,.,1,、如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？,问题讨论,提示：,1.,什么样的细胞可以产生抗体？,2.什么样的细胞可以无限增殖？,2,、瘤细胞和癌细胞有何区别？,共同点：,两者都有无限增殖的能力,不同点：,瘤细胞不能转移,1、,设计方案：,一个B淋巴细胞,只分泌一种特异性抗体,小鼠骨髓瘤细胞,能无限增殖,杂种细胞,（二）,单克隆抗体,的制备,2、,单克隆抗体制备过程,注射抗原,B淋巴细胞,骨髓瘤细胞,细胞融合、,筛选,杂交瘤细胞,细胞培养,筛选,，继续培养,足够数量的、能产生特定抗体的细胞群,体外培养,注射到小鼠腹腔,单克隆抗体,（选择性培养基）,诱导其融合的方法有哪些？,单克隆抗体的制备,单克隆抗体的制备,B BB,B瘤,瘤瘤 瘤,、细胞融合后培养液中有几种细胞？,筛选杂种细胞,思考：,杂交瘤细胞,、制备过程中应用哪些细胞工程技术手段？,细胞融合技术、细胞培养技术,3,、,单克隆抗体的概念：,化学性质单一，特异性强的抗体,4,、,单克隆抗体的优点：,特异性强，灵敏度高，并可大量制备。,诊断疾病,（识别作用，如同位素标记单克隆抗体，可诊断肿瘤、心血管畸形等）,（三）,单克隆抗体的应用,优点：,准确、高效、简易、快速,用于治疗疾病和运载药物（,主要用于癌症治疗，也可运载药物，如,“,生物导弹,”,）,（,导向作用，,作为载体，,生物导弹=单克隆抗体+药物，,用于,治疗肿瘤）,（位置准确、疗效高、副作用小）,小结,两个过程,动物细胞培养过程,单克隆抗体制备过程,三个“一”,一个诱导细胞融合的新方法,灭活病毒,一个新细胞杂交瘤细胞,一个优势单克隆抗体特异性强灵敏度高的优势,单克隆抗体,下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的抗体实验方案,2、该方案能达到预期效果吗？为什么？,4、图中B为_过程，常用_作为诱导剂，该细胞继承_的遗传特性，既能_,又能_。,1、该实验方案的目的是_,3、A是从小鼠的脾脏中取得_,该细胞能够产生_,5、C过程指细胞培养，该过程包括_培养和_培养两个阶段，其中_代以内的的细胞属于细胞株。,制备单克隆抗体,B细胞,抗体,细胞融合,灭活病毒,双亲细胞,分泌抗体,无限增殖,原代,传代,50,B,体外培养,骨髓瘤细胞,杂交瘤细胞,足够数量的细胞群,注射到,小鼠腹腔,A,C,世界上第一只克隆羊“多莉”的培育过程如图所示，请据图回答：,乙,甲,a,b,c,d,e,f,(1)图中的甲为苏格兰绵羊，乙为多莉羊。那么，a和b是通过_分裂形成的，其DNA含量是体细胞的 _,_,_ ；c肯定是_ 细胞，乙的遗传性状与提供 _的绵羊 一致.,减数,一半,体,细胞核,乙,甲,a,b,c,d,e,f,(2)产生 甲和乙的过程分别是和,（3）在形成乙是的过程中，需要将d的细胞核取出，将c细胞核移入d细胞内，此技术叫。所需的受体细胞大多采用动物卵细胞的原因是（4）绵羊的白色对黑色为显色。若甲是白色绵羊，要判断它是否纯合体，选用与它交配的绵羊最好是-,有性生殖,克隆,核移植,卵细胞大，易于操作；卵细胞具有继续分化的潜能,。,黑毛,乙,甲,a,b,c,d,e,f,（5）在产生多莉羊时，需将e细胞形成的早期胚胎移入另一头母羊（f）子宫里，这种技术在细胞工程中叫,（6）继植物组织培养后，克隆绵羊的培育成功，证明动物细胞也有,（7）在繁殖多莉羊的过程中，是否遵循孟德尔遗传规律？多莉羊的性状与d羊、c羊及f羊的关系是什么？,胚胎移植,全能性,不遵循，多莉羊的多数性状象c羊，个别性状象d羊，发育也会受到f羊影响,。,