细菌感染的检查方法与法治原则.ppt

单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,支 原 体、衣 原 体、立 克 次 体,主讲老师：江振友,支原体属和脲原体属,支原体（,Mycoplasma,）,1.,能在人工培养基中生长,2.,能独立生活,3.,最小原核细胞型,微生物,4.,无细胞壁,5.,二分裂繁殖,6.,多形态性,“,油煎蛋样”,菌落,分 类,柔膜体纲,(,Mollicutes,),支原体目,(,MycoPlasmatales,),下分,3,个科：,支原体科（,MycoPlasmataceae,）；,2,个属,:,支原体（,Mycoplasma,）,脲原体（,Ureaplasma,无胆甾原体科（,Acholeplasma-taceae,），,生长时不需要外源性胆固醇；,螺原体科,（,Spiroplasmataceae,），,生长至一定阶段呈螺形。,人体分离,:20,种，,其中,8,种是致病或条件致病菌,:,肺炎支原体,(,M.pneumoniae,Mpn,),生殖支原体,(,M.geuitalium,Mg,),人型支原体,(,M.hominis,Mh,),发酵支原体,(,M.fermentants,Mf,),穿透支原体,(,M.penetrans,Mpe,),梨支原体,(,M.pirum,Mpi,),关节炎支原体,(,M.arthritidis,Mart,),解脲脲原体,(,U.urealyticum,Uu,),支原体与细菌,L,型比较,性状,支原体,细菌,L,型,滤过性,有,有,细胞壁,无,无,油煎蛋状菌落,形成,形成,对青霉素,抵抗,抵抗,对胆固醇需要,生长需要,不一定需要,来源,自然界、人与动物,由细菌在环境条件下诱导形成,回复变成细菌,不能,能,遗传性,与细菌无关,与原细菌相同,肺,炎支原体,形态与结构,大 小,:,可通过滤器,光镜下可观察,细胞壁,:,无,形 态,:,球形、球杆形、分枝丝状或念珠状等,细胞膜,:,三层,:1.,蛋白质,2.,脂质,(,胆固醇较多,),3.,蛋白质,染 色,:,姬姆萨染色法,:,淡紫色或蓝色,核 酸,:,二种,(DNA,和,RNA),生长繁殖,繁殖方式,:,二分裂方式,球体延伸、分节断裂、出芽、分枝,繁殖周期,:3,小时,营养要求,:,较高,含动物血清、酵母浸液,酸 碱 度,:pH7.8,8,0,气体环境,:5,CO,2,或,5,CO,2,与,95,N,2,温度与时间,:37,3d,10d,菌落特征,:“,油煎蛋”状菌落,表,25,2,支原体与脲原体的某些生物学特性,抗原构造,主要抗原成分,:,1.,蛋白质,P1,蛋白抗原,:,表面抗原,致病,:,粘附,2.,脂质中的糖脂,抗体,:,产生补体结合抗体,生长抑制抗体,代谢抑制抗体,抵抗,力,理化因素,:,比细菌敏感,(,因无细胞壁,),热,:,弱,50,经30min,死亡,20,可长期保存,耐碱,酸和有机溶剂,:,较敏感,(,消毒剂、清洁剂,),四环素族、红霉素、卡那霉素、氯霉素,:,敏感,青霉素,:,不敏感,致病,性,外源性感染,上呼吸道感染,:,感冒、咽炎、气管炎,支原体性肺炎,（,Mycoplasmal,pneumonia,）,(,原发性非典型肺炎,),（,primary atypical pneumonia,）,临床表现和胸部,X,线,:,肺炎链球菌引起的典型肺炎不同,类似病毒性肺炎,世界各地,密集人群,儿童及青少年多见,秋冬季发病率高,每隔,3,5,年出现一次流行,飞沫传播,潜伏期,2W,3W,感染起病缓慢,临床主要症状,:,发热（约,39,）、头痛、持续性顽固咳嗽、胸痛等。,病人带菌、排菌状态可持续,6W,8W,肺外合并症（神经系统、消化系统及心脏等）发病率高，严重者可致死,致病性,:,粘附是先决条件,也和超敏反应有关,(,共同抗原,),免疫,性,抗体：多种,(,CF,抗体、生长抑制抗体、,杀支原体抗体等,),呼吸道,sIgA,:,有一定作用,非特异冷凝集素,:,1.,和自身免疫有关,2.,患者阳性率为,50,，,常用于辅助诊断。,微生物学检查法,病原分离,特异核酸的检测,血清学诊断,抗原检测,冷凝集试验,病原分离,标 本：咽拭子或痰液,培养基：双相培养基（含马血清、酵母浸液）,SP-4,培养基（提高分离率,30,40气体环境：,5,10,CO,2,温度与时间：,37,，,l,2W,可疑菌落：,1.,糖发酵,2.,溶血性,3.,血细胞吸附,4.,特异抗血清生长抑制试验等,特异核酸的检测,（,1,）聚合酶链反应,(PCR),：,优点：特异性好,敏感性高,快速、简便,靶基因：,16S RNA,基因,P1,蛋白基因,方法：套式,PCR(nPCR,),复合,PCR,限制性片段长度多态性分析,(RFLP),随机引,物,PCR(RAPD),（,2,）,基因探针,根据碱基严格互补配对的特性,特异性强，敏感性不如,PCR,技术,血清学诊断,（,1,）补体结合试验（,CFT,）：,双份抗体效价升高,4,倍以上,诊断,（2,）间接血凝试验,（,IHA,）：,测抗体,2,3,周高峰,（,3,）酶联免疫吸附试验,(ELISA),：,测,IgM,、,IgG,和,IgA,敏感性高,（,4,）,间接免疫荧光试验：,检测,IgM,、,IgG,特异性较强,抗原检测,方法,1:,间接法或直接法,抗体,:,荧光标记多克隆抗体或单克隆抗体,检测标本,:,呼吸道分泌物中抗原,86%,可阳性,方法,2:,双抗体夹心酶联免疫吸附试验,检测标本,:,呼吸道分泌物中抗原,可检出,10,5,CFU/ml,方法,3:,酶联免疫吸附试验捕获法,抗体,:,抗,P1,单克隆抗体,检测标本,:,P1,蛋白,可检出,10,4,CFU/ml,特异性强,3,小时即可,冷凝集试验,辅助诊断非典型肺炎,针对红细胞膜,抗原,冷凝集素属,IgM,5d,10d,出现，,2W,3W,高峰,辅助诊断效价,:,64,128,倍以上,双份效价升高,4,倍以上,特异性和敏感性较低,防,冶,药物,:,四环素类,(,近年来耐药性增加,),大环内酯类,:,首选,(,红霉素、克拉霉素、阿奇霉素,),喹诺酮类,疫苗,:,减毒活疫苗,基因工程疫苗,其它支原体,寄生部位,:,鼻咽腔及泌尿生殖道粘膜,属于正常菌群,引起条件性感染,口腔支原体,:,慢性呼吸道感染,唾液支原体,:,齿槽溢脓,生殖支原体,:,生殖道、呼吸道和关节腔的炎症,流产、早产和新生儿肺炎,发酵支原体,:,类风湿性关节炎,AIDS,相关,(,分离率明显升高,),人型支原体,:,渗出性咽炎、,非淋菌性尿道炎,(,nongonococcal,urithritis,NGU,),卵巢脓肿、产褥败血症,脲原体,属,(,Ureaplasma,),从支原体分出的独立的新属,正常菌群,:,绝大多数,有致病性,:,解脲脲原体,（,U.urealyticum,Uu,),1954,年从,NGU,患者的病灶处分离,类似肺炎支原体,能水解尿素,生物学性状,形态,:,圆形或球杆状,染色,:,革兰染色阴性,温度和酸碱度,:,37,pH 6.0,菌落,:,很小,(,15,m,60,m,放大,200,倍,),称,T,株（,Tiny colony strain,）,敏感性,:,敏感,:,四环素、氯霉素、庆大霉素、,卡那霉素、,0.05%,醋酸铊、,125,g/ml 5-,碘,-2,脱氧尿苷,不敏感,:,青霉素,生化特性,:,水解尿素产氨,致病性,存 在,:,人和动物的口腔、呼吸道、,泌尿生殖道,血清型,:,解脲脲原体,(,Uu,),有,14,个血清型,传播途径,:,性接触传播、母婴传播,所致疾病,(,STD),泌尿生殖道感染,:NGU,、,盆腔感染、宫颈,炎、阴道炎、输卵管炎、慢性前列腺,炎、附睾炎、男女不孕症、反复流产、,早产、死胎,新生儿疾病,:,呼吸道病变、肺炎、脑膜炎,引起男性不孕的原因：,Uu,吸附于精子表面，,使其运动受阻，,并蔽盖了精子识别卵细胞的部位,Uu,产生神经氨酸样物质，,干扰精子与卵细胞结合。,Uu,与精子膜有共同抗原，,从而产生抗精子抗体,立克次体属和巴尔通体属,立克次体属,立克次体特征：,比细菌小,能通过滤器,光镜可见,以节肢动物为传播媒介,有储存宿主,专性细胞内寄生,(,胞浆内,),原核细胞微生物,二分裂繁殖,有,两种核酸,(DNA,和,RNA),，,酶系统不完整,多数人畜共患,对抗生素敏感,所致疾病,:,发热出疹性疾病,对人致病的,:,立克次体属,东方次体属,埃立克体属,柯克斯,体属,立克次体分类及其致病情况见表,26-1,生物学性状,大小,:,(0.3m-0.6m)(0.8m-20m),形态,:,类似球杆菌,多形性,(,球形、哑铃形、长杆状或丝状等,),染色,:,Giemsa,染色法,:,紫色或蓝色,马氏染色法,(,Macchiavello,stain):,红色,排列,:,散在于细胞浆中、核旁成堆,(,斑点热立克次体在胞浆或核内,),培养,:,专性细胞内,(,活细胞内,),寄生,培养方法,:,鸡胚卵黄囊内接种,组织细胞培养,动物接种,抵抗力,:,热、消毒剂,:,较弱,(56,数分钟,0.5%,石碳酸、,0.5%,来苏,75%,酒精中数分钟,),抗生素,:,敏 感,:,氯霉素和四环素,不敏感,:,磺胺类,低温、干燥,:,较强,(-20,或冷冻干燥半年以上,),抗原构造群特异性抗原,种特异性外膜抗原,外斐反应,(Weil-Felix reaction):,斑疹伤寒,等立克次体与变形杆菌某些,X,菌株有共同的耐热多糖类抗原。利用这些变形杆菌菌株代替立克次体抗原，进行定量,非特异凝集反应,（,交叉凝集反应,），以,检测,人或动物血清中的相应,抗体,。协助诊断,斑疹伤寒,恙虫病,滴度超过,1:160,有意义,.,致病性,传播方式：,普氏立克次体：,头虱和体虱（肠上皮细胞）,人是唯一宿主,斑点热立克次体：,第一宿主是蜱（唾液腺）,第二宿主是啮齿类动物,致病机理,过程,:,侵入,-,小血管内皮细胞中繁殖,-,破坏细胞,-,细胞肿胀、浸润、,堵塞血管腔形成血栓,-,皮肤,:,斑疹,-,实质器官,:,相应临床表现,毒性物质,:,内毒素,磷脂酶,A,所致疾病,1.,流行性斑疹伤寒,(,epidimic,typhus),不属于人畜共患病,病原体,:,普氏立克次体,(,R.prowazekii,),媒介,:,人虱,宿主,:,人,季节,:,冬春季,症状,:5,21d,潜伏期,-,高热、头痛、,肌肉痛等,-4,5d:,皮疹,-,神经、心血管和其他器官,病后免疫,:,持久,与地方性斑疹伤寒有,交叉免疫,2.,地方性斑疹伤寒,(endemic typhus),(,鼠型斑疹伤寒,),属于人畜共患病,病原体,:,斑疹伤寒立克次体,(R.typhus),宿主,:,鼠为天然贮存宿主,传播方式,:,鼠蚤或虱,-,鼠间,-,人,-,人虱,-,人,疾病,:,较轻，缓慢，持续时间短，很少,侵害中枢神经系统,病后免疫,:,持久，并与流行性斑疹伤寒,有交叉免疫,3.,恙虫病,(scrub typhus),病原体,:,恙虫病东方次体,(,O.tsutsuganushi,),传播,:,寄生于恙,螨体内,，可经卵传代。人若进入恙螨的孳生地，可能受感染,(,亦称“丛林热”,),症状,:10,14d,潜伏期,-,突然高热，被叮咬处,:,发红,丘疹,水疱,溃疡，周围红晕，上有黑色痂皮，称为焦痂,(,特征,),。附近的淋巴结肿大，皮疹。治疗拖延肺炎、脑炎、,DIC,。,微生物学检查法,(,一),血清学诊断,1.,外斐反应,(,非特异性,),诊断,:,立克次体和东方次体,效价在,1,：,160,以上，或病程中效价增长,2.,补体结合,(CF),反应,(,特异性,),所用抗原,:,可溶性抗原,(,群特异抗原,),洗涤过的颗粒抗原,(,种特异抗原,),诊断,:,斑疹伤寒群、斑点热群、恙虫病、,Q,热,(,二,),立克次体分离鉴定,动物,:,小鼠,(,恙虫病,),雄性豚鼠,(,斑疹伤寒,),防治原则,1.,灭虱、灭蚤、灭鼠,2.,改进环境、个人卫生,3.,死疫苗,4.,广谱抗生素有效,巴尔通体属,(,Bartonella,),特点,:,1.,形态结构与立克次体相似,2.,可以人工培养而非严格细胞内寄生,模式种,:,杆状巴尔通体,(,B.bacilliformis,),生物学性状,形状,:,1.,血涂片,:,球形、椭圆形或弓形杆状；单个或成群,偶见链状,2.,组织中,:,内皮细胞原浆中,单体或圆形团块，,G,-,，,常用,Giemsa,或镀银染色法。,3.,培养中,:,单鞭毛,培养条件,:,1.,需氧,2.,常用,10%,兔血清和,0.5%,血红蛋白的半固体培养基,3.,可在无细胞培养基中生长,4.28-37,10d,以上,致病性,自然宿主,:,人,媒 介,:,节肢动物,（疣肿白蛉）,所致疾病,:,1.,奥罗亚热,-,秘鲁疣,(,Oroya,fever-,verruca,peruviana,),病原体,:,杆状巴尔通体,阶段,:,第,1,阶段,:,发热，贫血,(,奥罗亚热,),第,2,阶段,:,以血管损害为基础的,肉芽肿,(,秘鲁疣,),诊断方法,:,1.,血涂片,2.,用半固体培养基分离培养,2.,细菌性血管瘤,(bacillary,angiomatosis,),病原体,:,亨氏巴尔通体,(,B.henselae,),罗卡利马巴尔通体,(,B.rochalimaea,),易感人群,:,免疫力低下（尤其,AIDS,）,病变组织学特征,:,毛细血管增生等,(,血管瘤,),培养基,:,巧克力色琼脂,含,5%,兔血的心脑浸汁琼脂,3.,猫抓病,(cat-scratch disease),(,猫抓热,),病原体,:,亨氏巴尔通体,症状,:,猫抓伤后,2w,发热,淋巴结肿大，破,溃排脓，亦可头痛、咽痛或出现结膜炎,特点,:,自限性疾病,检查法,:,病变组织切片镀银染色,免疫荧光染色,衣 原 体 属,衣原体,（,Chamydia,）,特点,:,1.,能通过细菌滤器,光镜下可观察,2.,有独特发育周期,3.,不能人工培养,不能独立生活,为专性细胞内寄生,4.,原核细胞型,和病毒的区别,:,有细胞结构,细胞壁类似,G,-,两种类型的核酸,(DNA,和,RNA),有核糖体,以二分裂方式繁殖,有独特的发育周期,对多种抗生素敏感,(,四环素和红霉素,),分 类,存在,:,人类、哺乳动物及禽类体内,分类依据,:1.,抗原构造,2.,包涵体糖原的有无,3.,对磺胺类药物的敏感性,分类,(4,个种,):,1.,沙眼衣原体（,C.,trachomatis,）（,人）,亚种,（,1,）,沙眼生物变种（,Biovar,trachoma,）,14,个血清型,（,2,）性病淋巴肉芽肿变种,(,Biovar,lymphogranunloma,venereum,LGV,),4,个血清型,（,3,）鼠生物变种（,Biovar,mouse,）,2.,鹦鹉热衣原体（,C.,psittaci,）（,人）,3.,肺炎衣原体（,C.pneumonia,）（,人）,4.,家畜衣原体,(,C.pecorum,),表,27-1,3,种致病性衣原体的比较,生物学性状,生活周期包括原体和始体两阶段,光镜下：两种形态,：,原体,（,elementary body,）,始体,（,initial body,）,原体（,elementary body,）,1.,形状：球形，,0.2,0.4m,电镜下：核质致密和少量核糖体,细胞壁坚韧,存在于细胞外,2.,功能,:,（,1,）,有很强的,感染性,（吸附）,（,2,）发育成始体：吸附,-,被吞噬,-,胞膜在原体周围形成空泡,-,原体在空泡中增大,-,始体,始体（,initial body,）,1.,形状：球形，,较原体大,(0.8,1.5m),，,无致密核质，有纤细网状结构,-,也称为网状体,（,reticulate body,）,2.,发育周期,:,原体,-,始体,-,空泡内,-,二分裂,-,子代原体,-,包涵体,（,inclusion,body,）,-,原体成熟,-,释放,-,再感染,(24,48h),(,无细胞外周期,),3.,是繁殖型，无感染性,染色：,1.,Macchiavello,染色法或,Giemsa,染色法,原体：红色或紫色,始体：深蓝色,2.,碘染色法：沙眼衣原体原体：褐色,（因包涵体含糖原）,培 养,方法：,1.,鸡胚卵黄囊,2.,各种传代细胞,(,Hela,细胞,McCog,细胞,),3.,动物实验,：某些可感染小鼠,培养时间：,48,72h,后,观察：包涵体,原体颗粒,始体颗粒,抗原构造,1,属特异性抗原,成分：脂多糖,方法：,CF,试验和,IF,法,2,种特异性抗原,成分：外膜蛋白（,MOMP,）,方法：,IF,法和中和试验,(NT),3,血清型特异性抗原,成分：,MOMP,方法：单克隆抗体微量免疫试验,血清型,:,(1),沙眼生物变种,:14,个,（,A-K,、,Ba,、,Da,Ia,）,(2)LGV:4,个,(L1,、,L2,、,L2a,和,L3),抵抗力,热,:,敏感，,6010min,或,3748h,寒冷：,-50,数年,化学消毒剂：,0.5%,石炭酸，,24h,75%,乙醇，半分钟,抗生素：利福平、四环素、红霉素、,磺胺敏感,青霉素,:,不敏感,致病机理,致病物质：,内毒素相似的物质,致病机理：,1.,抑制细胞代谢，使细胞溶解,2.,引起超敏反应,3.,形成肉芽肿,传播途径：眼眼,眼手眼,性接触传播,产道感染,呼吸道感染,(,不通过节肢动物传播,),所致疾病,1.,沙眼,（,trachoma,）,（,慢性传染性角结膜炎）,病原体：,沙眼生物变种的,A,、,B,、,Ba,、,C,血清型,传播途径：眼,眼，眼,手,眼,慢性炎症,可致盲,汤飞凡等（,1956,年，鸡胚接种法）,2.,包涵体结膜炎,(inclusion conjunctivitis),病原体：,沙眼生物变种中除,A,和,C以外,好发人群：,新生儿（,产道感染,）,(,母婴间）,成人（接触）,3.,泌尿生殖道感染,病原体：,沙眼衣原体,D-K,血清型,是性传播疾病,（,sexually,transmited,disease,STD,）,疾病：男性：,非淋菌性尿道炎（,NGU,）,女性：,NGU,、,宫颈炎、,盆腔炎,婴儿：肺炎（产道）,4.,性病淋巴肉芽肿,（,lymphogranuloma,venereum,LGV,）,是,STD,病原体：,沙眼衣原体,LGV,生物变种,5.,上呼吸道感染,及,衣原体肺炎,（,chlamydia,pneumonia,）,病原体：,鹦鹉热衣原体和肺炎衣原体,(,除外沙眼衣原体,),自然宿主,：,鹦鹉,，,鸟类,疾病：,鹦鹉热,（呼吸道感染）,肺炎衣原体引起的肺炎只限于人群间,免疫性,细胞免疫，体液免疫,保护性不强,持续、隐性和反复感染,微生物学检查法,（一）,直接涂片镜检,Giemsa,染色，,沙眼,还,要做碘液染色，,查包涵体,（二）酶抗体法检查抗原 用抗衣原体抗体、,酶标抗体,IgG,（,三）分离衣原体,小鼠腹腔、鸡胚卵黄囊或,培养细胞,（四）血清学诊断 鹦鹉热和,LGV,的诊断。,常用,CF,试验。抗体效价增高,4,倍或,4,倍以,上,（五）检查核酸,PCR,，,杂交等，特异性及敏,感性高,防治原则,沙眼：改善卫生状况和普及卫生知识,生殖道：同其他,STD,鹦鹉热肺炎：控制禽畜感染及减少接触,治疗：利福平、强力霉素等,