动物细胞融合与单克隆抗体(共20张PPT)..ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,动物细胞融合与,单克隆抗体,动物细胞与植物细胞的差别：,无细胞壁,全能性受限制，不能发育成杂种动物,动物细胞杂交与植物细胞杂交的不同：,不需去除细胞壁,不能发育成新的动物个体,一、动物细胞融合（细胞杂交）,P,52,1,、概念,：,指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。,2,、结果,：,形成单核的杂交细胞,3,、原理,：,细胞膜的流动性,4,、诱导方式,物理法：离心、振动、电激,化学法：聚乙二醇（,PEG),生物法：灭活的病毒,5,、动物细胞融合过程,(,利用灭活仙台病毒是动物细胞融合所特有的。病毒外壳上的某些糖蛋白可能有促进细胞融合的功能。,),思考讨论：,为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活？不灭活行吗？,不灭活的话会感染胞，而不能诱导细胞融合,不同,DNA,的两个细胞,灭活病毒诱导细胞融合,融合后的细胞进行有丝分裂,5,、动物细胞融合过程,6,、意义,：突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。,7,、应用,：成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段,特别是利用杂交瘤技术制造,单克隆抗体,阅读课本,53,页,总结：比较植物体细胞杂交和动物细胞融合,比较项目,植物体细胞杂交,动物细胞融合,原 理,融合前处理,诱 导 方 法,用 途,细胞膜的流动性、,植物细胞的全能性,细胞膜的流动性,用纤维素酶、,果胶酶去壁,用胰蛋白酶,使细胞分散,物理、化学方法,物理、化学、,生物方法,获得部分,或完整植株,主要用于制备,单克隆抗体,提,问,？,1.,抗体是由何种细胞产生的？,效应,B,细胞（浆细胞）。,2.,一个淋巴细胞,(,浆细胞,),能分泌多种抗体吗？,每一个淋巴细胞只分泌,一种,特异性抗体。,3.,简述获得抗体的传统途径？,抗原 动物体 抗体,抗原不纯 抗体不纯,二、单克隆抗体,刺激,浆细胞,体外培养淋巴细胞能无限增殖吗,?,怎样解决这个问题？,4.,这种方法获得的抗体有什么缺陷？,产量低，纯度低，特异性差,一个,B,淋巴细胞只分泌一种特异性抗体,骨髓瘤细胞能无限增殖,杂交瘤细胞,动物细胞培养技术,设计方案：,动物细胞融合技术,单克隆抗体,既能产生特异性抗体，又能大量繁殖的细胞,(1),、原理,：杂交瘤细胞具有两个亲本的特性，即能迅速,大量增殖,，又能足够数量的,单一抗体,。,(2),、,过程,效应,B,淋巴细胞,注射特定抗原蛋白,骨髓瘤细胞,培养骨髓瘤细胞,融合,（只考虑两两融合）培养液中细胞有几种类型？融合细胞几种,类型,？,骨髓瘤细胞,-,骨髓瘤细胞,B,淋巴细胞,-B,淋巴细胞,B,淋巴细胞,-,骨髓瘤细胞,多种,杂交细胞,在具有筛选作用的培养基上培养,专一抗体检验阳性,克隆上述杂交细胞,分开不同杂交细胞克隆专一抗体，,检验阳性细胞,单克隆抗体,注射到小鼠体内,体外培养,1,、单克隆抗体的制备过程,第,1,次筛选目的：得到杂交瘤细胞（多种）。,第,2,次筛选目的：在杂交瘤细胞中筛选出能产生单一抗体的杂交瘤细胞。,该细胞继承,双亲细胞,的遗传特性，既能,产生专一抗体,又能,无限增殖,。,杂交瘤细胞有何特点？,特异性强，灵敏度高,产生相应的,B,淋巴细胞,2.,诱导其融合的方法有哪些？,3.,融合后培养液中有几种细胞,?,4.,怎样筛选出杂交瘤细胞，杂交瘤细胞有何优点,?,原因？,1.,注射抗原的目的是什么,?,5.,为何要进行克隆化培养和专一抗体检测，多次筛选,?,6.,大量增殖杂交瘤细胞和获得单抗的方法,?,产生相应的,B,淋巴细胞,选择培养基,既能在体外无限增殖，也能产生特定的抗体,具有双亲细胞的遗传物质,培养液中或小鼠腹腔中培养,从培养液或小鼠腹水中提取,如何进行杂交瘤细胞的,抗体检测,及,克隆化培养,？,融合后的细胞经选择性培养基培养后，能存活的细胞就是杂交瘤细胞。,但这些杂交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体的细胞，通常用,“,有限稀释法,”,来选择。,将杂交瘤细胞稀释，用多孔细胞培养板培养，使每孔细胞不超过一个，通过培养让其增殖。然后,检测各孔上清液中细胞分泌的抗体,。那些上清液可与,特定抗原,结合的培养孔为阳性孔。,阳性孔中的细胞还不能保证是来自单个细胞，挑选阳性孔的细胞继续进行有限稀释，一般需进行,3,4,次，直至确信每个孔中增殖的细胞为,单克隆细胞,。,该过程即为杂交瘤细胞的克隆化培养。,(2),、,过程,B,淋巴细胞,骨髓瘤细胞,诱导融合,B-B,细胞,B-,瘤细胞,瘤,-,瘤细胞,选择培养基,第一次筛选,杂交瘤细胞,（,B-,瘤细胞）,克隆化培养,专一抗体检测,第二次筛选,相应杂交瘤细胞,体外培养,小鼠腹腔内增殖,单克隆抗体,(3).,单克隆抗体的应用：,单克隆抗体的优点：特异性强、灵敏度高、产量大,作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质，并与特异性结合,优点：,准确、高效、简易、快速,用于,运载药物：制成“生物导弹”,治疗疾病：主要用于癌症治疗,既不损伤正常细胞，又减少了用药剂量。,总结,一种诱导细胞融合的新方法,一种新细胞,灭活病毒,杂交瘤细胞,一个优势,单克隆抗体特异性强、灵敏度高的优势,1,、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（）,A.,经过免疫的,B,淋巴细胞,B.,没经过免疫的,T,淋巴细胞,C.,经过免疫的,T,淋巴细胞,D.,没经过免疫的淋巴细胞,A,巩固练习,2.,动物细胞融合的目的中最重要的是,-,（）,A.,克服远缘杂交不亲和,B.,制备单克隆抗体,C.,培育新品种,D.,生产杂种细胞,3.,动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中，正确的是（）,诱导融合的方法完全相同,B.,所用的技术手段基本相同,C.,所采用的原理完全相同,D.,都能形成杂种细胞,B,D,4.,单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是,-,（）,A.,由小鼠能产生抗体的,B,淋巴细胞与肝细胞融合,B.,由小鼠一个,B,淋巴细胞诱导融合而成,C.,由小鼠一个,B,淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而成,D.,由小鼠一个,B,淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成,D,