药物分析(第六章).ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第六章电子稿,第六章,芳酸类药物的分析,学习目标,掌握水杨酸、苯甲酸类药物化学结构与分析方法间的关系；鉴别与含量测定的方法；特殊杂质的检验方法与杂质限量计算；两步滴定法和双相测定法的原理。熟悉紫外分光光度法、高效液相色谱法在芳酸类药物中的应用。了解其他芳酸类药物的分析。,第六章,芳酸类药物的分析,本章目录,概述,第一节,水杨酸类药物分析,第二节,苯甲酸类药物分析,第六章,芳酸类药物的分析,羧基直接与芳香环相连的化合物称芳酸。芳酸及其酯类药物的结构特点是：,结构中有,羧基、酯键,和苯环；,有些药物有,酚羟基、芳伯氨基,概 述,第六章,芳酸类药物的分析,第一节 水杨酸类药物分析,水杨酸类药物,结构,理化性质,鉴 别,检 查,含量测定,第六章,芳酸类药物分析,药物结构,理化性质与分析方法,在乙醇中易溶，在水中溶解度小，多以醇为溶剂分析；,具游离羧基，呈酸性；,含酯键，不稳定，易水解；,水解后生成游离的酚羟基，可与铁离子发生呈色反应,有苯环，在紫外光区有吸收,阿司匹林结构与理化性质的关系,第六章,芳酸类药物分析,酸性：用于定性、定量反应,酚羟基：,FeCl,3,呈色反应,苯环：紫外吸收,水杨酸,第六章,芳酸类药物分析,芳酸碱金属盐：水溶性大，显弱碱性,酚羟基，有何性质？,芳伯氨基：重氮化偶合反应,苯环有何性质,?,对氨基水杨酸钠,第六章,芳酸类药物分析,酯键：水解，可生成酚羟基和醋酸,酯键：水解，可生成酚羟基和羧基,酰胺键：水解，可生成芳伯氨基,苯环,苯环,贝诺酯,返 回,第六章,芳酸类药物分析,一、鉴别试验,1.,三氯化铁反应,含酚羟基结构的药物在中性或弱酸性条件下，可与,Fe,3,反应，形成有色配位化合物。,（,1,）,水杨酸,：加三氯化铁试液,1,滴，即呈紫色。,（,2,）,阿司匹林,：煮沸水解后，放冷，加三氯化铁试,液,1,滴，呈紫堇色。,（,3,）,贝诺酯,：加入氢氧化钠试液，煮沸，放冷，滤液调成微,酸性，加三氯化铁试液,2,滴，呈紫堇色。,第六章,芳酸类药物分析,反应式如下：,贝诺酯和阿司匹林需水解，生成水杨酸，才能发生该反应,（紫堇色）,第六章,芳酸类药物分析,2.,重氮化偶合反应,贝诺酯由阿司匹林和对乙酰氨基酚酯化而成。在酸性条件下加热水解，生成对氨基酚，呈芳香第一胺反应。,供试品,稀盐酸，煮沸，放冷，滤过,滤液,猩红色,亚硝酸钠、碱性,-,萘酚,第六章,芳酸类药物分析,第六章,芳酸类药物分析,3.,紫外吸收光谱法,贝诺酯溶液，在,240nm,的波长处有最大吸收，按干燥品计算，吸收系数（）为,730,760,。,4.,红外吸收光谱法,水杨酸、阿司匹林、贝诺酯、对氨基水杨酸钠均采用红外吸收光谱法，供试品的红外光吸收图谱应与对照的图谱一致。,对氨基水杨酸钠水溶液还可呈钠盐鉴别反应。,第六章,芳酸类药物分析,二、杂质检查,（一）阿司匹林的杂质检查,阿司匹林原料主要控制的特殊杂质有,“,溶液的澄清度,”,“,水杨酸,”,“,易炭化物,”,第六章,芳酸类药物分析,1.,溶液的澄清度,本项目主要检查碳酸钠试液中不溶性杂质。这些杂质是未反应的,酚类,、或副反应产生的,无游离羧基,的醋酸苯酯、水杨酸苯酯和乙酰水杨酸苯酯等。,阿司匹林有羧基，溶解于碳酸钠试液。,醋酸苯酯,水杨酸苯酯,乙酰水杨酸苯酯,第六章,芳酸类药物分析,2.,游离水杨酸,水杨酸可由合成过程中乙酰化不完全或阿司匹林在贮藏过程中水解产生。水杨酸对人体有毒，并有刺激性，其进一步氧化产物使药物变色，影响药物的质量。故应严格控制阿司匹林中的水杨酸。,中国药典（,2010,）采用高效液相法测定。,第六章,芳酸类药物分析,【,实例分析,】,阿司匹林中游离水杨酸检查,游离水杨酸 照高效液相色谱法（附录,D,）测定。,色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈,-,四氢呋喃,-,冰醋酸,-,水（,20,：,5,：,5,：,70,）为流动相；检测波长为,303nm,。理论板数按水杨酸峰计算不低于,5000,，阿司匹林主峰与水杨酸主峰分离度应符合要求。,供试品溶液的制备 取本品约,100mg,，精密称定，置,10ml,量瓶中，加,1%,冰醋酸甲醇溶液适量，振摇使溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得（临用前新配）。,对照品溶液的制备 取水杨酸对照品约,10mg,，精密称定，置,100ml,量瓶中，加,1%,冰醋酸甲醇溶液适量使溶解，并稀释至刻度，摇匀；精密量取,5ml,，置,50ml,量瓶中，用,1%,冰醋酸甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，即得。,测定法 立即精密量取供试品溶液、对照品溶液各,10l,，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品溶液色谱图中如显水杨酸色谱峰，按外标法以峰面积计算供试品中水杨酸含量，含水杨酸不得过,0.1%,。,第六章,芳酸类药物分析,原则上，制剂不必重复检查原料药项下检查的杂质，但在制剂制备或制剂贮存过程中，有可能再引入的杂质，应检查控制。,阿司匹林片在制备或贮存过程中，因酯键易水解，而生成水杨酸，故阿司匹林片剂、栓剂均要检查水杨酸。,第六章,芳酸类药物分析,3.,易炭化物,本项目检查被硫酸碳化而呈色的低分子有机杂质,第六章,芳酸类药物分析,(4),有关物质 照高效液相色谱法（附录,D,）测定。,色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈,-,四氢呋喃,-,冰醋酸,-,水（,20,：,5,：,5,：,70,）为流动相,A,，乙腈为流动相,B,，按下表进行线性梯度洗脱；检测波长为,276nm,。阿司匹林峰的保留时间约为,8,分钟，理论板数按阿司匹林峰计算不低于,5000,，阿司匹林峰与水杨酸峰分离度应符合要求。,时间（分钟）,流动相A,（,%,）,流动相,B,（,%,）,0.0,100,0,60.0,20,80,第六章,芳酸类药物分析,测定法 取本品约,0.1g,，精密称定，置,10ml,量瓶中，加,1%,冰醋酸甲醇溶液适量，振摇使溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液；精密量取供试品溶液,1ml,，置,200ml,量瓶中，用,1%,冰醋酸甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，即得对照溶液；精密量取对照溶液,10ml,，置,100ml,量瓶中，用,1%,冰醋酸甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，即得灵敏度试验溶液。分别精密量取供试品溶液、对照溶液、灵敏度试验溶液及水杨酸检查项下的水杨酸对照品溶液各,10l,，注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品溶液色谱图中如显杂质峰，除小于灵敏度试验溶液中阿司匹林主峰面积的单个杂质峰、溶剂峰及水杨酸峰不计外，其余各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰峰面积（,0.5%,）。,第六章,芳酸类药物分析,（二）对氨基水杨酸钠中间氨基酚的检查,间氨基酚易被氧化，氧化产物导致药物变色，并且对人体有毒性作用，应严格控制其限量,间氨基酚引入的途径有二：一是未反应完全的原料；二是对氨基水杨酸钠遇热或日光照射脱羧,第六章,芳酸类药物分析,【,检查,】,有关物质 避光操作。取本品适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每,1ml,中含,0.7mg,的溶液，作为供试品溶液；精密量取供试品溶液,1ml,，置,100ml,量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液,A,。另取间氨基酚对照品适量，精密称定，加流动相稀释制成每,1ml,中含,1.2g,的溶液，作为对照品溶液,B,。照含量测定项下的色谱条件，检测波长为,280nm,测定，理论板数按对氨基水杨酸钠峰计算应不低于,3000,，对氨基水杨酸钠峰与杂质峰之间的分离度应符合要求。取对照溶液,A 20l,，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使对氨基水杨酸钠色谱峰的峰高为满量程的,20,25,。另精密量取供试品溶液、对照溶液,A,与对照品溶液,B,各,20l,，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的,3.5,倍。供试品溶液的色谱图中如有与间氨基酚峰保留时间一致的峰，按外标法以峰面积计算，其含量不得过,0.25%,，其他单个杂质峰面积不得大于对照溶液,A,主峰面积的,1/10,（,0.1%,），其他各杂质峰面积的和不得大于对照溶液,A,主峰面积（,1.0%,）。,第六章,芳酸类药物分析,三、含量测定,1.,酸碱滴定法,1.,基本原理：,阿司匹林结构中有羧基有酸性（,Ka,10,5,），可用,氢氧化钠滴定液,直接滴定。滴定生成的,乙酰水杨酸钠,偏碱性，故用,酚酞,为指示剂,第六章,芳酸类药物分析,【,实例分析,】,阿司匹林原料的含量测定,取本品约,0.4g,，精密称定，加,中性乙醇,（对酚酞指示液显中性）,20ml,溶解后，加酚酞指示液,3,滴，用,氢氧化钠滴定液,(0.1mol/L),滴定。每,1ml,氢氧化钠滴定液,(0.1mol/L),相当于,18.02mg,的,C,9,H,8,O,4,。,阿司匹林的百分含量,式中,V:,氢氧化钠滴定液消耗的体积，,ml,；,T,：滴定度（,18.02mg,）；,F:,滴定液浓度校正系数；,W,：供试品取样量。,第六章,芳酸类药物分析,注意事项,：,（,1,）中性乙醇：阿司匹林在乙醇中溶解度大，不易水解；乙,醇中有微量乙酸等物质，故应制成中性（对酚酞指示液,显中性）；,（,2,）为防止阿司匹林在滴定过程中水解，一要快速滴定，二,要剧烈振摇，防止局部碱过浓；,（,4,）滴定终点后，因乙酰水杨酸钠逐渐水解，会使粉红色褪,去，所以要注意判断终点,第六章,芳酸类药物分析,2.,高效液相色谱法,阿司匹林片和阿司匹林肠溶片中除了加入少量酒石酸或枸橼酸稳定剂外，在制剂的过程中也会有水解产物水杨酸、醋酸产生，如果制剂含量测定采用直接酸碱滴定法，则所加枸橼酸或酒石酸以及水解产物水杨酸、醋酸就会消耗氢氧化钠滴定液，使测定结果偏高，所以不能采用直接酸碱滴定法。,中国药典（,2010,）中阿司匹林的制剂，对氨基水杨酸钠原料和制剂，贝诺酯原料和制剂均采用高效液相法。以阿司匹林片剂含量分析为例介绍。,第六章,芳酸类药物分析,照高效液相色谱法（附录,D,）测定。,色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈,-,四氢呋喃,-,冰醋酸,-,水（,20,：,5,：,5,：,70,）为流动相；检测波长为,276nm,。理论板数按阿司匹林峰计算不低于,3000,，阿司匹林峰与水杨酸峰分离度应符合要求。,测定法 取本品,20,片，精密称定，充分研细，精密称取细粉适量（约相当于阿司匹林,10mg,），置,100ml,量瓶中，用,1%,冰醋酸的甲醇溶液强烈振摇使溶解，并用,1%,冰醋酸的甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，用有机相滤膜（孔径：,0.45,）滤过，精密量取续滤液,10l,，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取阿司匹林对照品约,20mg,，精密称定，置,200ml,量瓶中，用,1%,冰醋酸的甲醇溶液强烈振摇使溶解，并用,1%,冰醋酸的甲醇稀释到刻度，摇匀，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。,第六章,芳酸及其酯类药物的分析,第二节 苯甲酸类药物的分析,苯甲酸及其钠盐,结构,理化性质,鉴 别,检 查,含量测定,第六章,芳酸药物的分析,药物结构,理化性质与分析方法,2.,羧基,4.,苯环,3.,芳酸,1.,在乙醇、氯仿或乙醚中易溶，在水中微溶，在沸水中溶解；其钠盐在水中易溶，乙醇中略溶,2.,酸性，用于定量,3.,三氯化铁呈色反应,4.,共轭双键，紫外吸收,1.,溶解性,一、,苯甲酸及其钠盐的结构、主要理化性质与分析方法,返 回,第六章,芳酸药物的分析,二、苯甲酸及其钠盐分析,（一）鉴别试验,1.,三氯化铁反应,在碱性溶液和苯甲酸钠在中性溶液，苯甲酸与三氯化铁试液生成沉淀。,第六章,芳酸药物的分析,2.,分解产物的反应,苯甲酸钠升华试验：苯甲酸钠固体，加硫酸，加热，可见白色苯甲酸凝结在试管内壁。,此反应收载于中国药典（,2005,年版）附录“一般鉴别试验”中。,3.,红外光谱法,供试品红外光吸收图谱与对照的图谱比较应一致。,第六章,芳酸药物的分析,(,二,),含量测定,1.,苯甲酸直接酸碱滴定法,基本原理,：苯甲酸酸性较强，水中溶解度小，而其钠盐在水中溶解度大，故以中性稀乙醇为溶剂,可用氢氧化钠滴定液直接滴定。终点产物为苯甲酸钠，偏碱性，以酚酞为指示剂。,第六章,芳酸药物的分析,【,实例分析,】,苯甲酸的含量测定,取苯甲酸约,0.25g,精密称定，得,0.2478g,。加中性稀乙醇（对酚酞指示液显中性）,25ml,溶解后，加酚酞指示液,3,滴，用氢氧化钠滴定液,(0.1033mol/L),滴定，消耗滴定液,19.72ml,，每,1ml,氢氧化钠滴定液,(0.1mol/L),相当于,12.21mg,的,C,7,H,6,O,2,。,第六章,芳酸药物的分析,分析：,苯甲酸的百分含量,F,苯甲酸的百分含量,100.4,第六章,芳酸药物的分析,2.,苯甲酸钠的双相滴定法,基本原理：苯甲酸钠易溶于水，苯甲酸易溶于乙醚，在乙醚和水组成双相体系中，用盐酸直接滴定水相的苯甲酸钠，生成的苯甲酸溶于乙醚，降低了水相的酸性，增大滴定突越，使滴定完全，终点易于判定，定量准确。,第六章,芳酸药物的分析,【,实例分析,】,苯甲酸钠的双相滴定法,取苯甲酸钠约,1.5g,，精密称定得,1.574g,，置分液漏斗中，加水,25ml,，振摇使溶解。加乙醚,50ml,，甲基橙指示液,2,滴，用盐酸滴定液,(0.5012mol/L),滴定，随滴随振摇，至水层显橙红色；分取水层，置具塞锥形瓶中，乙醚层用水,5ml,洗涤，洗液并入锥形瓶中，加乙醚,20ml,，继续用盐酸滴定液,(0.5012mol/L),滴定，随滴随振摇，至水层显持续的橙红色，消耗盐酸滴定液,21.52ml,。已知每,1ml,盐酸滴定液,(0.5mol/L),相当于,72.06mg,的,C,7,H,5,NaO,2,。,第六章,芳酸药物的分析,分析：,开始滴定时，由于水层中有高浓度的苯甲酸钠，在用乙醚振摇提前过程中，少量的苯甲酸钠溶解于乙醚中。分离水和醚层后，用水洗乙醚层，目的是将溶于乙醚的微量的苯甲酸钠回提取到水中，合并水提取液，继续滴定，使苯甲酸钠滴定完全，减少损失。,第六章,芳酸药物的分析,苯甲酸钠的百分含量,98.76,