肌肉植入试验.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,兔肌肉植入试验,苏州大学卫生与环境技术研究所,动物的选择,短期植入,（,12,周以内）,试验首选动物为大鼠、兔。,长期植入,（,12,周以上）,可选择兔、狗、羊、山羊、猪等寿命相对长的动物。,我们目前选择的动物为新西兰白兔，体重,2kg,对于短期植入，动物选择与植入周期如下：,植入周期,植入周期,对于长期植入，动物选择与植入周期如下：,试验目的,采用植入后局部反应试验，评估受试物植入家兔肌肉组织后的刺激和毒性反应。,植入样品的制备,1.,固体材料（不包括粉剂）,植入物应该经过与最终产品相同的制造、处理、清洁和灭菌过程，确保植入物未被损坏并且是无菌的。,规格要求：长,10mm,，宽,1,3mm,，边缘光滑。,植入样品的制备,2.,非固体材料（包括粉剂、液体、半固体等）,植入物应该经过与最终产品相同的制造、处理、清洁和灭菌过程。,无菌条件下将样品填充至两端开口的,PP,、,PE,、或者,PTFE,空心小管内，填充物与管口齐平，并防止中间有空气。,对照样品的制备,对照样品的尺寸、形状、表面条件应尽可能与试验样品一致。,对照样品的处理、清洗及灭菌方式应尽可能与试验样品一致。,动物的麻醉,10%,水合氯醛耳缘静脉注射，,2ml/kg,氯胺酮肌肉注射，,50mg/kg,戊巴比妥钠耳缘静脉注射，,30mg/kg,实际麻醉过程中，由于动物体质状况等的差异，需适量调整剂量。,固定兔，去除背部肌肉上方约,1020cm,面积的兔毛。用碘伏和,75%,乙醇清洁暴露皮肤。水合氯醛麻醉。,将载有对照样品的穿刺针与表面皮肤呈,45,角插入肌肉，当回抽穿刺针时,用细探针将样品留于肌肉中。每只家兔左侧肌肉植入四个对照样品；右侧直接用样品肌肉注射四个点，每点,0.2ml,。,较大的不能用穿刺针植入的样品，用外科手术方法植入。,植入过程中需注意无菌。,植入完成后注射适量青链霉素防止感染。,植入过程,植入后临床观察,植入后每天观察动物的一般状况，如 精神状态、被毛光泽、眼神、反应等。,植入后每天观察植入点皮肤反应，有无出血、红肿、坏死和试验样品排出等异常现象。,于四周后，将家兔无痛处死，解剖并观察植入部位有无皮下和肌肉异常病变，在低倍放大镜下观察组织反应（包括出血肿、水肿、囊肿和增生），并记录。,解剖观察,取出脊柱两侧肌肉，切取包裹试样周围,0.5,1.0cm,的肌肉组织，然后放置于,10,福尔马林溶液中固定。,组织保存,组织学观察,固定之后，肌肉组织标本经修整、包埋、切片等步骤，再进行常规,HE,染色。,于光学显微镜下观察，比较供试品与对照品周围的组织反应，纤维囊腔厚度，炎症细胞和其他细胞存在情况及试样,/,组织界面处的其他异常情况等。,组织学评价体系,评分,0,1,2,3,4,嗜中性粒细胞,0,极少,1-5/phf,5-10/phf,大量浸润,大量堆积,淋巴细胞,0,极少,1-5/phf,5-10/phf,大量浸润,大量堆积,浆细胞,0,极少,1-5/phf,5-10/phf,大量浸润,大量堆积,巨噬细胞,0,极少,1-5/phf,5-10/phf,大量浸润,大量堆积,巨细胞,0,极少,1-5/phf,5-10/phf,大量浸润,大量堆积,坏死,0,轻微,轻度,重度,严重,新生血管,0,局灶性,毛细血管增生,1-3,个小芽,4-7,支毛细血管,增生并有成纤维,细胞支持,大量毛细血管,增生并有成纤,维细胞支持,毛细血管广泛,增生并有成,纤维细胞支持,纤维化,0,窄束,中等厚度,较厚,广泛纤维化,脂肪浸润,0,极少脂肪浸,润和纤维化,少量脂肪浸,润和纤维化,植入部位大量,堆积脂肪细胞,脂肪细胞完,全包裹植入物,phf,=,每高倍视野（,400,）,评分标准,无刺激,0.0 2.9,轻度刺激,3.0 8.9,重度刺激,9.0-15.0,重度刺激,15,样品组得分减去阴性对照组得分即为试验样品的最终得分。,参考文献,医疗器械的生物学评价 第,6,部分,:,植入后局部反应试验,ISO 10993-6:2007,医疗器械的生物学评价 第,12,部分,:,样品制备和参照样品,ISO 10993-12:2007,医疗器械的生物学评价 第,2,部分,:,动物保护要求,ISO 10993-2:2006,谢 谢,