风湿病的常用免疫学检查 及临床应用 - 广州中医药大学.ppt

单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,风湿病的常用免疫学检查及临床应用,概 述,多数风湿病的发病机制都与免疫失调有关，因此检测自身抗体（抗细胞内、细胞表面和细胞外抗原的免疫球蛋白。）、补体、淋巴细胞及其它免疫学成份有助于许多疾病的诊断、治疗和疗效判断。,对检验结果的判断必须密切结合临床，并进行综合分析。,抗核抗体,(ANA,）,是指抗细胞核成分的抗体，换言之是指一组对细胞核内,DNA,、,RNA,、,蛋白质、或这些物质的分子复合物的自身抗体。,一、核的组成及其抗原性,细胞核是由核膜、核仁、染色质和核液组成。,核膜为双层脂质结构，膜孔和内层的蛋白具有抗原性，间接免疫荧光 检查出现周边核染色。,核仁抗原包括核糖体蛋白、,U3,及,Th,小,RNA s,，,PM-,Scl,抗原和核仁的,Ku,蛋白及增殖细胞核抗原（,PCNA,）。,染色质是由,DNA,和组蛋白组成，它排列的基本结构亚单位为核小体,数百种非组蛋白，它们具有结构维持、基因表达及酶的作用，都是免疫反应潜在的目标，,二、检测方法,对流免疫电泳（）,间接免疫荧光（）,放射免疫（）,免疫印迹（）,酶联免疫吸咐试验（）,三、抗核抗体的种类及临床意义,1954,年,Hargrave,发现,SLE,病人血液中的,LE,细胞,它是抗核抗体谱检查的起源,它所针对的核抗原是,DNA-,主蛋白,(DNP),，,目前已采用了简易和迅速的抗,DNP,抗体测定取代,LE,细胞的检查。它的阳性率在未治,SLE,中,50-85,（），,RA 10,（），,PSS,、,PM/DM,及药物过敏等均有（）。,（一）分型,H,均质型：与组蛋白和抗,DNA,抗体有关，见于,SLE,药物性狼疮,S,斑点型：与抗,ENA,抗体有关，见于,CTD,P,周边型 与抗,DNA,抗体有关，见于,SLE,C,着丝点型 与,DNA,蛋白结合体有关，为,CREST,综合征的标记性抗体,N,核仁型 与抗,4-6sRNA,有关，见于,PSS,不同的底物,ANA,的阳性率不同,。,国际以,Hep-2,作为基质,SLE PSS,HEP-2 95,70,鼠肝,85,50,（二）分类,1,、,ds,-DNA,检测,Farr,（,RIA,）,结合力,20,（）,30,SLE,TE,（,马疫锥虫）,1,：,5,（）,1,：,10 SLE,抗,ds,-DNA,抗体是,SLE,的重要抗体。,40-60,的,SLE,抗,ds,-DNA,抗体阳性,特别是活动性,SLE,和狼疮肾，,其它风湿性疾病则阳性率很低。,2,、抗,Histon,抗体,不同疾病中的阳性率（,ELISA,）,药物性狼疮 约为,95,SLE 50,70,PM/DM 13,RA 23,服,INH 53,SS 30,服他巴唑,20,PSS 27,服苯妥因钠,18,3,、抗ENA,抗体,常见七种常见的,ENA,抗体,-SM,（,病人名）,-J0-1,（,病人名,John,）,-RNP,（,nRNA,）,-PM-1,（,polymyositis,）,-SS-A,（,病名）,-Scl-70,（,sclerederma,）,-SS-B,（,病名）,抗,Sm,抗体,仅在,SLE,中出现的阳性率为,25,左右，它是,SLE,的标记性抗体，它对早期，不典型,SLE,及治疗缓解后,SLE,的回顾性诊断有很大帮助,抗,nRNP,抗体,在多种风湿病中出现，常与双手肿胀，雷诺氏现象，指端硬化相关。当抗,nRNP,阳性而同时抗,dsDNA,阴性，则肾病发生率较低。在,METD,中几乎,100,阳性,抗,SS-A/Ro,抗体,在原发,SS,中,70-80,（），,SLE 40,（），,RA 20,（）。,以鼠肝为底物的,ANA,检测中，抗,SS-A,抗体常呈阴性反应，用免疫印迹法检测时它可与,60KD,和,52KD,两条蛋白多肽反应，作者及一些文献都认为,60KD,的多肽在,SLE,中较,SS,更多见。进一步的研究表明抗,SS-A,抗体与新生儿狼疮，先天性房室传导阻滞，光敏感相关。,抗,SS-B/La,抗体,在原发,SS,中,50-60,（），,SLE 10,（）,故有人称抗,SS-B,抗体是,SS,的标记性抗体。,抗,RIB,抗体（,ribosome RNP),在,SLE,中,24,（），且常常在活动期,SLE,中存在，但不随病情的缓解而消失，可持续,12,年。抗,RIP,抗体与,LN,和,NP,较密切,有报导说与在,RIP,阳性的,SLE,中,37%,发生,NP,，而,RIP,阴性的,SLE,中仅次,16%,发生,NP,，,两者有显著差异,抗,PCNA(proliferating cell nuclear antigen),抗体,针对的是,36Kd,的,DNA,聚合酶副蛋白，在,SLE,中,2-10,（,),而在其它结缔组织病中阴性。,抗,Pm-1,抗体,在,PM/DM,中,8-15,(+),在,PSS,中,3,(+),。在,PM,与,PSS,重叠且伴有肾炎的病人中，阳性率可高达,80%,抗,Jo-1,抗体,在,PM,中,25-30,（,),，合并肺间质病变时其阳性率可高达,60%,，被视为,PM,的标记性抗体。如患者有发热，对称性关节炎，“工艺手”，雷诺氏现象及肌炎并肺间质病变，抗,Jo-1,抗体常阳性，此时称之为抗,Jo-1,抗体综合症,抗,Scl-70,抗体,在,PSS,中,3040,（,),，是,PSS,的标记抗体。有报道抗,Scl-70,抗体阳性的,PSS,患者肺纤维化的发生率是抗,Scl-70,抗体阴性患者的,10,倍。,抗,Ku,抗体,在,SLE,MCTD,PSS,中,30-50,（），,DM,中仅,5,（）。,抗,Ki,抗体和抗Mi-2,抗,Ki,抗体在,SLE,中,8-20,（）,其价值不明。在其它风湿病中仅很低的阳性率。,抗,Mi-2,抗体在,PM,中,5,（）,抗,RA33,抗体,在,RA,中,36%,（,+,），尤其是早期,RA,血清中。有人随访了 抗,RA33,抗体阳性又未能确诊的关节炎，结果大部分病人在,824,个月后均发生典型的,RA,。,另需注意的是,u1RNP,可能与,RA33,有交叉反应，且抗,RA33,抗体的消长与病情和用药无关。（,1989,年,Hassfeld,首次报道）,总之检测抗核抗体的意义就在于帮助一些疾病的诊断（有些抗 核抗体有较高诊断特异性），观察治疗反应，判断疾病的活动性。（不同抗体不同对待，如,RNP,Sm,就与活动性无关）。,疾病与抗核抗体关系,A,dsDNA,SLE,A-,sm,SLE,A-scl-70 PSS,A-,Centromere,CREST,A-Jo-1 PM,A-Pm-1 PM/DM,A-SSB SS,A-SSA SS.SLE,A-RNP MCTD.CTD,A-P,蛋白,SLE,抗磷脂抗体（,APL),抗磷脂抗体包括狼疮抗凝因子和一组抗负电磷脂抗体目前应用最多的是抗心磷脂抗体,(,AcL,),，,它有,IgG,、,IgM,和,IgA,三种成份，,IgG,更具特异性，而,IgA,最不具特异。,Acl,与,HLADR,、,DQ,及,C4,有关。在,SLE,患者的,AcL,阳性率是,33,44,（,ELISA,法），在合并有网状青紫或中枢神经病变的,SLE,其阳性率达,80,或,90,，在其它风湿病，如,PSS,、,RA,、,SS,和,MCTD,中阳性率分别是,23,、,15,、,10,和,14,。,AcL,与反复动脉、静脉血栓、习惯性流产、血小板减少以及神经系统症状密切相关，是诊断抗磷脂抗体综合征（,APS,）,不可缺少的指标。（,1957,年,Conley,首次报道）,抗内皮细胞抗体（,AECA,）,是一种针对内皮细胞膜蛋白的抗体。在,SLE,中的阳性率约,14-85,，也可出现于,RA,、,MCTD,、,SS,以及一些血管炎疾病如,Wegeners,肉芽肿、多 动脉炎、,Behcets,病以及,kawasaki,疾病中。,IgG,、,IgM,亚类的,AECA,与疾 病活动性显著相关，,AECA,与血管损伤密切相关，尤其是肾脏累及时。当血管炎发作缓解，则,AECA,滴度下降。,抗中性粒细胞浆抗体,(ANCA),是一种与中性粒细胞或单核细胞胞浆中的溶酶体酶起反应的抗体。,ANCA,可分为胞浆型,ANCA(cANCA,),和核周型,ANCA(pANCA,),，,其滴度常与病情活动相关,cANCA,抗原主要为颗粒中的蛋白酶（,PR 3-,protlinase,），,pANCA,抗原主要为髓过氧化酶（,Hyploperoxidase,MPO,),。,韦格氏肉芽肿病人血清中有,cANCA,，,特异性为,90,。少数巨细胞动脉炎、大动脉炎、过敏性紫癜、白细胞破碎性皮肤性血管炎和白塞病等,cANCA,也可阳性。,pANCA,不如,cANCA,具有诊断特异性，在镜下多动脉炎、,Churg-sttrauss,及其它自身免疫性疾病（硬化性胆管炎、溃疡性，结肠炎、肝炎、狼疮、类风关、干燥等）中均能出现。,ANCA,可能参与血管炎的发病。,类风湿因子,(RF),RF,是抗人或动物,IgG,分子,FC,片段的抗体，它不仅能与变性的,IgG,反应，也能与自身的或异体的,IgG,反应，还能与其它抗原如核蛋白发生交叉反应。按照抗免疫球蛋白类型分为IgM,-RF,，,IgG,-RF,和,IgA,-RF,三种，后种分子不易于其它非相关抗原反应，故特异性较强，具有更高的诊断价值。,如今最常用于检测,RF,的方法仍是乳胶凝集法,(,IgM,型,),，,RA,患者中阳性率 可达,80,，如乳胶法,RF,阴性，临床高疑,RA,，,可用,ELISA,测,IgG,和,IgA,型,RF,。,一般抗体滴度越高，关节外的表现越重，疾病越活动，预后越差。在,5,的正常老人，其它风湿病、细菌性心内膜炎、结核、肝炎、肺纤维化等多种疾病中都可出现不同比例、低滴度的,RF,阳性（除干燥综合征症为高 滴度）。此外,RF,检测是划分血清阴性关节炎是重要标准。,淋巴细胞分型,(lymphocyte,typy,),淋巴细胞由,T,、,B,二类组成，它们是免疫反应中的重要物质基础。在免疫系统中，,B,淋巴细胞执行特异体液免疫功能，,T,淋巴细胞则执行特异 细胞免疫和免疫调节功能。因此这二类细胞的数目及功能异常均可导致免疫学异常。,淋巴细胞表面表达多种蛋白分子，有些只暂时出现在细胞发育的某一阶段，有些表达于全部细胞表面，有些分子只表达于特定功能亚群的,T,或,B,细胞表面，故称之为分化抗原。这些分子均可被相应单克隆抗体识别，从而将,T,、,B,淋巴细胞分成许多成熟度和活性不同的亚型。,部分分化抗原命名的,T,、,B,细胞,分化抗原 分子量 分布及特点 意 义,CD1 21/48,不成熟,T,细胞 血液病,CD3 20/20/25,成熟,T,细胞 自身免疫病、,SLE,、,RA,CD4 55,辅助,T,细胞 免疫活跃,、免疫缺陷,CD8 30/45,杀伤,/,抑制,T,细胞,SLE,CD25 50-55 IL-2,受体,链 自身免疫病,CD45RO 80,记忆,T,细胞 同上，尤其是,RA,CD19 95,早期,B,细胞 急性淋巴细胞白血病,CD21 140,略成熟,B,细胞 自身免疫病,CD22 135,成熟,B,细胞,与,T,同上,细胞有协同作用,细胞因子,(cytokine),细胞因子是活细胞分泌的具有生物活性的多肽,/,蛋白产物，是免疫调节中不可缺少的物质，同时也参与炎症反应。根据来源分成淋巴因子 和单核因子两类，其中以,T,细胞产生最多，研究结果最明确，生物学意义最明显。如,IL1-15,、,IF2,，,单核因子主要指,IL1,、,IL6,及,TNF,。,共同 的特性是：多效性、多源性、快速反应性及致热原性。,细胞因子与意义,细胞因子 来源 意 义,IL-1,单核、胶质、,T,细胞、内皮 诱导,IL-2,、,活化淋巴细胞、,致炎、抗癌,IL-2 THS,细胞、胸腺细胞 促进细胞因子、,IgG,分泌、活,化,NK,和巨噬细胞、剌激,T,、,B,细胞增殖,IL-6,单核、内皮细胞、瘤细胞 诱导,B,细胞增殖、致炎、抗癌,TNF,单核、内皮 抗肿瘤、致炎,IF(),白细胞、成纤维细胞、抗病毒、抗癌及免疫调节,T,细胞,CSF(6,类,),淋巴细胞、骨髓细胞 促进血细胞及组织细胞生长,THANK YOU,