骨髓细胞形态学检验.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第三节 血细胞形态学特征,一、血细胞发育过程中形态学演变的一般规律,血细胞发育：从原始到成熟有一定的规律性,1,、细胞体积,（,1,）胞体由大到小（普通规律）,（,2,）特殊规律：早幼粒大于原粒细胞,巨核细胞体积增大,2,、细胞质：,（,1,）量由少到多,（,2,）染色由深蓝到浅蓝,（,3,）颗粒：从无有嗜天青颗粒特异性颗粒,3,、细胞核：,（,1,）大小：由大到小，由规则到不规则（巨核细胞核由小到大）,（,2,）染色质：细致疏松粗糙成块,4,、核,/,质 比例,：由大到小。,二、血细胞的形态学特征,1,红细胞系,（,1,）原红（,normoblast,）：,1522um,（,2,）早幼红（,basophilic,normoblast,）：,11-20um,（,3,）中幼红（,polychromatic,normoblast,）：,8-18um,（,4,）晚幼红（,ortho,-chromatic,nurmblast,）：,7-12um,（,5,）网织红（,RC,）：,7.4um,（,6,）成熟,RBC,（,RBC,）：,7.4um,2,、粒细胞系统：,（,1,）原粒细胞（,myeloblast,）：,11-18um,（,2,）早幼粒（,promyelocyte,）：,12-22um,（,3中幼粒（,myelocyte,）,中性中幼粒（,neutrophilic,myelocyte,）：,10-18um,嗜酸性中幼粒（,eosinophilic,myelocyte,）：,15-20um,嗜硷性中幼粒（,basophilic,myelocyte,）：,10-15um,（,4,）晚幼粒细胞（,metamyelocyte,）：,10-16um,中性 嗜酸 嗜硷,（,5,）杆状核粒细胞（,stab granulocyte,、,bandgranulocyte,）,中性 嗜酸 嗜硷,（,6,）分叶核粒细胞（,segmented granulocyte,）,中性 嗜酸 嗜硷,3,、淋巴细胞系统,（,1,）原淋巴细胞（,Lymphoblast,）：,10-18um,（,2,）幼淋巴细胞（,prolymphocyte,）：,10-16um,（,3,）淋巴细胞（,lymphocyte,）,大淋巴细胞 小淋巴细胞,4,、浆细胞系统：,（,1,）原浆细胞（,plasmablast,）：,15-20um,（,2,）幼浆细胞（,proplasmacyte,）：,12-16um,（,3,）浆细胞（,plasmacyte,）：,8-20um,5,、单核细胞系统：,（,1,）原单核细胞（,monoblast,）：,15-25um,（,2,）幼单核细胞（,promonocyte,）：,15-25um核可见凹陷，切迹，扭曲或折叠,（,3,）单核细胞（,macrophage,）：,12-20um,：核呈肾形，马蹄形，笔架形及“,S”,形。,（,4,）吞噬细胞（,macrophage,）：单核细胞组织细胞巨噬细胞或吞噬细胞,6,、巨核细胞学：,（,1,）原巨核细胞（,megakaryoblast,）：,15-30um,（,2,）幼巨核细胞（,promegakaryocyte,）：,30-50um,（,3,）颗粒型巨核细胞（,granular,megakaryocyte,）：,50-70um,（,4,）产板巨（,thronbocytogenous,megakaryocyte,）。,（,5,）巨核细胞裸核（,naked nucleus,）,7,、其它细胞,（,1,）网状细胞 （,3,）纤维细胞,（,2,）内皮细胞 （,4,）组织嗜硷,（,5,）成骨细胞 （,6,）破骨细胞,三、细胞化学染色,概念：,（,1,）细胞形态学为基础,（,2,）对骨髓片按一定程序染色,（,3,）显微镜下观察（细胞化学成分及其变化）,（一）过氧化物酶染色,1,、原理：,细胞中的,POX,（,peroxidase,）,H2O2O2,氧化联苯胺呈蓝色,+,亚硝基铁氰化钠结合形成蓝黑色颗粒。,2,、结果：,（,1,）阴性：无颗粒,（,2,）弱阳性：细小颗粒分散,（,3,）强阳性：颗粒粗大而密集,3,、意义：,（,1急粒：强阳性,（,2,）急单；弱阳性,（,3,）急淋：阴性,（二）中性粒细胞碱性磷酸酶染色,1,、原理,：,NAP,（,neutrophil,alkaline,phosphatase,）的显示方法有偶氮偶联法：,NAP,（,PH9.4-9.6,）,-,磷酸茶酚钠,-,茶酚,+,重氮盐形成灰黑色沉淀（定位于酶活性处）。,2,、结果：,（,1,）,5,级分类,0,级阴性,1,级,+,2,级,+,3,分,+,4,分,4,（,+,）,（,2,）阳性率报告：,计数,100NC,中阳性细胞分率。,（,3,）积分报告：,100NC,细胞的累积分数,3,、参考区间：,NAP,：阳性率：,10-40%,积分40-80,分,4,、临床意义：,（,1,）感染性疾病的诊断：鉴别细菌或病毒感染,（,2,）,CML,和类白血病鉴别,（,3,）,AA,与,PNH,鉴别,（三）酸性磷酸酶染色,1,、原理,：,ACP,（,acid,phosphatase,）：,ACP,（,PH5.0,）,甘油磷酸钠,磷酸钠,+,硝酸铅,磷酸铅沉淀,+,硫化铵反应,棕黑色硫化铅沉淀。,2,、结果：,胞质内出现棕黑色颗粒为阳性反应。,3,、意义：,（,1,）多毛细胞白血病（,hairy cell leukemia,，,HCE,）诊断：,HCL,为阳性不被,L-,酒酶抑制,（,2,）,T-B,淋巴细胞鉴别：,T,阳性，,B,阴性3,）协助鉴别,Gaucher,病与,Niemann,-Pick,病：,Caucher,阳性，,Niemann,-Pick,阴性,（,4,）单核细胞、组织细胞、网状细胞、巨核细胞,ACP,阴性。,（四）氯化醋酸,AS-D,茶酚酯酶染色,1,、原理：,AS-D,（,SE,）,氯化醋酸,AS-D,茶酚,AS-D+,重氮盐,GBC,偶联,红色沉淀定位于胞浆中,2,、结果：,粒系,阳性或强阳性反应,单核,阴性或弱阴性反应,淋巴、嗜酸细胞、浆细胞,阴性反应,3,、意义：,（,1,）急粒,阳性或强阳性,（,2,）急单、急淋,阴性反应,（五）,-,醋酚茶酚酯酶染色,1,、原理：,-NAE-,醋酸茶酚,茶酚,+,重氮盐染料偶联,黑色沉淀定位于胞浆中。,2,、结果：,1,、单核细胞,阳性（灰黑色沉淀）,2,、粒细胞,弱阳性,3,、淋巴细胞,阴性,3,、意义：,1,、急单,强阳性反应,2,、急粒,弱阳性反应,（六）糖原染色,1,、原理：,PAS,反应,过典酸（糖原）,醛基,+,无色品红,紫红色化合物,2,、结果：,（,1,）阳性：颗粒状、小块状或弥漫均匀红色,（,2,）分为：强阳性、弱阳性和阴性或阳性百分率,（,3,）粒系：,原粒阴性，早幼粒以下阶段阳性反应程度渐增强,单核弱阳性，淋巴细胞阴性,红系：阴性,巨核：阳性,3,、意义：,1,、红血病与巨幼贫鉴别：前者幼红细胞阳性，后者幼红细胞阴性2,、白血病：急粒：阴性或弱阳性,急淋：原幼淋阳性呈粗颗粒状或块状,急单：呈弥漫均匀或细颗粒状,3,、其它：,Gaucher,细胞,阴性,Niemann,-Pick,阴性,（七）铁染色：,1,、原理：,（,1,）铁,铁蛋白或含血黄素,单核,-,吞噬细胞质内,（,2,）,Fe3+,亚铁氰化钾,铁氰化铁沉淀（普鲁土蓝）,2,、结果：,（,1,）细胞外铁：一、,1+4,（,+,）,（,2,）细胞内铁：,含有铁颗粒的幼红细胞,铁粒幼红细胞,油镜下计数,100,个幼红细胞计算其阳性率,I,、,II,、,、,和环状铁粒幼细胞,3,、参考值：,（,1,）细胞外铁：,1+2,（,+,），大多为,2+,（,2细胞内铁：,2090%,4,、意义：,（,1,）缺铁性贫血诊断,（,2,）非缺铁性贫血：如,AA,、铁粒幼细胞性贫血、溶贫、巨幼贫、内外铁增加,（,3,）,MDS-RARS,：环状铁粒幼细胞,15%,四、细胞免疫分型：,1,、用单抗和免疫学技术检测细胞表血特异性,2,、分化抗原,细胞所属系列、分化程度及功能状态。,（一）检测方法：,1,、免疫荧光法（,immme,of,luoresence,technique,）,（,1,）原理：,荧光标记的单抗,+,细胞表面分化抗原结合,产生荧光,用荧光显微镜和流式细胞仪检测,直接荧光法、间接荧光法,（,2,）参考值：,有荧光,阳性细胞,无荧光,阴性细胞2,、免疫酶染色法：,（,1,）,APAAP,法（碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶法）：,一抗,+CD,抗原,+AKP,标记二抗,底物显色,（,2,）,PAP,法（过氧化物酶抗过氧化物酶法）,一抗,+CD,抗原,+POX,标记抗体,底物显色,（,3,）,ABC,法（亲和素,生物素,酶复合物）法：,一抗,+CD,抗原,+,生物素标记二抗,HRP,标记亲和素,+,底物,（二）细胞免疫分型的临床应用,1,、有助于识别不同系列的细胞：,髓系：,CD13,、,CD14,、,CD15,、,CD32,、,CD33,、,CD65,、,CD91,、,CD156,、,CD166,淋巴系：,CD1,、,CD2,、,CD3,CD4,、,CD5,、,CD7,、,CD8,、,CD9,、,CD10,、,CD19,、,CD20,、,CD52,、,CD77,巨核系：,CD41,、,CD42,、,CD61,2,、识别不同的淋巴细胞,：,T,系统：,CD2,、,CD3,、,CD4,、,CD7,、,CD8,B,系统：,CD19,、,CD20,、,CD22,NK,：,CD16,、,CD56,3,、用于,T,淋巴细胞亚群检测：,T,：（,CD3,）,TH,（,CD4+CD8,）,TS,（,CD4 CD8+,）,4,、用于识别不同分化阶段的细胞：,（,1,）造血干细胞,CD34+,、,CD90+,、,lin,（,2,）髓系祖细胞,CD34+,、,CD33+,（,3,）,T,淋巴细胞系祖细胞,CD34+,、,TDT+,、,CD10+,、,CD7+,（,4,）,B,淋巴细胞系祖细胞,CD34+,、,CD19+,5,、有助于识别不同功能状态的细胞,：,记忆,T,细胞,CD45RO,高表达、,CD45RA,不表达,活化,T,细胞,CD45RA,不表达、,CD25,、,CD2,、,CD45RO,、,CD54,、,CD58,均强表达。,6,、用于不同系列和不同分化阶段的细胞进行分离：分选的流式细胞仪,7,、白血病的免疫分型,8,、可用于白血病微小残留病检测：,（,1,）,CD,病人：,CD19,、,CD22,、,CD10,、,CD7,、,CD5,、,CD13,、,CD37,、,CD34,阳性并伴有,TbT,+,则可诊断微小残留病存在,（,2,）敏感性：,10,-4,水平,（,三）急性白血病细胞免疫表型特点,五、细胞遗传学分析,1,、染色体检查方法,2,、染色体分析,（,1,）染色体命名：,46,条，,22,对常染色体，,1,对性染色体,男,46XY,，女：,46XX,A-G7,组,ZP35,表示,（,2,）核型分析及其书写：,（,1,）书写顺序：染色体数目、性染色体、染色体异常,（,2,）染色体变异以小写表示：,t,易位,iso,或,i,等臂染色,inv,倒位,ins,插入,del,缺失,r,环状染色,“,”-,丢失 增加,（,3,）第一括号内表示染色体数目，第二括号内表示染色体区带,（,4,）,P,表示短臂，,q,表示长臂,（,5,）,45,，,X,，,-Y,，,t,（,8,；,21,），（,q22,，,q22,）,表示,45,条染色体，丢失,Y,染色体，第,8,号与第,21,号染色体之间易位，断裂点在,8,号染色体长臂,2,区,2,带与,21,号染色体长臂,2,区,2,带。,3,、染色体畸变,（,1,）二倍体（,2n,）,（,2,）数目畸变：整倍体和非整倍体,（,3,）亚二倍体：比,2n,少,（,4,）超二倍体：比,2n,多,第五节：常见血液病的血液学特征,一、贫血,贫血（,anemia,）指单位容积循环血液中红细胞数，血红蛋白量及血细胞比容（,Hct,）低于参考值低限，,贫血是一种症状,。,（一）缺铁性贫血：,1,、定义,：,IDA,（,iron deficiency anemia,）：由于缺铁而造成的贫血。,2,、血象：,（,1,）,Hb,、,RBC,下降，,Hb,下降更明显,（,2,）血片：,RBC,体小、淡染、中心区扩大（,MCV,、,MCH,、,MCHC,均下降）,（,3,）,RC,轻度增多或正常,（,4,）,WBC,、,PLT,正常,3,、骨髓象：,（,1,）增生明显活跃,（,2,）红系：明显增生,30%,，以中、晚幼红为主，胞体小胞质少，嗜碱性，核小，固缩,（,3粒细胞等相对减少，巨核系正常,（二）溶血性贫血：,1,、定义,：,HA,（,hemolytic anemia,）是由于各种原因使红细胞寿命缩短，破坏增加，超过了骨髓的代偿功能所致的贫血。,2,、血象：,（,1,）,Hb,、,RBC,平行下降,（,2,）血片：,RBCRA,不一，易见大,RBC,，嗜多色红细胞及有核红细胞，可见,H-J,小体，,Cabot,环、点彩,RBC,，也见特殊,RBC,：球形,RBC,、靶形,RBC,、椭圆,RBC,，裂红细胞。,（,3,）,RC,：明显增多,（,4,）,WBC,、,PLT,增多或正常,3,、骨髓象：,（,1,）增生明显活跃,（,2,）红系：明显增多，可,30,50%,，以中晚幼红为主，可见核畸形，,H-J,小体，嗜硷性点彩等。,（,3,）粒系相对减少，形态正常。,（,4,）巨核系正常。,（三）巨幼细胞贫血,1,、巨幼贫,（,megaloblastic,anemia,）：由于叶酸及,VitB12,缺乏使,DNA,合成障碍所引起的一组贫血。,2,、血象：,（,1,）,Hb,、,RBC,下降，,RBC,下降更明显。,（,2,）血片：,RBC,大小不等，可见嗜多色、点彩，,H-J,小体，,Cabot,环。,（,3,）,RC,轻度增加。,（,4,）,WBC,减少，分叶过多，在,45,叶以上。,（,5,）,Plt,减少。,3,、骨髓象：,（,1,）增生明显活跃,（,2,）红系：,40%,，巨幼变,（,3,）粒系：巨幼变,（,4,）巨核系：巨幼变及分叶,（四）再生障碍性贫,1,、再障（,aplastic,anemia AA,）,：是由于多种原因所致骨髓造血干细胞减少和功能异常导致三系减少。,2,、症状为：感染、贫血和出血。,3,、分型：急性和慢性。,1,、急性型：,（,1,）血象：,Hb,、,RBC,明显减少,RC,：,0.5109/L,或,O,WBC,：,1.0-2.0109/L,，,L,占,60%,plt,：,20109/L,或,10109/L,（,2,）骨髓象：,增生明显减低,三系明显减少,非造血细胞增多,骨髓小粒以非造血细胞为主。,2,、慢性型：,（,1,）血象：,Hb,、,RBC,平行下降，为中、重度贫血,RC,：,15109/L,WBC,：,2.0-3.0109/L,，,L,占,50%,plt,：,30109/L-50109/L,（,2,）骨髓象：,增生减低三系明显减少淋巴细胞相对增多、非造血细胞增多骨髓小粒以非造血细胞为主。,二、白血病,1,、白血病（,leukemia,）：,白血病细胞异常增生与分化成熟障碍，并浸润其他器官和组织，正常造血受抑制。,2,、症状：贫血、出血感染和浸润症状,3,、分型：急性和慢性,4,、分类：,成人以急粒为主，儿童以急淋为主,慢粒比慢淋为多见,（一）急淋白血病：,1,、血象：,（,1,Hb,、,RBC,下降（重度或中度下降），可见幼红细胞,（,2,）,WBC,计数：,增多：,10-50109/l,正常,减少：如,APL,（,3,）,WBC,分类：可见白血病细胞（幼稚细胞，异常白细胞），可达,30-90%,。,（,4,）,Plt,计数减少：早期正常，晚期明显减少,2,、骨髓象：,（,1,）骨髓增生明显或极度活跃,（,2,）一系或二系原始细胞明显增多：,30%ANC,（,3,）其它系列受抑制或减少,（,4,）涂片中：急淋易见涂抹细胞，急非淋，可见,Auer,小体,3,、分型,（,1,）,FAB,分型：急淋和急非淋,（,2,）,AML,：,M1,、,M2,、,M3,、,M4,M5,、,M6,、,M7,（,3,）,ALL,：,L1,、,L2,、,L3,（,4,）我国,AML,分型标准：修改为：,M2M2a,、,M2b,M3M3a M3b,M4M4a,、,M4b,、,M4c,（二）慢性白血病：分为慢性粒细胞和慢性淋巴细胞白血病,1,、慢性粒细胞白血病,（,1,）血象：,Hb,、,RBC,早期轻度贫血，晚期重度贫血,WBC,明显升高：早期（,20-50,）,109/L,晚期（,100-300,）,109/L,分类：以中、晚、杆状核粒细胞为主，原,+,早,10%,PLT,：早期升高，晚期下降,（,2,）骨髓象：,增生极度活跃,粒系增生明显占,90%,以上，以中、晚、杆状核粒细胞为主，原,+,早,10%,，嗜酸、嗜硷细胞易见,红系增生受抑,巨核系早期增多，晚期减少,NAP,积分减少,t(9;22)(q34;911),bcr-abl,融合基因,2,、慢性淋巴细胞白血病,（,1,）临床特征：,为,B,淋巴细胞白血病,欧美国家多见,老年人多见,肝脾淋巴结进行性肿大,病程长达,10-20,年。,（,2,）血象：,Hb,、,RBC,轻度下降，合并,HA,时明显下降,WBC,升高：（,15100,）,109/L L60-70%,，以小淋巴细胞增生为主。,中性粒轻度减少，,PLT,正常。,（,3,）骨髓象：,增生明显或极度活跃,淋巴系增多,50%,，为成熟淋、原、幼淋少见粒系，红系减少,晚期巨核细胞减少,三、骨髓增生异常综合征,1,、概念：,（,1,）,MDS,（,myelodysplastic,syndrome MDS,），是二组造血干细胞克隆性疾病，出现病态造血。,（,2,）外周血细胞减少，而骨髓细胞增生，成熟及幼稚细胞形态有异常。,2,、,MDS,分类：,RA,（,refractory anemia,）,AR-S,（,refractoryamemia,with,sideroblastosis,）,RAEB,（,refractoryamemia,with excess of blasts,）,CMML,（,chromic,myelomonocytic,leukemia,）,RAEB-T,（,refractoryanemia,with excess of blasts in trans-formation,）,3,、血象：,（,1,）,Hb,、,RBC,下降，,RBC,大小不均及异形，可见椭圆，嗜多色性红细胞、点彩,RBC,，有核,RBC,，,RC,减少。,（,2,）,WBC,正常或减少：形态异常，分叶过多，,Pelger-Huet,畸形，胞质颗粒减少或缺如，有异常大颗粒，也可见幼稚细胞。,（,3,）,plt,：正常或减少，可见巨大或畸形血小板。,4,、骨髓象：增生及病态造血,（,1,）增生明显活跃,（,2,）红系明显增生：,30%50%,，幼红有形态异常,巨幼样变，核形异常，双核，多核，核芽，分叶状，碎裂，环状铁粒幼红细胞增多。,（,3,）粒系正常或减少，核左移和形态异常。,（,4,）巨核细胞正常或增多：小原巨核细胞，畸形血小板,四、多发性骨髓瘤,1,、概念：,MM,（,multiple,myeloma,）：浆细胞异常增生的恶性疾病,单克隆浆细胞增生,单克隆免疫球蛋白,骨质破坏,血清,出现,M,蛋白,2,、血象：,Hb,、,RBC,下降，,RBC,呈纸钱状排列，,ESR,升高。,WBC,计数正常或减少，可见幼稚粒细胞,浆细胞：占,23%,如,2109/L,可诊断浆细胞白血病,3,、骨髓象：,（,1,）增生明显活跃,（,2,）骨髓瘤细胞,早期：,5-10%,呈灶性分布,中期：,15-20%,可确诊,形态：与浆细胞相似：,大小不一,形态圆或椭圆,多核瘤细胞易见,胞质丰富,（,3,）粒系、红系、巨核系可减少或正常,谢谢大家!,