实验十一 多管发酵法测定水中大肠菌群.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,多管发酵法测定水中大肠菌群,考查内容：,一、预习报告（包括提问）,二、操作（无菌操作，随机抽看）,三、实验报告,实验十一,(,综合实验）,多管发酵法测定水中大肠菌群,一、实验目的,二、实验原理,三、实验材料,四、实验步骤,五、实验报告,一、实验目的,1,、学习测定水中大肠菌群数量的多管发酵法。,2,、了解大肠菌群的数量在饮水中的重要性。,发酵法：,又称多管发酵法或三步发酵法,1),初发酵（推测试验）：,将不同稀释度的水样，分别接种于含有乳糖等糖类的培养液中（,3,倍或,1,倍乳糖液），经,37 C,培养,24 h,，观察产酸产气情况，培养基内加有,溴甲酚紫,作为,PH,指示剂，细菌产酸后，培养基即由原来的,紫色变为黄色,，以初步判断是否有大肠菌群存在。,二、实验原理,2,）平,皿,分离（证实试验）,水,中除,大肠菌群外，尚有其它细菌可能引起糖类发酵，因此需要进一步证实。,将初发酵管中已发酵的菌液接种于伊红美兰培养基，,37,C,培养,24 h,，根据菌落特征（带核心的、有金属光泽的深紫色菌落），挑取可能为大肠菌群的菌落制片，经革兰氏染色，进一步证实是否为大肠菌群。,3,）复发酵试验,(,完成实验）,将上述可能为大肠菌群的菌落再次转接入,1,倍乳糖培养液中，经,37,C,培养,24 h,，产酸产气者即最后确证为存在大肠菌群。,产酸、产气分别记为阳性反应，不产酸、产气则记为阴性反应；,根据阳性管数量，查表求得水体大肠菌群的数量。,三、实验材料,1,、培养基：,乳糖蛋白胨发酵管（内有倒置小套管），三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管（瓶）（内有倒置小套管），伊红美蓝琼脂平板，灭菌水。,2,、仪器或其他用具：,载玻片，灭菌带玻璃塞空瓶，灭菌吸管，灭菌试管等。,四、操作步骤,1,水样的采取 实验室提供水样,2,河水的检查,（,1,）初（步）发酵实验,水样的稀释：,10,-1,与,10,-2,接种：分别吸取,1ml,10,-2,、,10,-1,和原水样,接入装有,10ml,普通浓度,乳糖蛋白胨发酵管；另取10ml,原水样,接入装有,5ml,三倍浓缩,乳糖蛋白胨发酵管，混匀后，,37,培养,24 h,，,24 h,未产气的继续培养,48 h,。,（,2,）平板分离,将经,24 h,和,48 h,培养后产酸产气的发酵管，分别划线接种于伊红美蓝琼脂平板上，再于,37,培养,18,24 h,，将符合下列特征的菌落进行染色镜检。,深紫黑色，有金属光泽；,紫黑色，不带或略带金属光泽；,淡紫红色，中心颜色较深。,（,3,）复发酵试验,将镜检为革兰氏阴性无芽孢杆菌的菌株重复初步发酵试验。并根据初发酵管试验的阳性管查表，即得大肠菌群数。,图,1,多管发酵测定水中大肠菌群的操作步骤和结果解释,10ml10,0,1ml10,0,1ml10,-1,1ml10,-2,3,1,1,1,1,支,各,3,支,五、思考题,1.,实验结果报告,河水水样：阳性结果记“”，阴性结果记“”。,查表,6,获得每升水样中总大肠菌群是多少？,2.,思考题,（,1,）何谓大肠菌群，它主要包括哪些细菌属？,（,2,）为什么,EMB,培养基的琼脂平板能够作为检测大肠菌群的鉴别平板？,