第八章 第一节 第二节.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第八章 药效学研究技术与方法,第一节 药效学研究的基本内容 与要求,新药的有效性评价主要包括两部分：,试验部分（主要药效学研究）,临床部分（临床研究）,一、新药药效学研究的意义,药效学试验的定义：,在机体（主要为动物）或其器官，组织，细胞，亚细胞，分子，基因水平等模型上，采用整体和离体方法，进行综合和分析的试验研究，以阐明药物防治疾病的作用及其作用机制，从而为新药的有效性评价提供依据。,药效学试验的意义：,通过研究可以初步明确新药是否有效；药理作用的强弱和范围；与同类药或同剂型比较，在药效和毒副反应上的优缺点和特色等。从而确定有无实用价值及发展前景；可否开始人体试验及进行系统的临床研究等。,二、新药药效学研究的重要性和局限性,1.,发现研制新药及对药物进行再评价,2.,为新药临床研究奠定基础,3.,补充临床研究的不足,4.,揭示中药复方药效的物质基础，开展作用机制及配伍规律的研究,5.,药效学研究的局限性,黄连,感染性疾病,抗菌,产后子宫,复旧不全,收缩子宫,益母草,艾狄森病,肾上腺皮质,激素样作用,甘草,生脉散,新,物质：,5-,羟甲基,-2-,糠醛（,5-HMF,）,能降低心肌缺血小鼠血清乳酸脱氢酶（,LDH,）,水平,及心肌组织中丙二醛（,MDA,）,含量，有益于全方的,抗心肌缺血作用。芍药甘草汤,两药单用对神经肌突触无阻滞作用，并用后则产生,明显的作用。用芍药苷和甘草甜素合用能产生并用,的效果。有效配比为,1:2,。,观察方剂配伍组成及剂量比例与药效学变化之间,的关系，探讨方剂配伍规律。,瓜蒌薤白白酒汤,单味瓜蒌,扩张冠脉，增加冠脉流量，,拮抗垂体后叶素所引起的,冠脉流量降低等方面，功效,一致,旋覆代赭汤,传统观念：旋覆花为君，,代赭石为臣，党参、生姜、,甘草为佐使。,现代药理研究：主药为,旋覆花、党参,巴豆,峻下逐水药，使人类产生剧泻，但对小鼠,无泻下作用，反使其长肥，俗称：肥鼠子,雷公藤,可使人,中毒死亡，但对羊无毒性,丹皮酚,对,实验性高血压有明显降压作用，但对,人的高血压无明显效果。,葛根中的黄酮,对,动物肝炎有效，对人无效,垂盆草,对,小鼠有很好的避孕效果，对人无效,三、新药药理学研究的基本要求,1.,试验主要负责人应具备药理、毒理专业高级技术职称和有较高的理论水平，工作经验与资历，确保试验设计合理，数据可靠，结果可信，结论判断准确。,2.,研究单位应具有较高的科研水平，技术力量及组织管理能力，具有较好的客观条件，实验室，仪器设备等。（,GLP,）,3.,试验记录应符合,药品研究试验记录暂行规定,，应真实，完整，规范，对试验中出现的新问题或特殊现象均应写明情况，防止漏记和随意涂改。,(1),试验名称,(2),试验设计或方案,(3),试验时间,(4),试验材料,(5),试验环境,(6),试验方法,(7),试验过程,(8),试验结果,(9),结果分析,(10),试验人员,四、新药药效学研究的步骤及基本内容,（一）、试验设计,1.,试验设计的根据和原则,实事求是，体现出高水平，有新意。,研究工作应做到：随机，对照，重复,2.,根据新药不同情况设计试验方案,(1),以病名为主治的新药,(2),以中医证名为主治的新药,主要药效,辅助药效,急性支气管炎：抗感染、抗炎、镇咳、祛痰、解热,脾虚证：消化系统功能减退，副交感神经系统功能,偏亢，免疫功能和代谢能力偏低等。药效实验选作,有关胃肠功能的实验，对脾虚模型动物的治疗作用，,以及抗应激试验和免疫功能测定3),缺乏适当动物模型的新药,系统性红斑狼疮、皮肌炎、系统性硬皮病等免疫性,疾病、精神病，以及梅核气、奔豚证等。,应根据疾病的原因，病理变化，临床症状及新药的,主要功能等，设计药理实验方案，用间接的药效提,示新药的作用。再结合临床研究，对新药的有效性,作出评价。,银屑病,病因,确切病因不明，可能与遗传，代谢障碍，感染，免疫功能低下等因素有关；,表现,基本病理特点为皮损部位表皮细胞过度增殖和角化不全。,药效实验,药效学可选择调节表皮细胞生长，影响免疫功能，抗炎和止痒作用，以及活血化瘀等实验。,3.,新药研究要求达到的水平,选择药物作用本质的试验方法和观察指标，首先确定主要作用（关键性药效）一般主要作用设,1-3,项，每项选作,2-3,种试验方法，从多指标验证其药效。,其他作用（辅助性药效）可酌情作,2-5,项，每项选作,1-2,种试验方法。,必须紧扣功能主治，避免以广取胜。,例：抗癌药从四方面研究,增效,抗癌,扶正,减毒,应能,证实药物的主要治疗作用，以及较重要的其他治疗作用。主要的药效作用应明确，并力求反应量效和（或）时效关系。,尽可能用实验证明其有效成分或有效部位（群）就是主要药理作用的成分。,1.,体外实验（离体实验）,试管内实验,细胞体外培养,离体组织,离体器官,优点：排除体内多种因素的干扰,，重复性好，结果易于分析，省,药，省动物，适用于分析实验，,特别是作用机制的研究。,缺点：失去了机体完整统一的内,环境和神经体液调节，与临床状,态相距较远。离体实验与体内实,验结果不一致的现象时有发生。,（二）、药效学试验的方法,陈皮、青皮,对胃肠平滑肌离体抑止，口服煎剂,兴奋。,原因：离体时为橙皮苷和对,羟福林的作用；口服时为挥发油对,胃肠粘膜的刺激作用。,磺胺药物,栀子苷,离体作用弱，体内代谢物京尼平,作用强。,体外抗菌作用弱，体内强。,接近临床状态，尤其符合中药多成分、多靶点、多系统的调节整体作用，并可弥补离体实验的不足和局限性，故中药的药效学实验应以体内实验为主，体外实验为辅。,2.,体内实验（在体实验）,1.,动物模型的意义,动物病理模型是具有人类疾病模拟性表现的实验对象和材料，它是探索人类疾病本质及新药有效性评价的一个重要方法和手段。正确制作或选择一个合理的动物模型，可以增加药效学研究的真实性，可信性，成功率，提高研究的设计水平和科学性。,（三）、药效学试验的动物模型,2.,中医证的模型,“血瘀、阴虚、阳虚、气虚、血虚、脾虚、肾虚、厥脱证”,比较法,：在模型动物身上测得生理生化指标，组织,形态变化与临床患者情况进行比较。,药物反证法,：用中药代表方对所建立模型进行治疗，,根据有无疗效来判断模型的可靠与否。,3.,药效学研究中动物病理模型的基本要求,动物模型往往侧重于体现有关“病”、“证”的一定阶段，某一证型，某些主要症状或病理变化。,例：脾虚证消化道吸收、分泌、运动异常，自主神经功能紊乱，体温调节中枢和血管运动中枢失常，内分泌和免疫功能变化等多系统的异常。,自发性动物模型,诱发性动物模型,包括突变系的遗传疾病及近交系,的肿瘤模型，如：高血压大鼠，,糖尿病小鼠，肥胖症小鼠，无胸,腺裸鼠，青光眼兔。,通过物理、化学和生物等致病因,素，人工诱发动物某些组织器官,或全身损伤，在功能，代谢和,（或）形态学上出现与人类相应,疾病类似的病变。,模型的评价及选择标准,4.,模型的相对性,病毒性乙型肝炎,鸭肝炎,？,糖皮质激素,阳虚,？,（四）、药效学试验指标的选择,1.,特异性,选择针对性强、专属性好，能够反映变化本质。,中药药效：选择一组指标,解表：发汗，解热，镇痛，镇咳，祛痰，平喘，抗炎，抗过敏，免疫功能。,2.,敏感性,3.,重现性,4.,客观性,5.,指标的量化,（五）、药效学研究中的动物选择,1.,种类,尽量选择功能、代谢、结构与人类相似的动物，使对药物的反映接近人类。,灵长类，小鼠，家兔，豚鼠，猫、狗、大鼠，猪,对药物的敏感性,2.,品系,3.,动物等级和健康,普通动物（,conventional animal,CV,）,清洁动物（,clean animal,CL,）,4.,实验设施,5.,年龄,6.,性别,（六）、对受试药物的要求,1.,处方固定,2.,制备工艺、药品质量标准应基本稳定,3.,制剂或提取物作为受试药的优缺点,4.,给药途径对受试药的要求,（七）、药效学试验剂量,1.,药效学试验剂量的确定,(1),临床等效剂量：根据体表面积折算法换算的在同等体表面积单位时的剂量。,(2),根据临床用量的体重计算：,人,(1):,狗、猴,(3):,猫、兔,(5):,大鼠、豚鼠,(7):,小鼠,(11),(3),根据半数致死量计算：,(4),根据文献估计剂量：,(5),药效试验的高剂量应低于长期毒性试验的中剂量或低剂量。,(6),通过预试验测定剂量,2.,剂量的设置,剂量组：三个剂量组。动物数,量效关系：结果应呈现明显的量效关系。,中药成分复杂，难以体现量效关系。,人参,Rb1,，,人参二醇型皂苷，中枢抑制作用,Rg1,，,人参三醇型皂苷，中枢兴奋作用,增强心肌收缩力 扩张血管,(3),剂量组设置的原则要求：按等比级数分组,1.,给药途径,枳实、青皮：含有对羟福林，注射给药可激动肾上腺素产生升压效应，口服时该成分被碱性肠液破坏，故无此作用。,桃仁提取物注射用于治疗肝纤维化，所含苦杏仁苷大部分以原型排出，少量转化为无毒的硫氰酸盐被排出体外；如采用口服给药，在胃肠道内转化为氢氰酸，毒性比静脉注射大,40,倍。,（八）、药效学试验的给药途径和方法,2.,给药方法,(1),给药容量,(2),不同剂量的体现,(3),给药方式,预防性给药，治疗性给药,1.,正常对照组,辅料对照组,2.,模型对照组,3.,阳性（已知有效药物）对照组,(1),检验试验方法的可靠性,(2),比较受试药物的优劣和特点,(3),要求：可比性，合法性，择优性,4.,原剂型对照组,（九）、,药效学研究的对照,（十,）、,实验结果的处理,1.,图标,2.,统计学处理,质反应资料,量反应资料,等级资料,第二节,中药血清药理实验方法,将受试药物经口给予动物后，取其血清作为药源加入离体反应系统中研究其药理作用。,一、动物给药,1.,动物选择,2.,给药剂量,3.,给药方法,二、采血时间,1.,通法,每日给药,2,次，连续给药,3,日，末次给药后,1h,采血。,2.,预试验法,三、含药血清的制备,1.,关于灭活,55,，,30min,2.,关于血清的添加量和方法,异种动物血清对细胞的毒性作用，此外血清对细胞还有其他活性。,四、含药血清的保存,五、实验设计,1.,空白血清对照,2.,量效设置的两种方式,(1),按给药剂量分组,(2),按血清添加量分组,六、基本评价与中药新药研制开发的关系,1.,方法可行,2.,给药后时间量效关系较易观察,3.,影响因素较多，实验设计和操作务必注意,七、注意点,1.,实验设计方面,空白血清对照的“质”不同,空白血清对照的“量”不同,2.,操作方面,