第五章_中药制剂中各类化学成分分析.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第五章 中药制剂中各类化学成分分析,1,生物碱类成分分析,概述,理化性质,物理性状,（存在的形态，升华性，挥发性，光学活性）,碱性,溶解性,沉淀反应,沉淀剂：碘化物复盐、重金属盐、大分子酸,显色反应,+,酸性染料（磺酸肽类）,有色配合物,紫外光谱特征,游离,易溶于,CHCl,3,，,Et,2,O,，,EtOH,等有机溶剂,生物碱盐,水溶性增强,1,生物碱类成分分析,生物碱类成分的分离,溶剂萃取,柱层析（氧化铝、硅藻土、离子交换柱）,定性鉴别,沉淀反应、显色反应,多肽、蛋白质、鞣质等,假阳性反应,麻黄碱、秋水仙碱等,假阴性反应,马钱子散中生物碱成分的鉴别,取马钱子散,1g,，,加浓氨试液数滴及氯仿,10ml,，,浸泡数小时，,滤过，取滤液,1ml,蒸干，残渣加稀盐酸,1ml,使溶解，加碘化铋,钾试液,12,滴，即生成黄棕色沉淀。,1,生物碱类成分分析,定性鉴别,薄层色谱鉴别,吸附剂：氧化铝、硅胶,展开剂：氯仿、苯等,显色剂：改良碘化铋钾试剂，碘蒸气等,气相色谱,麻黄碱、苦参碱、颠茄类生物碱的含量测定,液相色谱,1,生物碱类成分分析,含量测定,总生物碱含量测定,化学分析法,分光光度法,直接测定,离子对萃取比色法,酸性染料比色法,BH,十,十,In,（,BH,十,In,）,BH,十,In,苦味酸盐比色法,雷氏盐比色法,异羟肟酸铁比色法,（,含有酯键结构的生物碱,）,1,生物碱类成分分析,含量测定,单体生物碱含量测定,薄层色谱法,高效液相色谱法,液,液分配色谱法（以反相为主，如,ODS,或,C,18,）,改进流动相（硅醇基抑制剂、低浓度的离子对试剂、季铵盐试剂、电解质缓冲液）,固定相改进（封尾技术）,液,固吸附色谱法,离子交换色谱法（阳离子交换树脂）,检测器,气相色谱法,2,黄酮,类成分分析,概述,理化性质,物理性状,（存在的形态，颜色，挥发性，光学活性）,溶解性,酸碱性,酸性：与酚羟基的数目和位置有关,7,4-,二羟基,7-,或,4-,羟基,一般酚,5-,羟基,碱性,游离甙元,易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙醚等,黄酮甙,易溶于水、甲醇、乙醇,2,黄酮,类成分分析,理化性质,显色反应,还原反应（盐酸镁粉反应）,金属盐类试剂的配合反应（铝、铅、锆、镁盐）,紫外光谱特征,I,带,(300-400nm),B,环,桂皮酰基,II,带,(240-285nm),A,环苯甲酰基,2,黄酮类成分分析,黄酮类成分的分离,溶剂萃取,柱层析（聚酰胺柱）,沉淀法,定性鉴别,显色反应,盐酸,-,镁粉反应,金属盐类配合反应,2,黄酮,类成分分析,定性鉴别,薄层色谱鉴别,硅胶,-,分离弱极性黄酮,展开系统：甲苯,-,甲酸乙酯,-,甲酸，氯仿,-,甲醇,聚酰胺,-,分离含游离酚羟基的黄酮及其苷,展开系统：醋酸，醋酸乙酯,-,甲酸,-,水等,纤维素,-,分离多糖苷混合物,展开系统：正丁醇,-,乙酸,-,水，甲酸，乙酸,2,黄酮,类成分分析,含量测定,总黄酮含量测定,紫外分光光度法,比色法,高效液相色谱法,正相色谱,硅胶固定相,没有羟基或乙酰化黄酮类成分,反相色谱（,C,18,或,C,8,）,流动相：甲醇,-,水,-,乙酸（磷酸缓冲液），乙腈,-,水,检测器,2,黄酮,类成分分析,银杏叶提取物,总黄酮醇苷,含量,测定,含量测定,色谱条件与系统适用性试验,用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇,-0.4%,磷酸溶液（,50,：,50,）为流动相；检测波长为,360nm,。,理论板数按槲皮素峰计算应不低于,2500,，山柰素酚峰与异鼠李素峰的分离度应大于,1.5,。,对照品溶液的制备,（略）,供试品溶液的制备,取本品,10,片，除去包衣，精密称定，研细，取约相当于总黄酮醇苷,19.2mg,的粉末，精密称定，精密加入甲醇,20ml,，称定重量，超声处理,20,分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液,10ml,，置,100ml,锥形瓶中，加甲醇,10ml,、,25%,盐酸溶液,5ml,，摇匀，置水浴中加热回流,30,分钟，迅速冷却至室温，转移至,50ml,量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（,0.45,m,）滤过，取滤液，即得。,测定法,分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各,10,l,，注入液相色谱仪，测定，分别计算槲皮素、山奈素和异鼠李素的含量，按下式换算成总黄酮苷的含量。,总黄酮醇苷含量,=,（槲皮素含量,+,山奈素含量,+,异鼠李素含量）,2.51,3,三萜皂甙,类成分分析,概述,理化性质,物理性状（存在的形态，表面活性，吸湿性）,溶解性,紫外光谱特征,大多无明显的紫外吸收或仅在,200nm,附近有末端吸收,皂甙元,能溶于石油醚、苯、乙醚、氯仿等,皂甙,可溶于水，易溶于热水、含水稀醇等,甘草酸,人参皂甙,(A,型,),3,三萜皂甙,类成分分析,理化性质,显色反应,醋酐,-,浓硫酸反应,五氯化锑反应,三铝醋酸反应,冰醋酸,-,乙酰氯反应,氯仿硫酸反应,金属盐类反应,+,铅、钡、铜盐,沉淀,酸性皂甙,+,硫酸铵,/,醋酸铅,/,中性盐,沉淀,中性皂甙,+,碱式醋酸铅,/,氢氧化钡,/,碱性盐,沉淀,3,三萜皂甙,类成分分析,三萜皂甙类成分的分离,溶剂萃取,柱层析（大孔树脂柱）,沉淀法,定性鉴别,泡沫反应,显色反应,3,三萜皂甙,类成分分析,定性鉴别,薄层色谱鉴别,吸附剂：硅胶、氧化铝、硅藻土,展开剂：,三萜皂,甙,氯,仿,-,甲醇,-,水、正丁醇,-,醋酸乙酯,-,水等,极性较大的,体系,三萜皂甙元,-,以苯、氯仿、己烷等为主要组分,显色剂,三氯醋酸、,50%,及,10%,硫酸乙醇液、磷钼酸、浓硫酸,-,醋酸酐、碘蒸气等,3,三萜皂甙,类成分分析,含量测定,总皂甙含量测定,重量法,比色法,显色剂：香草醛,-,硫酸，香草醛,-,高氯酸，酸酐,-,硫酸等等,三萜皂甙类单体成分含量测定,薄层色谱法,高效液相色谱,甘草酸、远志皂甙,紫外检测器,其他,蒸发光散射检测器（,ELSD,）,4,醌,类成分分析,概述,理化性质,物理性状（存在的形态，升华性，光不稳定性）,溶解性,酸碱性,酚羟基,酸性,游离,溶于乙醇、苯、乙醚、氯仿等,醌甙,可溶于热水，易溶于甲醇、乙醇,丹参醌,IIA,大黄素,4,醌,类成分分析,理化性质,显色反应,羟基蒽醌,+,碱,橙，红，紫红，蓝,+Pb,2+,/Mg,2+,配合物,+,对亚硝基二甲基苯胺,紫，绿蓝，灰,4,醌,类成分分析,定性鉴别,显色反应,升华法,薄层鉴别,吸附剂：硅胶,展开剂：多含甲醇或水的混合溶剂系统,分离甙和甙元,不含甲醇或水的混合溶剂系统,分离甙元,显色：碱性试剂，醋酸镁甲醇液、氨熏,4,醌,类成分分析,含量测定,游离蒽醌的测定,弱极性溶剂提取后，加碱比色,结合蒽醌的测定,极性溶剂提取，水解测甙元,先酸水解后，非,极性溶剂提取甙元后测定,醌类单体成分含量测定,薄层色谱法,高效液相色谱,4,醌,类成分分析,牛黄解毒片中游离蒽醌和总蒽醌的测定,混合碱液比色法,对照品溶液测定：,以,1,，,8-,二羟基蒽醌,为对照品，精密称取,10mg,于,100mL,量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度（,100,g/mL,）。取,1mL,对照品液于,10mL,量瓶中，在水浴上蒸干，加,5%,氢氧化钠,-2%,氢氧化铵混合碱,溶解并稀释至刻度，,放置,1,小时,，以,5%,氢氧化钠,-2%,氢氧化铵混合碱液为空白，在,510nm,波长处测定。,样品测定：,游离蒽醌的测定：取牛黄解毒片,10,片，刮去糖衣，精密称定重量，研细。称取一片重，置于具塞三角瓶中，精密加入,氯仿,100mL,，称重，水浴上,回流,4,小时，取下，加塞，放冷，称重，用氯仿补充至原重量，滤过，吸取滤液,50mL,于分液漏斗中，用,蒸馏水,20mL,洗涤,数次，至水层无色，弃去水液。氯仿层用,5%,氢氧化钠,-2%,氢氧化铵混合碱液振摇萃取,数次，直至混合碱液无色，合并碱液，用,20mL,氯仿洗涤,数次，至氯仿层无色，弃去氯仿层。将混合碱液在水浴上,加热数分钟至氯仿挥尽,，冷却，移入,100mL,量瓶中，并稀释至刻度，放置,1,小时，以,5%,氢氧化钠,-2%,氢氧化铵混合碱液为空白，在,510nm,处测定，计算游离蒽醌的含量（相当于,1,，,8-,二羟基蒽醌含量）。,4,醌,类成分分析,牛黄解毒片中游离蒽醌和总蒽醌的测定,混合碱液比色法,总蒽醌的测定：,精密称取游离蒽醌项下的牛黄解毒片粉一片置于,150mL,烧瓶中，加,2.5mol/L,硫酸,30mL,直火回流,4,小时,，放冷，加入,氯仿,20mL,，水浴,回流,0.5,小时,，放冷，吸出氯仿液，再加氯仿，反复操作至氯仿无色为止。合并氯仿层液，用,蒸馏水洗涤,数次，至水层无色，弃去水液。氯仿液用,5%,氢氧化钠,-2%,氢氧化铵,混合碱液振摇萃取数次，至碱液无色，合并，用,20mL,氯仿洗涤数次，至氯仿层无色，弃去氯仿液。将碱液置水浴上加热至氯仿挥尽，冷却，移入,50mL,量瓶中，用混合碱液稀释至刻度，放置,1,小时，以,5%,氢氧化钠,-2%,氢氧化铵液为空白，在,510nm,处测定，,计算游离蒽醌的含量（相当于,1,，,8-,二羟基蒽醌含量）。,结合蒽醌的计算：,每片含结合蒽醌量,=,每片含总蒽醌量,每片含游离蒽醌量。,4,醌,类成分分析,复方丹参片中丹参酮,A,含量测定,高效液相色谱法,色谱条件与系统适用性试验：,用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇,-,水（,73,：,27,）为流动相；检测波长为,270nm,。,对照品溶液的制备：,精密称取丹参酮,A,对照品,10mg,，置,50mL,棕色量瓶,中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取,5mL,，置,25mL,棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得（每,1mL,中含丹参酮,A40,g,）,供试品溶液的制备：,取本品,10,片，糖衣片除去糖衣，精密称定，研细，取,1g,，,精密称定，精密加入甲醇,25mL,，,称定重量，超声处理,15,分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。,测定法：,分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各,10,L,，,注入液相色谱仪，测定，即得。,5,挥发性,成分分析,概述,理化性质,物理性状（气味，比重，折光性）,溶解性：易溶于有机溶剂,显色反应,酚类,+,三氯化铁,蓝，蓝紫，绿,羰基,+,苯肼、羟胺,结晶体,醛类,+,硝酸银,胺,银镜,内酯类,+,亚硝酰铁氰化钠,+,NaOH,红色并逐渐消失,奧,类,+,浓硫酸,蓝，紫,柠檬烯,薄荷醇,桂皮醛,5,挥发性,成分分析,定性鉴别,化学反应,氧化反应,(,高锰酸钾，铬酸,）,香草醛硫酸反应,薄层色谱,吸附剂：硅胶、氧化铝,展开剂：石油醚，正己烷，（加少量的乙酸乙脂或苯）,显色剂,气相色谱法,GC-MS,或,GC-FTIR,5,挥发性,成分分析,含量测定,总挥发油含量测定,挥发油测定器,蒸馏法,单一成分含量测定,气相色谱,薄层色谱法,高效液相色谱,GC-MS,或,GC-FTIR,联用,技术,6,木脂素,类成分分析,概述,理化性质,物理性状,（存在的形态，光学活性）,溶解性,紫外光谱特征：,250-350nm,显色,反应,通用型显色剂：磷钼酸乙醇、硫酸乙醇,Labat,反应：,+,硫酸,+,没食子酸,蓝绿,Ecgrine,反应：,+,硫酸,+,变色酸,蓝紫,游离,易溶于苯、乙醚、氯仿、丙酮、乙醇等,成甙时,可溶于甲醇、乙醇等,C,H,3,C,H,3,O,C,H,3,O,C,H,3,H,3,C,O,H,3,C,O,H,3,C,O,H,3,C,O,牛蒡子甙,(,元,),五味子甲素,6,木脂素,类成分分析,定性鉴别,显色反应,功能基的颜色反应,薄层鉴别,吸附剂：硅胶,展开剂：亲脂性溶剂（苯、氯仿，加甲醇等）,显色：香草醛试液，浓硫酸试液，磷钼酸乙醇溶液、碘熏,6,木脂素,类成分分析,含量测定,总木脂素成分含量测定,变色酸比色法,单体成分含量测定,薄层色谱法,吸附剂：硅胶,展开剂：低极性的有机溶剂,高效液相色谱,固定相：,C,18,流动相：乙腈,-,水，甲醇,-,水,检测器,4,其他类型,成分分析,香豆素类,概述,理化性质,物理性状,（存在的形态气味，挥发性）,溶解性,紫外光谱特征：,300nm,（,10000,）,分子荧光,补骨脂素,茵陈内酯,游离,易溶于甲醇、乙醇、乙醚、氯仿等,香豆素甙,能溶于水、甲醇、乙醇等,4,其他类型,成分分析,香豆素类,显色反应,异羟肟酸铁反应,与酚羟基反应,FeCl,3,Gibbs,试剂（,2,6-,二氯苯醌氯亚胺）反应蓝色,重氮试剂化反应,4,其他类型,成分分析,香豆素类,定性鉴别,化学反应法,荧光法,薄层色谱法,七宝美髯颗粒中补骨脂素、异补骨脂素的鉴别,取本品,10g,，,研细，加醋酸乙酯,20ml,、,盐酸,0.5ml,，,超声处,理,20,分钟，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯,0.5ml,使溶解，,作为供试品溶液。,薄层条件：硅胶,G,薄层板，展开剂正已烷,醋酸乙酯（,4:1,），,显色剂为,10%,氢氧化钾甲醇溶液，紫外光灯,365nm,下检视。,4,其他类型,成分分析,香豆素类,含量测定,分光光度法,荧光光度法,薄层色谱法,高效液相色谱法,气相色谱法,4,其他类型,成分分析,乌蛇止痒丸中蛇床子素的含量测定,色谱条件,固定相：,OV-1,，,2m3mmID,玻璃柱；气体流速：,N,2,30ml/min,，,H,2,50ml/min,，,Air 500ml/min,；,柱温：,200,；进样器和检测器温度：,260,。,供试品溶液和对照品溶液的制备,精密称取内标物正廿三烷适量，加氯仿溶解，制成每,1ml,约含,6mg,的溶液，作为内标溶液。取乌蛇止痒丸适量，研成细粉，精密称取约,5g,，,置索氏提取器中，精密加入内标溶液,5.0ml,，,加氯仿,80ml,，,回流至近无色。将提取液浓缩至数毫升，通过,3g,小型硅胶柱，用氯仿洗脱至,10ml,量瓶中，加氯仿至刻度，摇匀，作为供试品溶液。称取蛇床子素约,25mg,，,加入内标溶液,5.0ml,，,振摇使溶解，摇匀，作为对照品溶液。,校正因子的测定,精密吸取对照品溶液，连续进样,3,5,次，每次,2l,，,按峰面积计算校正因子。,样品测定,精密吸取供试品溶液，连续进样,3,5,次，每次,2l,，,用校正因子计算样品含量。,4其他类型,成分分析,有机酸,概述,理化性质,物理性状,（存在的形态，溶解性，挥发性）,提取分离,有机溶剂提取法,离子交换法,水蒸气蒸馏法,4,其他类型,成分分析,有机酸,定性鉴别,吸附色谱,分配色谱,含量测定,酸碱滴定法总有机酸,分光光度法,高效液相色谱法,薄层色谱法,其他方法,4,其他类型,成分分析,环烯醚萜类,概述,特殊的单萜,理化性质,物理性状,（存在的形态，多苦味，稳定性）,溶解性：,易溶于水、甲醇，可溶于乙醇、丙酮、正丁醇,薄层定性鉴别,吸附剂：,硅胶、聚酰胺,显色剂：,硫酸乙醇，茴香醛试液，香草醛硫酸试液，对二甲氨基苯甲醛硫酸试液,龙胆苦甙,4,其他类型,成分分析,环烯醚萜类,含量测定,高效液相色谱法,薄层扫描法,荧光分光光度法,分光光度法,复方栀子冲剂中栀子甙的含量测定,精密称取本品,3g,，,置索氏提取器内，加甲醇回流提取,6,小时，,回收甲醇至干，加水,10ml,溶解，用水饱和正丁醇提取，提取,液蒸干，以甲醇溶解，通过已处理好的活性炭,-,中性氧化铝柱，,用甲醇,100ml,洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用,2ml,甲醇溶,解，作为供试品溶液。,薄层条件：硅胶,GF,254,薄层板，展开剂氯仿,甲醇,25%,氨,水（,4:1:0.1,），检测波长,247nm,，,参比波长,370nm,。,4,其他类型,成分分析,单萜及二萜类,含芍药甙中药制剂的分析,薄层色谱,高效液相色谱,含穿心莲内酯中药制剂的分析,薄层色谱,回滴法,比色法,总内酯,薄层扫描或高效液相色谱法,单体成分,穿心莲内酯,4,其他类型,成分分析,多糖（,polysaccharides,）,概述,理化性质,物理性状,（存在形式，还原性）,溶解性：,溶于水，低浓度的酸碱，盐溶液，不溶于醇、醚、丙酮,提取分离,水提醇沉,防止水解，注意消除酶、酸、碱等的影响,4,其他类型,成分分析,多糖（,polysaccharides,）,提取分离,金属盐沉淀法,季胺氢氧化物沉淀,柱色谱法,（,活性炭,+,等量的硅藻土）,凝胶色谱法（葡聚糖凝胶,sephadex,，,琼脂糖凝胶,sepharose,，,聚丙烯酰胺凝胶,Bio-gel P,）,制备型区域电泳,4,其他类型,成分分析,多糖,（,polysaccharides,）,定性鉴别,薄层色谱（硅胶、纤维素、硅藻土）,纸色谱,展开剂：正丁醇、水混合体系,显色剂：苯胺,-,邻苯二甲酸的正丁醇饱和水溶液等,电泳法,滤纸电泳、玻璃纤维纸电泳、醋酸纤维薄膜电泳、凝胶电泳,高效液相色谱法,气质联用,酸水解中和柱前衍生,GC-MS,4,其他类型,成分分析,多糖,（,polysaccharides,）,含量测定,总多糖的测定,3,5-,二硝基水杨酸比色法棕红色（,550nm,）,半微量定量法,苯酚,-,硫酸法蓝绿色（,480-490nm,）,蒽酮,-,硫酸法黄绿色,620nm),单体多糖的含量测定,高效凝胶液相色谱法确定分子量,高效液相色谱法确定组成,色谱柱：氨基键合相硅胶柱，或普通硅胶柱,检测器：示差折光检测器,4,其他类型,成分分析,多糖,灵芝多糖的,测定,含量测定,对照品溶液的制备,精密称取,105,干燥至恒重的葡萄糖对照品适量,标准曲线的制备,(,硫酸蒽酮法，,=625nm,),供试品溶液的制备,取本品粉末约,2g,，,精密称定，置索氏提取器中，加水,90ml,，,电加热器加热回流提取至提取液无色，提取液转移至,100ml,量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取,10ml,，,加入乙醇,150ml,，,摇匀，,4,放置,12,小时，取出，离心，,倾去上清液，沉淀加水溶解并转移至,50ml,量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。,测定法（略）,本品按干燥品计算，含灵芝多糖以无水葡萄糖,(C,6,H,12,O,6,),计，不得少于,0.50%,