1、
2025年大学（理学）生物化学实验试题及答案
（考试时间：90分钟 满分100分）
班级______ 姓名______
第I卷（选择题 共40分）
（总共8题，每题5分，每题只有一个正确答案，请将正确答案填在括号内）
w1. 下列关于蛋白质定量测定方法的描述，错误的是（ ）
A. 双缩脲法可用于测定蛋白质浓度，但灵敏度较低
B. 考马斯亮蓝法是一种常用的蛋白质定量方法，灵敏度高
C. 紫外吸收法只能测定蛋白质的含量，不能区分不同蛋白质
D. 凯氏定氮法通过测定氮含量来计算蛋白质含量，操作简单
w2. 在核酸提取实验中，常用的蛋白酶K的作用是（
2、 ）
A. 降解蛋白质，释放核酸
B. 促进核酸的溶解
C. 保护核酸不被降解
D. 沉淀核酸
w3. 以下哪种方法可用于测定酶的活性（ ）
A. 分光光度法
B. 荧光定量法
C. 离子交换色谱法
D. 亲和色谱法
w4. 在蛋白质电泳实验中，SDS-PAGE的作用是（ ）
A. 分离蛋白质的亚基
B. 测定蛋白质的分子量
C. 分析蛋白质的纯度
D. 以上都是
w5. 下列关于DNA变性的描述，正确的是（ ）
A. DNA变性是指DNA双链解开形成单链的过程
B. 变性后的DNA在260nm处的吸光度会降低
C. DNA变性是不可逆的
3、
D. 高温、强酸、强碱等条件不会导致DNA变性
w6. 用于蛋白质分离的离子交换色谱，其固定相是（ ）
A. 带电荷的树脂
B. 硅胶
C. 葡聚糖凝胶
D. 纤维素
w7. 在酶促反应动力学实验中，米氏常数Km的意义是（ ）
A. 酶促反应的最大速度
B. 酶与底物亲和力的指标
C. 底物浓度达到一半时的反应速度
D. 反应速度为最大速度一半时的底物浓度
w8. 以下哪种物质可作为核酸电泳的指示剂（ ）
A. 考马斯亮蓝
B. 溴酚蓝
C. 酚红
D. 甲基橙
第II卷（非选择题 共60分）
w9. （10分）简述蛋白质提取和分
4、离的主要步骤及常用方法。
w10. （10分）在核酸提取过程中，如何保证核酸的质量？
w11. （15分）材料：某实验室研究一种新发现的酶，进行了一系列实验。在不同底物浓度下测定酶促反应速度，得到如下数据：底物浓度（mmol/L）：1、2、4、8、16；反应速度（μmol/min）：10、18、25、30、32。请计算该酶的米氏常数Km，并分析底物浓度与反应速度的关系。
w12. （15分）材料：现有两种蛋白质A和B，其分子量分别约为50kD和30kD。请设计一个实验方案，利用SDS-PAGE将这两种蛋白质分离并鉴定。
w13. （20分）材料：某研究小组对一种生物样品
5、中的核酸进行分析。提取核酸后，采用琼脂糖凝胶电泳进行检测，结果发现核酸条带模糊且弥散。请分析可能导致这种结果的原因，并提出改进措施。
答案：
w1. D
w2. A
w3. A
w4. D
w5. A
w6. A
w7. D
w8. B
w9. 蛋白质提取和分离主要步骤及常用方法：首先选材，根据实验目的选择合适组织或细胞。然后破碎细胞，常用机械法、物理法、化学法等。接着提取蛋白质，可采用盐析、透析等初步分离。进一步分离可选用离子交换色谱、凝胶过滤色谱、亲和色谱等。最后通过SDS-PAGE等方法鉴定蛋白质纯度和分子量等。
w10. 保证核酸质量可采取以下措施：使用新鲜材
6、料，避免核酸降解。提取过程中严格控制温度、pH等条件。加入核酸酶抑制剂防止核酸酶污染。采用合适的提取方法，如酚氯仿抽提等。提取后及时进行纯化，如乙醇沉淀等。最后保存于合适条件，防止氧化等。
w11. 根据米氏方程v = Vmax[S]/(Km + [S])，通过双倒数法（1/v = Km/Vmax×1/[S] + 1/Vmax）计算。将数据转化为1/v和1/[S]后，绘制直线，斜率为Km/Vmax，截距为1/Vmax，从而计算出Km。底物浓度较低时，反应速度随底物浓度增加而快速上升；当底物浓度较高时，反应速度趋于稳定，接近最大反应速度Vmax。
w12. 实验方案：制备SDS-PAGE凝胶。将蛋白质A和B样品分别与上样缓冲液混合，加热变性。上样，进行电泳。电泳结束后，用考马斯亮蓝染色或银染等方法显色。观察凝胶上的条带，根据分子量大小判断A和B的位置，从而实现分离和鉴定。
w13. 可能原因：核酸提取过程中操作不当，如过度振荡、离心速度过高导致核酸断裂。提取试剂不纯，含有杂质影响核酸电泳效果。核酸浓度过高，形成沉淀导致条带弥散。改进措施：优化提取操作，轻柔处理样品。更换高质量试剂。适当稀释核酸样品后再进行电泳。
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