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2025年大学生物技术（生物技术技巧）试题及答案

（考试时间：90分钟 满分100分）
班级______ 姓名______

第I卷（选择题 共40分）
答题要求：本卷共20小题，每小题2分，共40分。在每小题给出的四个选项中，只有一项是符合题目要求的。
1. 以下哪种生物技术可用于大量生产特定的蛋白质药物？
A. 基因编辑技术
B. 细胞融合技术
C. 蛋白质工程技术
D. 发酵工程技术
2. 用于分离和纯化蛋白质的常用方法是？
A. 凝胶过滤层析
B. 聚合酶链式反应
C. 限制性内切酶切割
D. 荧光定量PCR
3. 下列关于基因克隆的说法，正确的是？
A. 只能克隆原核生物基因
B. 克隆的基因一定能表达
C. 需利用载体将目的基因导入受体细胞
D. 基因克隆与PCR无关
4. 哪种生物技术可用于检测基因的表达水平？
A. Western blot
B. 基因芯片技术
C. 蛋白质测序技术
D. 以上都是
5. 植物组织培养过程中，诱导愈伤组织形成的关键激素是？
A. 生长素
B. 细胞分裂素
C. 赤霉素
D. 脱落酸
6. 动物细胞培养时，通常需要添加的成分不包括？
A. 血清
B. 抗生素
C. 葡萄糖
D. 纤维素酶
7. 以下哪种生物技术可用于改造生物的遗传性状？
A 基因工程
B. 细胞工程
C. 酶工程
D. 以上都是
8. 蛋白质的一级结构是指？
A. 氨基酸的种类和排列顺序
B. 多肽链的折叠方式
C. 蛋白质的空间构象
D. 亚基的组成
9. 基因工程中常用的工具酶不包括？
A. 限制性内切酶
B. DNA连接酶
C. 逆转录酶
D. 淀粉酶
10. 用于鉴定蛋白质纯度的方法是？
A. SDS-PAGE
B. 双向电泳
C. 等电聚焦电泳
D. 以上都是
11. 下列关于细胞融合技术的说法，错误的是？
A. 可用于制备单克隆抗体
B. 能克服远缘杂交不亲和的障碍
C. 融合后的细胞一定能正常生长
D 常用聚乙二醇等诱导细胞融合
12. 酶工程中，固定化酶的优点不包括？
A. 可重复使用
B. 稳定性提高
C. 酶活性增强
D. 便于连续化生产
13. 以下哪种生物技术可用于快速繁殖优良植物品种？
A. 植物体细胞杂交
B. 植物组织培养
C. 基因枪法转化
D. 农杆菌介导转化
14. 蛋白质的二级结构主要包括？
A. α-螺旋和β-折叠
B. 无规卷曲
C. 结构域
D. 以上都是
15. 基因工程载体应具备的条件不包括？
A. 有多个限制酶切割位点
B. 有筛选标记基因
C. 能在宿主细胞中自主复制
D. 能编码目的蛋白
16. 用于蛋白质定量分析的方法是？
A. 考马斯亮蓝染色法
B. 银染法
C. Bradford法
D. 以上都是
17. 下列关于发酵工程的说法，正确的是？
A. 只能生产微生物细胞
B. 发酵过程中不需要控制条件
C. 可用于生产抗生素等药物
D. 与基因工程无关
18. 植物基因工程中常用的受体细胞不包括？
A. 叶肉细胞
B. 根细胞
C. 花粉细胞
D. 动物细胞
19. 蛋白质的三级结构是指？
A. 多肽链的折叠方式
B. 亚基的组成和空间排列
C. 蛋白质的整体空间构象
D. 氨基酸的种类和排列顺序
20. 基因工程中，筛选含有重组DNA分子的受体细胞常用的方法是？
A. 抗性筛选
B. 蓝白筛选
C. 核酸杂交
D. 以上都是

第II卷（非选择题 共60分）
21. （10分）简述基因工程的基本操作步骤。
22. （10分）请说明蛋白质工程的基本原理和主要应用。
23. （10分）在植物组织培养中，如何进行培养基的配制和灭菌？
24. （15分）阅读材料：某科研团队欲利用生物技术生产一种新型的生物活性蛋白。他们首先从天然生物中获取了该蛋白的基因序列，然后通过基因工程技术将其导入合适的表达载体，再将重组载体导入大肠杆菌细胞中进行表达。但在表达过程中遇到了一些问题，表达量较低且产物活性不稳定。请分析可能的原因，并提出改进措施。
25. （15分）阅读材料：细胞融合技术在单克隆抗体的制备中发挥了重要作用。在制备抗某病毒单克隆抗体时，首先将免疫小鼠的脾脏细胞与骨髓瘤细胞进行融合，然后通过特定的筛选方法获得能产生所需抗体的杂交瘤细胞，并对其进行克隆化培养和抗体的纯化。请详细描述细胞融合的方法、筛选杂交瘤细胞的原理以及抗体纯化的常用方法。

答案：1. D 2. A 3. C 4. D 5. B 6. D 7. D 8. A 9. D 10. D 11. C 12. C 13. B 14. D 15. D 16. D 17. C 18. D 19. C 20. D 21. 基因工程基本操作步骤：获取目的基因，可从生物基因组文库、cDNA文库等获取，也可用PCR技术扩增；构建基因表达载体，将目的基因与载体连接；将重组载体导入受体细胞，如导入大肠杆菌、动植物细胞等；目的基因的检测与鉴定，通过核酸杂交、PCR筛选、蛋白质检测等方法确定目的基因是否成功导入及表达。 22. 蛋白质工程基本原理：以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造，或制造一种新的蛋白质。主要应用：提高蛋白质的活性、稳定性，改善蛋白质的功能，用于生产新型药物、工业酶等。 23. 培养基配制：根据培养植物的种类和阶段，选择合适的基本培养基配方，添加各种营养成分如大量元素、微量元素、维生素、植物激素等，调节pH值。灭菌：采用高压蒸汽灭菌法，在121℃、1.05kg/cm²压力下灭菌15 - 30分钟，以杀死培养基中的微生物和芽孢。 24. 可能原因：密码子偏好性问题，大肠杆菌对某些密码子使用频率低，影响基因表达；表达载体构建不合理导致转录或翻译效率低；培养条件不合适，如温度、pH、营养成分等；蛋白产物可能形成包涵体影响活性稳定性。改进措施：优化密码子，根据大肠杆菌密码子偏好性改造基因序列；调整表达载体，更换强启动子增强转录；优化培养条件，摸索最适温度、pH、添加诱导剂等；尝试不同表达策略，如分泌表达避免包涵体形成。 25. 细胞融合方法：聚乙二醇（PEG）介导法，将两种细胞混合，加入PEG促使细胞融合；电融合法，利用电场诱导细胞融合。筛选杂交瘤细胞原理：利用次黄嘌呤-氨基蝶呤-胸腺嘧啶核苷（HAT）培养基，骨髓瘤细胞缺乏次黄嘌呤磷酸核糖转移酶（HGPRT），正常细胞可利用次黄嘌呤合成DNA，融合后的杂交瘤细胞因含有HGPRT可在HAT培养基中生长，未融合细胞死亡，以此筛选。抗体纯化常用方法：亲和层析法，利用抗原与抗体特异性结合，将抗原偶联到层析介质上，分离抗体；离子交换层析法，根据抗体电荷性质分离；凝胶过滤层析法，依据分子大小分离。