促红生长素.ppt

Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,促红生成素,1,目录,1、促红生成素的简介,2、促红生成素的作用原理,3、EPO 的应用,4、用量用法,5、不良反应及禁忌,6、临床意义,7、重组,EPO,8、重组,EPO,的生物学活性检测,9、检验方法,10、,EPO,的血清检测,11、市场前景,2,促红生成素的简介,英文名称：erythropoietinin;,：在哺乳动物肾脏和肝脏产生的一种分子质量为46kDa的糖蛋白细胞因子,。能刺激幼稚红细胞的增生，血红蛋白化和红细胞的成熟。,：由肾脏分泌的调节,红系祖细胞,生长的细胞因子。,定义,1,定义,2,3,人体内约90%,的促红细胞生成素由肾脏产生,对红细胞的正常分裂、发育和成熟。起着关键性的调控作用.,4,促红生成素的作用原理,EPO,是促红细胞生成素的英文简称。人体中的促红细胞生成素是由肾脏和肝脏分泌的一种激素样物质，能够促进红细胞生成。,服用红细胞生成素可以使患肾病贫血的病人增加血流比溶度（即增加血液中红细胞百分比）。人体缺氧时，此种激素生成增加，并导致红细胞增生。,5,EPO,的应用,EPO兴奋剂是根据促红细胞生成素的原理人工合成，它能促进肌肉中氧气运输，从而使肌肉更有劲、工作时间更长.,6,在2008年北京奥运会中第一例的兴奋剂检查呈阳性的西班牙自行车选手,玛丽亚莫里诺,，就是被发现使用使用,促红细胞生成素(EPO),，国际奥委会于2008年8月11日宣布取消其参赛资格。,应用案例,7,EPO,作为兴奋剂的使用,8,其它应用,：,促进新血管的形成和减少心肌 梗塞面积，控制细胞凋亡，进而保护以及组织免受缺氧、毒素及氧化应激系统诱导损伤。,：抑制细胞表面炎症因子，降低正常细胞对炎症效应。,:作用于小肠内膜表面,EPO,受体，促粘膜增生发育，继而小肠对脂类 及氨基酸类物质吸收功能。,1、对心脏的作用,2、抑制炎症,3、抑制炎症,9,用量用法,静脉注射,开始应用较低剂量50100IU/kg，每周3次，如果在4周内，网状红细胞计数、血细胞比容和血红蛋白水平未见明显增加，本品的剂量可递增,10,不良反应及禁忌,常见有血压升高、心悸。偶见瘙痒感、皮疹,及,GOT,或,GPT,值升高、恶心、呕吐、眩晕、头痛、发热、血钾升高等。血液透析不能控制动脉血压升高的患者、铅中毒及感染患者禁用，有药物过敏者、变态反应体质者慎用。应及时对用本品治疗者的血压进行监测，必要时给抗高血压药物。应注意血管栓塞情况，有时需增加肝素的剂量。必要时补铁，使患者的转铁蛋白饱和度维持在,20%,以上,谷丙转氨酶,天,冬,氨,酸,转,氨,酶,11,1肾性贫血患者EPO水平较低，在进行治疗过程中，往往通过注射EPO来提高体内EPO水平进行治疗，从而帮助病人增加红细胞数量，此时EPO水平有所上升。,2其他贫血如缺铁性贫血、巨细胞性贫血患者EPO水平不降低，但也可以使用EPO治疗，此时浓度也会有所升高,3.生障碍性贫血和骨髓造血功能不全患者EPO水平升高。,临床意义,12,重组,EPO,天然的,hEPO,制品一般是从贫血病患者尿中提取的，所以药源极为匮乏，不能满足需要。因此，在,20,世纪,80,年代就开始,rhEPO,的研究，从胎儿肝中克隆出 人促红细胞生成素基因,并研制成功 重组人,EPO,。,目前国内外在获取,EPO,基因后，首选中国仓鼠卵巢,(CHO),细胞表达系统来表达生产重组人,EPO,。,13,重组人促红素注射液（,CHO,细胞）,【,商品名,】,益比奥,【,规格,】1,万国级单位,/,瓶,【,生产厂家,】,沈阳三生制药,【,成分,】,重组人促红素。辅料：人血白蛋白、氯化钠、一水枸橼酸、二水枸橼酸三钠,14,构建基因组噬菌体文库克隆,EPO,基因,血细胞,中提取基,因组,DNA,筛选完整,EPO,基因的插,入片段,转入,CHO,中表达。,PCR,方法,从基因组模板,中扩增,EPO,基,因片段为探针,B,amH,酶切,回收酶切片段,构,建基因组,噬菌体文库,插入噬菌体,EMBL3,载体,克隆,15,重组,EPO,的生物学活性检测,正常功能状况下，,EPO,的主要生物学性状是增加红细胞的产生，因此,红细胞数目的增多，血红蛋白含量的增加及红细胞压积的改变,，,此三项指标可以用于反映,EPO,的体内生物学活性，这也是比较特异性的检测指标。,16,检验方法,可由,SD,大鼠来完成。其大致做法为：一周两次，连续,3,周对实验动物皮下注射,rHuEPO,；,实验对照组则同等剂量的生理盐水，在实验结束时，检测实验组与对照组红细胞计数、血红蛋白含量及血球压积，以确定,rHuEPO,的体内生物学活性。,17,检验结果记录,组别,实验组,对照组,注射方式检验类别,皮下注射,rHuEPO,同等剂量的生理盐水,红细胞计数,血红蛋白含量,血球压积,18,EPO,的血清检测,采用酶免检测试剂盒检测。,19,检测原理,采用双抗体夹心法检测,EPO,。,两种不同的抗体，分别包被微孔板和标记,HRP,酶。当 标本中含有相应的抗原时，会形成抗体,-,抗原,-,抗体,-,酶的复合物。未结合的物质通过洗涤去除。加入显色底物显 色，通过测量颜色的变化来判断标本中抗原的浓度。,20,酶联反应,21,检验步骤,1,准备,(1).,测试前将试剂盒组分置于室温,(18-25),平衡,30,分钟，测试后应立即放回,2-8,保存。,(2).,如果,EPO,浓度高于,160mU/ml,，,稀释后检测。,22,2、,反应,(1).,取出所需要的板条。,(2).,分别向孔中加入,50l,标准品、质控血清或标本。,(3).,每孔中加入,50l,酶结合物。震动,10-20,秒混匀。,(4).37,孵育,30,分钟。,(5).,扣除孔中液体，并用洗液洗涤,5,次。,(6).,在干净的纸巾或毛巾上拍干，尽量去除残留的水分。,23,3、显色,(1).,每孔各加入,1,滴显色底物,A,和,B,，,置于室温,(18-25),避光显色,15,分钟。,(2).,每孔加入,1,滴终止液，轻轻震动几次混匀。,(3).,在,30,分钟内，以,630nm,作为参考波长，测量,450nm,处的吸光度,(A450),。,24,4，计算,（,1).,以标准品的吸光度为,Y,轴，浓度为,X,轴作图。,（,2).,根据质控血清和标本的吸光度值，从标准曲线上反算,EPO,的浓度。,（,3).,如果样品经过稀释，在计算其浓度时应乘以相应的稀释倍数。,25,曲线图,26,1989年安进公司的第一个基因重组药物Epogen获得FDA的批准，1999年销售值达到17.6亿美元，2000年19.6亿美元，2002年22.6亿美元，2003年24.4亿美元，成为名副其实的“重磅炸弹”基因药物2001年，EPO（包括Arnesp）的全球销售额达21.1亿美元，2002年达26.8亿美元，2003年全世界EPO的年销售额超过50亿美元。创下生物工程药品单个品种之最，是当今最成功的基因工程药物,。,市,场,前,景,27,谢谢,观赏！,Make Presentation much more fun,WPS官方微博,kingsoftwps,28,