常见临床标本细菌学检验简述.ppt

单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,常见临床标本的细菌学检验,一、常见临床标本,1,、血液,2,、尿液,3,、粪便、肛拭子,4,、脓汁及脓拭子,5,、穿刺液（胸水、腹水、心包液、关节液、脑脊液、鞘膜液）,6,、痰,7,、胆汁,8,、咽拭子,9,、空气,1,二、标本采集的一般原则,1,、应在病程的一定阶段（一般为发病早期）尽可能在施实抗生素疗法、化学方法、血清学疗法之前采集标本。,2,、方法要恰当,标本应来自真正的感染部位，避免其它微生物特别是正常微生物的污染。,3,、所有采集的标本均应置于无菌容器中（灭菌不能使用消毒剂）加入适当保存液 。,4,、标本应尽快接种（最好是床边接种），若必须传送时，应根据培养目的作保温、冷藏、厌氧运送。防止污染及扩散。,5,、检样不宜过少，否则易干燥死亡。,2,三、常见标本的采集（一般由临床医师执行）,（一）血液：,1,、一般在发热高峰期采集（发热初期,1-2,天，此时阳性率较高）尽量在实施血清疗法、化学疗法和抗生素疗法之前进行。,2,、采血部位：一般为静脉（动脉阳性率更高些）。,3,、采血量：,5-1ml,，直接加入酚红葡萄糖肉汤中（血,/,肉汤,=1,：,10,）（防止血凝、稀释,Ab,等因子）如不能直接接种应置入已灭菌适量,20%,枸橼酸盐瓶中。尽快送检。,3,4,、如病人已实施治疗，应在酚红葡萄糖肉汤中加入相应对抗剂。,磺胺类药物对氨基苯甲酸,5mg/100ml.,青霉素,2u,青霉素酶,/ml,其他抗生素,MgSO,4,5mg/100ml,（二）粪便：,1,、应尽量在用药前自然排便；取有胧血、粘液部分,2-3 g,（新鲜）液壮便应取絮壮物,1-2ml,于无菌广口瓶中。,4,2,、如无法获取粪便，应用直肠拭子，小儿入肛门,2-3cm,。成人入肛门,4-5cm.,取直肠粘液入无菌试管,/,保存液。,3,、如需保送运送测量,PH7.0,甘油,PSB,中（,0.033mol/L PSB,与等体积甘油混匀。,PH7.0),5,(,三）、脓汁,1,、创伤：先以无菌,NS,清洗创口周围，再以棉签来取脓汁,/,分泌物脓拭子置无菌试管。,2,、脓肿：先消毒患部表面皮肤，再以注射器抽吸,/,切开脓时接留脓汁,1-2ml,置无菌试管。,3,、厌氧菌：一定要由伤口深处取样，半小时内接种完毕。,6,（四）咽拭子：,1,、由咽部扁桃体处采集分泌物（注意部位、方式）,2,、如凝为白喉患者，则应先除去咽不表层分泌物去深层组织分泌物，再取样。,3,、凝为百日咳患者，可采用咳碟法。,7,（五）痰：,1,、先让病人用清水嗉口数次，以除去口腔内大量杂菌。,2,、取清晨第一口咳出的痰，（晨痰）,3,、作结核杆菌培养可收集,24h,痰。（冰箱保存）,8,（六）胆汁：,1,、行十二指肠引流水收集“胆汁乙”,10-15ml,。,胆汁甲,胆总管（）,胆汁乙,胆素（柠黄色）,胆汁丙,肝胆管（金黄色）,胆汁丁,十二指肠（）,9,（七）穿刺液：,1,：原则上由临床医生先穿刺获得。,2,：采样量：胸水，腹水：,5-10ml,3,：如需抗凝：,3.8%,枸橼酸钠。,1,：,10,10,（八）尿液：,1,、一般用导尿,.5-10ml,，也可用中段尿,.,（应消注明），留中段尿应冲洗尿道口,/,外阴部（,1,：,1000,高锰酸钾，,2%,红汞,.1,：,1000,新洁尔灭，先消毒液冲洗，再无菌纱布或干棉球拭干）。,2,、作结核杆菌培养，留取,24h,尿，将沉淀部分送检。,11,3,、肾盂尿，应标明右、左，每侧分,3,份留联（导尿管插入输尿管。）,4,、通常宜取清晨第一次尿。,5,、采集后应立即送检，接种，一般不得超过,1h,，冰箱保存，不过,6h,。,12,四、常见临床标本鉴定程序,染色镜检,变浊、色、质,BA,菌落 染色镜检,1,血液酚红葡萄糖肉汤,有菌落,无改变,BA,报告：无菌生长 无菌落,无菌落,BA,有菌落染色镜检,变浊、色、质,BA,菌落染色镜检,2,穿刺液,血肉汤 有菌落,无改变,BA,报告：无菌生长 无菌落,染色,13,3,，拭子（咽、脓）,BA,菌落分类、编号、染色镜检,染色镜检,注：接种血平板时，拭子作原划线、接种环划开,14,4,、痰,BA,菌落分类、编号、染色,TB,培养,罗氏斜面先消化处理）,4%NaOH 6%H,2,SO,4,15,5,、尿液,BA,（直径,=9.0cm,，接种量,0.01ml,）,注：将标本充分划开,集菌（,3000n/min 15,）,沉渣,革兰氏染色,BA,无菌落,报告：无菌生长,有菌落,染色镜检,菌落计数,16,报告：检出*菌 *个,/ml,10,万,/ml,感染,6,、粪便,（含肛拭子）,SS,、,MaC,（强弱各,1,个）,无可疑菌落 报告：无致病菌生长,可疑菌落（透明,/,半、无酸色）,增菌（一般不进行）,17,T.T,增菌液（四硫磺酸盐肉汤）,M.M,增菌液,(MgCL2,孔雀绿肉汤,),S.F,增菌液（亚硫酸盐肉汤）,沙门氏菌,煌绿增菌液,亚硒酸盐增液,沙,志,G.N,志贺氏菌,碱性蛋白胨水,霍乱弧菌,18,革兰氏染色,球菌,G+,杆菌,:,根据菌落特征,细菌染色性,形态排列选择恰当生化反应,免疫学反应及动物试验,报告,G-,杆菌,KIA,菌落描述,:,颜色,大小,溶血性,透明度,硬度,润湿度,表面光滑度,粘稠度,凸起度,边缘整齐度,19,根据,KIA,结果选择适当生化反应项目,+/+,I M Vi C,七叶,+,-/+,I MAN SUC C U PA,_ _ _ _,I,项“,+”,非沙门氏菌,+,I,项“,+”,非志贺氏菌,+,变,+,普,20,-/-I,葡,C,不动杆菌,绿脓杆菌,+/-,一般不会出现，可考虑接种不当，空,气污染,根据生化反应结果，结合相应血清学实验 报告结果,21,五、空气细菌计数,将直径,9.0cm/,普通琼脂平板,/,血琼脂平板按五点法,/,三点法打开盖暴露,20,，盖好,37 24h,计数菌落数，称出平均每个板菌落数,N,22,奥梅梁斯基法则：,100cm,2,510L,A t *10L,At,100*50,XX,个,/M,3,=*1000=39.32N,N,*10,At,100*5,50000N,At,（,49.0,；,20,）,结果报告应注明“普通琼脂平板培养”,/“,血琼,脂平板培养”,23,肠杆菌科各属,KIA,结果,斜面 底层 产气,H,2,S,动力,埃希氏菌属,A/K A +/-,（,+,）,/-,志贺氏菌属,K A -,沙门氏菌属,K A +/-d/+,枸橼酸盐菌属,d A +d +,克雷伯氏菌属,A A +-,肠杆菌属,A A +-+,欧文氏菌属,K/A A -/+/-+/-,沙雷氏菌属,K/A A +/-/d,哈夫尼亚菌属,K/A A +-+/-,爱得华氏菌属,K A +/d +/-+,24,斜面 低层 产气,H,2,S,动力,变形杆菌属,K A +/-+,普罗菲登斯菌属,K A +/-+,摩根氏菌属,K A,（,+,）,-+,耶尔森氏菌属,K/d A d/-,肥杆菌属,K A -,致病性杆菌属,K A -+,克沃尔氏菌属,A A +-+/,（,拉思氏菌属,A A,（,+,）,-,西地西菌属,K/d A,（,+,）,/,+,-,塔特母氏菌属,-A -,注：,A,产酸；,K,产碱；,+90-100%,菌株阳性；（,+,）,76-89%,菌株阳性；,d 26-75%,菌株阳性；,-0-10%,菌株菌阳性,25,七、肠杆菌微量快速鉴定,一、机理：不同种细菌有不同酶系。首 先获得待测菌的纯培养物，制成悬液，将其示为酶 予成酶,酶,+,低物,+,显色剂（或其他添加剂）观察现象,26,二、装置：反应板,16,孔内含,16,和底物等径真空，,低温干燥，密封保存备用。,2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16,H,2,S N PD I LD OD M U VP E ONPG SKA AR AD 1N SO,序号 实验名称 英文缩写 阴性 阳性,1 H,2,S H,2,S,无色 棕色、黑色,2,硝酸盐还原,N,淡黄,/,白色 粉红,3,苯丙胺酸,P,白色 绿色,4,吲哚,I,白色 粉红,27,序号 实验名称 英文缩写 阴性 阳性,5,赖胺酸,LD,黄色 紫兰色,6,乌胺酸,OD,黄色 桔色,7,丙二酸盐,M,黄缘色 湖兰色,8,尿素,U,黄色 粉红,9 VP VP,白色 粉红,10,七叶苷,E,白色 棕黑色,11 ONPG ONPG,白色 黄色,12,蔗糖,S,紫色 黄色,13,阿拉伯糖,A,紫色 黄色,14,侧金盏花醇,AD,紫色 黄色,15,肌醇,1N,紫色 黄色,1 6,山梨醇,SO,紫色 黄色,28,1 2 3 4 5 6 7 8,H,2,S N PD I LD OD M U,2 1 4 2 1 4 2,-+-+-+,0 5 2,9 10 11 12 13 14 15 16,VP E ONPG SAK AR AD 1N SO,4 2 1 4 2 1 4,-+-,1 0 0,29,细菌编码,052100,查编码鉴定手册得摩根氏变形杆菌,操作步骤：取,3-4,个同细菌菌落用,4mlNS,制成悬液，每孔加,0.2ml,，加盖。,35 4h,观察结果（某些项目要加入相应试剂）。,30,