微生物革兰氏染色法和芽孢染色法.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,精品,*,实验二,革兰氏染色法和芽孢染色法,1,精品,革兰氏染色法,实验目的,学习并掌握革兰氏染色方法；了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。,实验原理,革兰氏染色法是细菌细胞的复合染色法，由丹麦病理学家Hans Christian Gram 于1884年创立。该法是细菌学中最重要的鉴别染色法。,2,精品,第一步：初染:,结晶紫使菌体着上蓝紫色；,第二步：媒染:,碘和结晶紫形成大分子复合物，能被细胞壁阻留在细胞内；,第三步：酒精脱色:,细胞壁成分和构造不同，出现不同的反应,G,+,菌：,细胞不能被酒精脱色，仍呈紫蓝色；,G,-,菌：,酒精将细胞脱色，细胞无色；,第四步:番红复染,，G,-,菌呈红色，G,+,菌呈紫蓝色。,革兰氏染色,原理,3,精品,实验器材,1）,菌种：,大肠杆菌和枯草芽孢杆菌,2）,染色剂：,结晶紫，番红,3）,器材：,显微镜、酒精灯、载玻片、接种环、双层瓶、擦镜纸等,革兰氏染色法,4,精品,实验步骤,混合涂片法涂片、干燥、固定 结晶紫初染1min，水洗 碘液媒染1min，水洗 用滤纸吸去残水后，将玻片倾斜，在白色背景下，用95%乙醇脱色，直至流出的乙醇无色时，立即水洗 番红复染2min，水洗 干燥后，镜检,注：乙醇脱色是革兰氏染色操作的关键环节，脱色不足，阴性菌被染成阳性菌；脱色过度，阳性菌被染成阴性菌,革兰氏染色法,5,精品,实验结果,阳性菌（蓝紫色）,阴性菌（红色）,6,精品,细菌芽孢染色法,实验目的,学习并掌握芽孢染色方法；初步了解芽孢杆菌的形态特征。,实验原理,芽孢：,某些细菌在一定的环境条件下，能在菌体内部形成一个圆形或卵圆形小体，是细菌的休眠形式。产生芽孢的都是革兰氏阳性菌。,7,精品,芽孢染色法原理,用弱碱性染料孔雀绿在,加热条件,下染色，使染料不仅进入菌体，也可进入芽孢内。进入菌体的染料经水洗后被脱色，而芽孢一经着色后难以被水洗脱，当用对比度大的复染剂染色后，芽孢仍保留初染剂的颜色，而菌体被染成复染剂的颜色，使芽孢和菌体易于区分。,8,精品,实验器材,1）,菌种：,枯草芽孢杆菌,2）,染色剂：,5%孔雀绿水溶液、0.5%番红水溶液,3）,器材：,显微镜、滴管、酒精灯、载玻片、接种环等,细菌芽孢染色法,9,精品,实验步骤,1）改良的Schaeffer-Fulton氏染色法,制备菌悬液 孔雀绿染液(2滴)水浴加热染色15-20 min 取1小滴，涂片，固定 水洗 番红染液复染2-3min，倾去染液，水洗 镜检,2）Schaeffer-Fulton氏染色法,涂片固定 孔雀绿染液在微火上加热染色5min 水洗 番红染液复染2min 水洗 镜检,细菌芽孢染色法,10,精品,实验结果,芽孢（绿色）,营养细胞（红色）,11,精品,12,精品,