辅助生殖PGD与PGS技术课件.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,-中信湘雅生殖与遗传专科医院-人类干细胞国家工程研究中心,*,植入前遗传学诊断及筛查技术临床应用,1,内容概要,植入前遗传学诊断与筛查的概念,PGD,检测流程,染色体易位携带者的,PGD,基于全染色体筛查的PGD(PGD-CCS),单基因病,PGD,背景介绍,适应征及技术进展,临床应用,植入前诊断,植入前遗传学诊断和筛查的概念,植入前遗传学诊断的临床应用,植入前遗传学筛查的临床应用,2,一、,植入前遗传学诊断与筛查的概念,PGD(Preimplantation Genetic Diagnosis),：又称为孕前诊断(,preconception genetic diagnosis,P,G,D,)。指在胚胎植入前，利用,DNA,分析技术对显微活检的胚胎细胞进行染色体异常或遗传性疾病进行诊断，选择正常的胚胎植入。,第一部分 植入前遗传学诊断和筛查的概念,3,第三代试管婴儿？,PGD/PGS,是以ICSI,-ET,为基础，结合显微操作技术和分子生物学研究的而发展起来的。,4,PGD,的意义,PGD,可在孕前阶段杜绝,X-,连锁隐性遗传病、染色体病和基因病患儿的妊娠，避免人工流产终止异常妊娠给广大妇女的身心痛苦。,理论上还可减少遗传病在人群中的遗传负荷。,PGD,是,遗传性病防治的重要手段，是,Edwards,获诺贝尔奖的理由之一。,植入前诊断,传统的产前诊断,5,PGD,发展历程,最早于,1965,由,Edwards,提出。,1968,年,Gardncr,和,Edwards,在显微操纵下对兔囊胚进行活检，取出少量滋养外胚层细胞,分析染色质来选择雌性胚胎,。,1990,年,Handyside,报道了世界第一例,植入前性别诊断婴儿,的出生，开创了产前诊断的新纪元。,1994,年，,Munne,用,FISH,技术，在植入前诊断,胚胎染色体非整倍体及性别,获得成功。,1999,年，,Terlin,等用巢式,PCR,和单链多态性分析技术，对单细胞进行,视网膜母细胞瘤的易感性分析,，在植入前确定胚胎未来发生肿瘤的可能性大小，从而为,PGD,应用于人类胚胎基因表达的研究开辟了崭新的途径。,2001,年,Verlinsky,有报道对,胚胎进行,HLA,选型,以便于骨髓移植。进一步拓宽了该技术的研究和应用。,6,染色体异常（罗氏易位、相互易位、倒位等）,染色体异常的筛查,单基因病（一般的单基因病、性连锁遗传病等）,单基因异常的筛查,PGD期望解决的问题,7,植入前遗传学筛查的概念,胚胎植入前遗传学筛查（,Preimplantation Genetic Screening,PGS,），是指胚胎植入着床之前，对早期胚胎进行染色体数目和结构异常的检测，通过一次性检测胚胎,23,对染色体的结构和数目，挑选正常的胚胎植入子宫，以期获得正常的妊娠，提高患者的临床妊娠率，降低多胎妊娠。,PGS,目前特指针对染色体数目异常，即非整倍体；,PGS,理论上将来可以应用于单基因病。,PGS,是低风险人群，夫妻双方的染色体或者基因是正常的。,8,二、,PGD,检测流程,卵子,精子,ICSI,活检取样,胚胎冷冻,遗传学检测,选择胚胎,胚胎植入,遗传咨询,知情谈话,FISH,CHIP,PCR,MPS,IVF,临床促排卵,9,极体活检,活检第一极体和第二极体，检测母源性的染色体结构异常或基因突变，以及减数分裂异常造成的染色体非整倍体。,优点：对卵母细胞的发育没有影响。,缺点：只能检测母源性的染色体异常；,不能检测受精后发生的染色体异常；,可检测细胞数少，易发生检测失败。,（一）活检技术选择,10,卵裂球活检,在,D3,胚胎发育到,6-10,细胞时活检出,1-2,个卵裂球，进行遗传学诊断。,优点：最成熟最常用的活检方法。,缺点：活检出卵裂球后降低了胚胎的发育潜能；,细胞数少，容易发生检测失败,(,细胞固定及,杂交失败，扩增失败，,ADO,等,),。,11,囊胚活检,D5-6,天胚胎发育到囊胚阶段后，活检囊胚滋养层细胞进行遗传学检测。,优点：对滋养层细胞的活检不影响将要发育成胎,儿的内细胞团的发育；,可检测细胞数较多，检测失败概率降低。,对,SNP-array,而言，能大大减低费用。,缺点：大部分情况下除非可以在,24,小时之内出结果）,需将活检后的囊胚冷冻保存。,12,染色体易位(Trans,loca,tion):,一种染色体结构异常，一条染色体的一段转移到同一条或另一条染色体上，导致易位片段基因的重排,(,Thompson&Thompson GENETICS IN MEDICINE 2010,),易位是一种常见的染色体结构重排异常，新生儿中发病率,0.2%,.,(,Stern et al.,19,99),临床上两种类型的易位最常见：罗氏易位和相互易位,一、染色体易位携带者的,FISH-PGD,第二部分 植入前遗传学诊断的临床应用,13,4q25,20q12,相互易位：,两条非同源染色体之间进行片段的交换，常常是整个末端的断裂并互换。,-Thompson&Thompson GENETICS IN MEDICINE 2010,着丝粒,着丝粒,Derivative chromosome 4,Derivative chromosome 20,14,罗氏易位,：,这种类型的易位是在两组端着丝粒染色体,(D,组,and G,组,染色体,13-15,21-22),间进行交换，往往在靠近着丝粒的区域断裂重组，导致易位的两条染色体随体的丢失,-Thompson&Thompson GENETICS IN MEDICINE 2010,Centromere,Centromere,Chr21,Chr14,der(14;21),15,易位携带者的健康风险,平衡的染色体易位个体往往没有明显的疾病表型，称为“易位携带者”。但却多存在生殖的障碍；,易位携带者主要的遗传风险起源于配子减数分裂的过程，携带者可产生高比例的不平衡配子（精子和卵），可以导致流产，出生染色体异常患儿引起出生缺陷（特别是智力障碍），并可导致不孕和不育；,16,平衡易位携带者的遗传风险,四射体,对于相互易位携带者，配子分离模式理论上产生,18,种配子类型：包括,1,种正常,1,种,平衡易位型,和,1,6,种,不平衡分离的配子。,17,normal,balanced,disomy 21,disomy 21,nullisomy 21,Nullisomy 14,罗氏易位产生,6,种配子类型，包括,1,中正常，,1,中平衡易位型，其余,4,种不平衡分离配子，这类不平衡配子往往导致流产。,罗氏易位的遗传风险,18,染色体易位和生殖健康,反复流产,：,3-4%,的反复流产患者存在染色体结构异常,相互易位占,61%,罗氏易位占,16%,-Clifford et al.1994,;,Franssen et al.2005,我院数据：共发现,1425,易位携带者，其中相互易位,76.6%(1094/1428),，罗氏易位,23.4%(334/1428).,反复流产,75.2%(1071/1425),严重男性因素,17.2%,(245/1425),卵巢功能下降,1.2%,(18/1425),19,PGD,用于易位携带者治疗的历史,产前诊断移植以来被有效的用来避免染色体异常患儿出现，但是诊断异常后流产给妇女带来心理和生理的负担，并可能导致生育障碍；,第一例,PGD,的成功妊娠，利用,Y,染色体特异性,DNA,扩增技术成功对人胚胎性别进行诊断并获得妊娠。,-,Handyside,AH.Nature,1990,1998,年，,FISH,技术被用于易位携带者的,PGD,诊断并获得成功,-Conn CM,et al,.,1998;,Munn S,et al.,1998;Pierce KE,et al,.,1998,20,荧光原位杂交FISH),荧光原位杂交技术,（Fluorescence in situ hybridization,FISH）,是以利用荧光标记的特定基因或染色体片段作为探针，与染色体特定序列DNA分子杂交，可以确定分裂细胞或间期细胞对应染色体序列的位置及数目，以此检测染色体数目或结构异常。,FISH技术有以下几个特点：安全、快速、灵敏度高；探针能较长时间保存；多色标记，简单直观；可用于中期染色体及间期细胞的分析,21,荧光原位杂交(FISH-PGD),技术流程,22,欧洲生殖与胚胎学协会(ESHRE)-FISH-PGD实践指南,23,ESHRE要求：,实验室胚胎活检技术；,遗传室细胞核玻片固定基础，并对固定程序有详细要求；,选择合适的探针，对平衡易位患者需提前做好外周血淋巴细胞中期分裂相预实验；,欧洲生殖与胚胎学协会(ESHRE)-FISH-PGD实践指南,24,细胞核玻片固定程序：,活检卵裂球(1枚或2枚)或囊胚滋养层细胞(TE)；,低渗液滴中处理5min；,在圆圈标记对应的玻片正面部位加固定剂(Tween-20/HC1)，将低渗好的细胞转至固定剂液滴中；,待固定剂完全干燥后，可放在-20备用，或者直接进入下一步；,60烤片，30min-3h；RNase消化，蜡膜封片，湿盒中37度孵育30min-1h；,将RNase处理后的玻片依次过2xSSC、75%、90%、100%酒精，梯度脱水；,将玻片放入变性液中，75预变性3-5min（目的是将DNA双链打开）；,玻片依次过75%、90%、100%酒精梯度脱水，2min/浓度，完全风干；,探针75变性5min；,将探针加到风干的玻片样本上，双层蜡膜封片，置于湿盒中，37过夜（杂交4-6h）；,玻片依次过洗涤液WS1三缸(45)，WS2两缸（室温），WS3一缸（室温）；,75%、90%、100%酒精梯度脱水，风干；,加入DAPI，处理3min后，直接荧光显微镜下观察。,欧洲生殖与胚胎学协会(ESHRE)-FISH-PGD实践指南,25,平衡易位探针选择和淋巴细胞预实验,探针的选择：商业探针的使用需通过QC质控；自制探针也需要进行合适的QC/QA鉴定。,所有探针在应用到临床检测前都需经过细胞杂交预实验，评估特异性、亮度及弥散度；,对于所有平衡易位携带者，需要取用对应易位区段合适的探针以及探针组合对夫妻双方淋巴细胞中期分裂相及间期核进行预实验检测：,至少分析20个中期分裂相，确保探针位置在正确的染色体上，易位片段能被正确指示；,至少分析100个间期核，评估特异性、亮度及弥散度。,欧洲生殖与胚胎学协会(ESHRE)-FISH-PGD实践指南,着丝粒探针,位点特异性探针,亚端粒探针,26,一例相互易位携带者PGD，核型为：46,XY,t(6;10)(q13;p15)，活检2枚胚胎，对单卵裂球进行FISH检测，发现1枚信号正常，移植1枚，妊娠单胎，产前诊断为正常核型，已出生正常婴儿。,FISH-PGD举例：平衡易位携带者,预实验结果：,外周血淋巴细胞培养制备的一个中期分裂相和一个间期核,FISH探针：,易位片段的亚端粒探针,（6q136qter，Tel 6q SpectrumOrange；10p1510pter，Tel 10p SpectrumGreen）和10号,着丝粒片段的着丝粒探针,（10p1510qter,blue CEP10 alpha satellite SpectrumAqua）。,27,一例相互易位携带者PGD，核型为：46,XY,t(6;10)(q13;p15)，活检2枚胚胎，对单卵裂球进行FISH检测，发现1枚信号正常，移植1枚，妊娠单胎，产前诊断为正常核型，已出生正常婴儿。,FISH-PGD举例：平衡易位携带者,FISH-PGD检测结果：,不同通道滤光片下观察到的细胞核中的FISH探针荧光信号。a胚胎细胞核中每个探针均为2个杂交信号提示每个探针位点均为2个拷贝，表示易位相关的染色体组成为正常或平衡易位。b胚胎核中均为1个红色信号、3个绿色信号和2白色信号，分别提示6号易位片段为一个拷贝、10号易位片段为3个拷贝和10号着丝粒片段为2个拷贝，表示该胚胎为临近-1分离形成的6q136qter单体和10p1510pter三体不平衡产物。,临近-1分离模式图,28,Reciprocal translocation carriers,Robertsonian translocation carriers,Biopsied cycles,257,149,Oocyte number,14.536.53,13.816.83,Number of good quality embryos on D3,7.124.18,6.854.61,Number of good blastocysts on D5,0.931.50,1.041.71,Biopsied embryo(median(range),10(1-30),9(1-24),Biopsied,embryos,2709,1420,Normal/balanced,17.5%(475),31.8%(451),Unbalanced,69.5%(1882),56.3%(799),Testing failure,13.0%(352),12.0%(170),Cancelled cycles(rate),82(31.9%),24(16.1%),2006-2011,年我院易位携带者进行,d3,FISH-PGD,结果,正常或平衡易位胚胎比例低，尤其是相互易位,29,Reciprocal translocation carriers,Robertsonian translocation carriers,Biopsied cycles,257,149,Oocyte number,14.536.53,13.816.83,Number of good quality embryos on D3,7.124.18,6.854.61,Number of good blastocysts on D5,0.931.50,1.041.71,Transferred embryo(median(range),2(1-3),2(1-3),Cycles accepted transfer,175,125,Clinical pregnancy rate per biopsied cycle,33.5%(68/257),32.2%(48/149),Clinical pregnancy rate per ET,38.9%(68/175),38.4%(48/125),Implantation rate,32.2%(86/267),28.1%(62/221),Miscarriage rate,16.2%(11/68),16.7%(8/48),Live,birth,rate per Biopsy,22.2%(57/257),26.8%(40/149),Health babies/delivered babies,52/52,35/35,2006-2011,年我院易位携带者进行,d3,FISH-PGD,结果,30,单卵裂球,FISH,几种风险可能导致没有准确结果,：杂交背景干扰太强的情况,杂交杂质信号干扰的情况,杂交失败未见信号的情况,固定或重杂交细胞核丢失的情况,囊胚FISH相对卵裂期FISH更有优势？,1.活检细胞数的增多有利于信号的判定；,2.直观方便检出胚胎嵌合体。,31,胚胎序号,Tel 7p,信号数,Tel 8q,信号数,CEP8,结果提示,1,16,36,26,异常,2,17,37,27,异常,3,15,35,25,异常,4,27,27,27,正常或平衡易位,5,14,34,24,异常,6,27,27,27,正常或平衡易位,7,17,37,27,异常,8,14,34,2,异常,9,16,36,26,异常,10,2432,2422,2422异常,11,32,12,22,异常,囊胚FISH-PGD举例：平衡易位,32,FISH,面临的挑战,33,不同实验室,FISH,检出率和准确率波动较大,着床率和妊娠率随着,FISH,检测错误率的上升而降低,34,FISH技术局限,FISH技术仅能检测有限的染色体，因此患者经FISH-PGD成功妊娠，但仍不可避免因其它未检测的非整倍体异常妊娠而引发的早期流产或出生缺陷。,FISH-PGD早期流产胚胎进行比较基因组杂交检测，检出5号染色体重复。,需要全染色体筛查为基础的PGD技术？,35,二、基于全染色体筛查的PGD(PGD-CCS),PGD with Comperhansive Chromosome Screening，避免了FISH仅能检测少数染色体的限制，采用全染色体筛查的方式对易位或倒位携带者进行PGD诊断，同时排除其它染色体非整倍体异常。,36,易位携带者的,SNP-PGD,临床情况总结,1,.,囊胚,+SNP,活检分析增加,PGD,诊断的准确性,2,.,基于SNP的,PGD-CCS可以检测出除易位染色体外其他染色体的异常，减少流产,37,易位携带者,SNP-PGD,的临床结局总结,38,共分析,360,个患者年龄在,2044,岁之间，平均新发生异常的几率是,27.2%,Age,是否,SNP-PGD,需要用于每个易位携带者,?,39,Reciprocal translocation carriers,Robertsonian translocation carriers,D5-FISH,SNP array,D3-FISH,D5-FISH,SNP array,D3-FISH,Transfer cycles,29,77,175,12,38,125,Clinical pregnancy rate per ET,55.2%,(16/29),63.7%,(49/77),38.9%(68/175),83.3%,(10/12),63.2%,(24/38),38.4%(48/125),Implantation rate,40%,(16/40),59.5%,(49/97),32.2%(86/267),59.1%,(10/17),54.9%,(28/51),28.1%(62/221),Miscarriage rate,25.0%,(4/16),8.16%,(4/49),16.2%(11/68),0,(0/10),12.5%,(3/24),16.7%(8/48),Comparison D5-FISH and d5-SNP results in translocation carriers 40,种代谢疾病，可覆盖大规模人群,建立国家和地区发病率数据库,确认诊断疾病，特别是稀有疾病,疾病亚型分类，或鉴别相似表型的不同疾病，进行有效干预,拯救婴儿生命，使他们更健康,减少对社会和家庭带来的负担,减少出生缺陷,指导意义,Next Generation Sequencing(NGS),41,NGS-PGD/PGS技术路线,WGA,SNParray检测,NGS检测,平行实验,已知样本,非整倍体单个胚胎干细胞,正常核型淋巴细胞,FISH-PGD诊断为异常的胚胎重活检淋巴细胞,全基因组扩增获得产物,临床并行实验,SNParray检测,NGS检测,建立平台,评估检出率，准确度等指标，芯片与测序相当,42,方法学的建立,2X,测序深度能覆盖60%人类基因组，,10X,深度能覆盖,90%,人类基因组。,等位基因脱扣,ADO,率约,5-20%,；平均值为4%，近着丝粒区段发生ADO率相对较高。,碱基对检出误差：,C:GT:A.,Before&after GC bias,correction,专为单细胞测序,CNV,分析而设置的算法，矫正WGA产生的GC偏差，使结果更接近基因组DNA测序水平。,43,NGS vs,SNParray,在非整倍体与,16M,缺失重复的比较,方法学的建立,44,技术特点,高通量，高准确度：,使用新一代测序技术，克服,PCR,技术通量低的缺点。,不容易产生漏检：,可对所有,23,对染色体进行检测。,FISH,技术由于每一轮杂交的探针数目是有限的，无法对所有,23,对染色体进行检测，容易产生漏检。,自动化程度高：,测序数据通过,SOAP,比对，,SegSeq,软件进行分析,45,我们前期已建立了FISH、SNP芯片技术检测染色体异常，并与华大合作建立了单细胞水平的全基因组测序。,2012年8月诞生了世界首例由NGS-PGD助孕的健康女婴。,我中心完成的NGS-PGD/PGS工作,46,三、单基因病,PGD,47,ESHRE PGD,工作组对扩增基础的,PGD,的,最佳实践指南,48,单基因病,PGD,的流程,1.,预备实验,1.1,基因诊断,1.2,设计个性化方案,1.3,构建单体型,1.4,基因组水平实验,1.5,淋巴细胞,/,废弃胚胎细胞水平实验,2.,临床实验,2.1,临床前预备实验,2.2,临床诊断,3.,产前诊断,49,1,、等位基因脱扣（,allele dropout,ADO,）影响,PGD,准确性的主要因素之一，其发生率约为,5-20%,。可导致胚胎的误诊。导致,ADO,的原因目前仍未充分弄清。,解决办法：,采用多重,PCR,的方法，,加入标记位点的检测,；,控制扩增片段大小(40%aneuploid cells,25%aneuploid cells,25-40%aneuploid cells,FISH reanalysis of inner cell mass and trophectoderm samples of previously array-CGH screened blastocysts shows high accuracy of diagnosis and no major diagnostic impact of mosaicism at the blastocyst stage,Antonio C,et al.Human Reproduction,Vol.,0,No.,0,pp.1,1,0,201,3,真正会影响到移植风险的嵌合胚胎发生率仅为,5%,.,因为绝大多数非整倍体异常在内细胞团与滋养层中共同发生。,而在滋养层细胞中可能嵌合存在更多异常。,嵌合对,PGS,诊断的影响,68,如何理解卵裂期活检的影响（,Timelapse,分析）,正常卵裂球的移除进一步影响胚胎发育的潜能,异常卵裂球的存在影响胚胎的正常诊断,69,囊胚活检有替代卵裂期活检的趋势,作者认为：卵裂球活检仍相对更加损伤胚胎，临床结局显示囊胚活检应是最为合适的植入前遗传学检测的活检时期。,Fertil Steril.2013 Sep;100(3):608-14.doi:10.1016/j.fertnstert.2013.07.004.,70,极体活检风险最低的活检方法,极体活检对胚胎没有损伤，随着极体染色体检测技术的进步，如更精确而且便宜的测序技术的应用，极体活检将成为未来,PGD/PGS,中一项非常有前景的技术。,71,讨论：极体活检vs囊胚活检？,避免嵌合的影响,不影响未来的胚胎,仅检测减数分裂错误而未评估有丝分裂错误，而有丝分裂可能修复减数分裂错误,能分析来自父母双方的异常,嵌合(滋养外胚层可能不能代表内细胞团),囊胚培养和玻璃化,冷冻,美国的,Nathan Treff,代表与欧洲的,Joep Geraedts,达成了许多共识：极体活检与囊胚活检各有优势，不再建议进行卵裂期活检,72,Willadsen S et al.Hum.Reprod.1999;14:470-475,早年PGS尝试：利用动物,MII,卵构建人卵裂球分裂相,技术难度大，构建成功率低，无法实现临床应用。,全染色体组筛查技术,73,全染色体组筛查技术,FISH:,9,-,11,条chr,所有23对人染色体都需要筛查,CGH-,比较基因组杂交,aCGH:,基因组杂交芯片,Microarray SNP,RealTime PCR,Next Generation Sequencing,74,全染色体筛查技术进展,1996,Sermon K.,et al.Adaptation of the primer extension preamplification(PEP)reaction for preimplantation diagnosis:single blastomere analysis using short PEP protocols.Mol Hum Reprod.1996;2(3):209-212.,(最早用全基因组扩增法进行PGD，但仅筛查几个基因),1999,Wells D.,et al.Detailed chromosomal and molecular genetic analysis of single cells by whole genome amplification.Nucleic Acids Res,27:1214-1218.,(首次使用单细胞mCGH做PGS),2005,Knijnenburg J.,et al.Rapid detection of genomic imbalances using micro-array consisting of pooled BACs covering all human chromosome arms.Nucleic Acids Res.2005;12(33):e159.,(首次用aCGH做PGS),2007,Treff NR.,et al.Accurate 23 chromosome aneuploidy screening in human blastomeres using single nucleotide polymorphism(SNP)microarray.Fertil Steril,2007;86:s217.,(首次用SNParray做PGS),2013,Eric J.Forman,et al.,Comprehensive chromosome screening alters traditional morphology-based embryo selection:a prospective study of 100 consecutive cycles of planned fresh euploid blastocyst transfer,(首次用qPCR做PGS),2013,Chunlei Zhang,et al.A Single Cell Level Based Method for Copy Number Variation Analysis by Low Coverage Massively Parallel Sequencing,(首次用NGS做PGS),Pubmed总体能够搜索到2881篇文献，自2002年至今，每年平均有176篇，称增长趋势,75,作者,技术,研究对象,结论,Munn S,2002,FISH,1235枚淘汰卵裂期胚胎，至少检测3个卵裂球/胚。,发现48%复杂嵌合异常，二倍体或多倍体异常占26%。25%的胚胎发生了有丝分裂不分离，16号染色体最常发生异常，但嵌合率的高低与女性年龄无关。,Cupisti S,2003,FISH,31-34岁女性卵子,31-34岁女性卵子的染色单体异常发生率约为11%。,Lucille Voullaire,2007,CGH,28名女性176枚囊胚,37岁以下女性非整倍体率18.9%；复杂异常率27.9%；37岁以上女性非整倍体率42.6%；复杂异常率27.8%,Liang L,2013,CGHarray,平均年龄40岁的高龄女性，检测246枚囊胚,RCT研究发现高龄女性正常胚胎率能达到36%，有64.7%的病人有可移植胚胎，22个移植周期达到50%的临床妊娠率。,证实PGS技术能够显著提高40岁以上女性的移植成功率及抱婴率。,Franasiak JM,2014,qPCR,+SNParray,回顾性分析该中心15169枚进行全染色体筛查的囊胚检测结果,统计女方年龄从22岁-49岁，发现26-30岁的患者胚胎染色体异常率最低，而越年轻或越年长的患者胚胎异常率均有升高，高龄患者非整倍体异常及发生频率极高。,PGS适应证-高龄,76,PGS适应证-反复植入失败,反复植入失败,：,2003,年,Wilton,等人将单细胞,CGH,应用到反复植入失败（,Recurrent Implantation Failure,RIF,）患者的,PGS,中，对比应用,CGH,与,FISH,两种,平台,，发现单细胞,CGH-PGS,的植入率与妊娠率均高于,FISH,。,2007年Voullaire等人对28名反复失败女性采用CGH筛查胚胎非整倍体，发现存在高比例的染色体异常。,2014年最新研究Basile等人结合arrayCGH及Timelaps形态学分析反复植入失败患者125个周期504枚胚胎，认为随着胚胎发育动力的逐渐减弱，染色体正常胚胎逐渐减少。,77,反复流产,20,12,年,最新文献Hodes,等人,统计了多中心反复流产(,recurrent pregnancy loss,RPL),患者,共2282个胚胎，经aCGH平台进行,PGS,后排出了60%的非整倍体胚胎，正常胚胎植入率55%(移植周期)，植入成功后继续妊娠率达到92%，流产率降至6.9%，而对照组平均流产率在23%左右。,Hodes-Wertz B,et al,.,Idiopathic recurrent miscarriage is caused mostly by aneuploid embryos.Fertil Steril.2012 Sep;98(3):675-80.,78,对于一般患者,Geoffrey Sher,et al.,Genetic analysis of human embryos by metaphase,comparative genomic hybridization(mCGH)improves,efciency of IVF by increasing embryo implantation,rate and reducing multiple pregnancies and,spontaneous miscarriages,.,F,ertility and Sterility,2009;,92,(6).,79,35,岁，优质患者，单囊胚移植的随机研究，,aCGH,筛选囊胚后明显提高妊娠率。,80,“,until results of RCTs using a different biopsy stage and arrays can demonstrate a significant increase in delivery rates,there is no evidence that routine PGS is beneficial for patients with advanced maternal age,”,81,谢谢！,82,