牛结核防控技术及研究进展.ppt

结节）,干酪样坏死或钙化,牛结核病危害,奶牛,牛奶-人结核病传染源,产奶量下降、牛奶品质降低,肉牛-时间短,饲料报酬低,役牛,劳动力减弱,人型菌,牛型菌,禽型菌,人,犬,猫,牛,马,羊,猪,鸡,病原-致病性结核分枝杆菌属,人型菌&牛型菌,基因水平上,99.95%,同源,感染谱相互交叉,10%,结核病人感染牛型菌,人型菌可感染牛,(Chen,2009),结核菌的细胞免疫与体液免疫规律,病程发展,免疫反应,细胞免疫,体液免疫,90%,结核菌感染者不发病,细胞免疫和体液免疫分离,早期发生细胞免疫,病程后期体液免疫增加,症状,潜伏期,活动期,16-45d,长者达数月，甚至数年、终生,无明显症状,不发病,肺结核,肺外结核,症状,咳嗽,虚弱,消瘦,呼吸困难,咳嗽加重,鼻孔干酪样鼻汁,胸部干性或湿性啰音、偶尔摩擦音,体表淋巴结肿大,结核病诊断,胶体金,-干扰素,ELISA,PPD皮试,免疫学诊断,分子生物学,体液免疫,细菌学诊断,细胞免疫,PPD皮试操作流程,剃毛,颈侧中部上三分之一,测量皮皱厚,记录,标记,皮内注射结核菌素,PPD稀释成2万单位/ml,注射2000单位/0.1ml,测量皮皱厚,记录,标记,72小时,75%,酒精消毒术部,;,左手捏起皮肤，右手持针管,;,将针头与皮肤成,30-45,角刺入表皮与真皮之间，缓慢注入药液,;,以局部形成丘疹状隆起为准。,皮试工具,判定标准,中国GB/T18645-2002,OIE,皮内注射0.1ml(2000IU)牛结核菌素,72h后观察皮厚,96与120h再观察一次,牛结核菌素单用,或牛与禽结核菌素联用,不少于2000 IU,72h后观察,阳性,:,皮厚差大于,4mm,阴性,:,皮厚差小于,2mm,可疑,:,皮厚差,2-4mm,疑似牛立即在另一侧用同一批,PPD,第二次皮试,72h,后观察,阳性,:,皮厚差大于,4mm,阴性,:,皮厚差小于,2mm,可疑牛,42,天后重作皮试,牛与禽结核菌素联用时,牛结核菌素皮厚差大于禽结核菌素皮厚差,4mm,为阳性,1-4mm,为可疑,小于或等于禽结核菌素皮厚差为阴性,结核菌素皮内变态反应的特点,世界动物卫生组织OIE迄今为止唯一推荐的牛结核病的诊断方法,非,特异性反应,重症牛敏感性低,操作复杂烦琐,结果判断主观性大,IFN-,检测方法,检测OD值并确定IFN-,g,水平,抽取全血,ESAT-6,CFP-10,有丝分裂原对照,将全血转移至培养孔中,加入抗原,培养过夜,吸取上层血浆,进行夹心ELISA检测,温育 60分钟,洗涤,加底物,作用30分钟后终止反应,TMB,显色,IFN-,g,IU/ml,OD 450nm,标准曲线,步骤 1 全血培养,步骤 2 IFN-gamma ELISA,阴性对照,IFN-,释放检测特点,诊断,潜伏,感染及,活动性,结核病,高特异性，高敏感性,外周血24h,出结果,比,TST,更贵，采血后在12小时内检测,Bovi,TB IFN-gamma kit,目前发达国家均以该方法辅助进行结核病根除计划,牛结核病特异抗体检测方法,ELISA方法,胶体金方法,Rv3872,CFP10,ESAT6,MPB70,MPB83,牛结核特异抗体检测,检测针对特异抗原（单个或多个）的抗体,抗体消长规律复杂！,总体而言抗体水平与病程发展成正比,抗体针对的抗原，抗体类型，抗体水平因个体而异，因时而异,方法敏感性低,多抗原,联合使用,及与TST联合使用可显著提高检出率,三、牛结核病预防和治疗,预防,检疫,分群隔离,培育健康牛犊,消毒,5%来苏儿或3%氢氧化钠或0.1%-0.5%过氧乙酸消毒畜舍、饲养用具和运动场,牛奶消毒后出场,治疗,早期,氨基水杨酸钠、异烟肼,难以根除,价值不大,控制根除计划扑杀,四、,牛尾静脉采血介绍,尾静脉采血优点,方便快速,一般不需要保定,减小应激,尾静脉采血方法,牛尾静脉位于,尾椎腹侧正中的脉管沟内,左手抓住尾巴垂直上举,右手用镊子取,5%,碘酒棉球在尾根,1/2,1/3,处,(,离尾根处,7-15cm),进行消毒,手持,9,号,采血器,顺血管,斜角刺入,见有血液回流,即可外拉针芯使血液流入采血器,采血完毕,局部消毒适当按压,采血工具,血液处理,抗凝血,真空采血管或其它容器内抗凝剂。采集的血液立即与抗凝剂充分混合，防止凝固,肝素：,1%,肝素,0.1,毫升可抗凝,5-10,毫升血,EDTA,：每毫升血加入,20mg,枸缘酸钠：每毫升血加入,3-5mg,血清,标记，室温静置,凝固后吸取自然析出的血清或经离心分离,分装，再贴上标签冷藏保存备检,五、记录,畜主,时间,皮厚增加(mm),牛号,皮皱厚(mm),操作者,皮皱厚(mm),备注,记录卡,谢谢！,健康养殖,奶业腾达,