1、单击此处编辑母版标题样式,编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,实验原理,溶菌酶广泛存在于动植物及微生物体内，具有抗感染、消炎、消肿、增强体内免疫反应等多种药理作用。,鸡蛋清内含有丰富的溶菌酶，向鸡蛋清中加入一定量的中性盐，并调节pH至溶菌酶的等电点，溶菌酶即可结晶析出。,如若结晶不纯，可以重结晶。,实验原理,溶菌酶之所以溶菌，因它能催化革兰氏阳性细菌细胞壁黏多糖水解的缘故。,测定溶菌酶的活力，可以用某些细菌细胞壁作为底物，以单位时间内被它水解的细胞壁的量表示酶活力的大小。,实验步骤,一、溶菌酶的提纯结晶,（1）将2只鸡蛋的蛋清置于小烧杯中，慢慢搅拌5分钟，使蛋清稠度均匀，然后用两
2、层纱布过滤除去卵带或碎蛋壳，记录蛋清体积。,（2）按每100ml蛋清溶液加入5g氯化钠的比例，向蛋清溶液中慢慢加入氯化钠细粉，边加边搅拌，促使氯化钠细粉及时溶解，以避免局部浓度过高或沉淀于容器底部，否则会引起蛋白质的变性而产生大量的白色沉淀。,实验步骤,（3）加完氯化钠细粉后，再用1mol/L的氢氧化钠溶液小心地将上述蛋清溶液的PH值调节到9.5-10.0。,低温下静置7d，溶菌酶结晶将慢慢析出，于72-96h 达到最高产率。,（4）将结晶溶液4000r/min，离心5min，倾去上清液，加入等体积预冷0丙酮，再4000r/min，离心5min，洗涤后弃去上清液，即可得到粗制的溶菌酶晶体。,实
3、验步骤,二、溶菌酶的活力测定,（1）酶液的制备,准确称取溶菌酶样品100mg，用0.1mol/L，pH6.2磷酸缓冲液配成1mg/ml的酶液，再将酶液稀释成50g/ml。,（2）将酶液2mL和底物悬液2mL（短小芽孢杆菌）分别置于25水浴中保温10-15min，然后吸取底物悬液4mL放入比色皿中，450nm波长读出吸光度，此为0时读数。,1min后，再读吸光度，记下读数。,（3）酶活力单位的定义是：在25，pH6.2，波长为450nm时，每分钟引起吸光度下降0.001为1个活力单位。,实验步骤,P=(A0-A1)/m*1000,P：每毫克酶的活力单位（U/mg）,A0：零时450nm处的吸光度,A1:1min时450nm处的吸光度,m：样品的质量（mg）,实验结果,1、计算出溶菌酶的活力单位,2、请说出其它提取和纯化溶菌酶的方法吗？请写出相关的方法及原理。,
浙ICP备2021020529号-1 | 浙B2-20240490 
