微生物的培养基.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第三节 微生物的培养基,一、培养基的概念,二、培养基的配制原则,三、培养基的类型及应用,四、培养基的配制过程,重点:,掌握培养基的概念、配制原则和类型。,难点,：学习选择和配制培养基,一、培养基的概念,培养基：,按照微生物生长繁殖所需要的，,用人工方法配制而成的适合于微生物生长繁殖或产生代谢产物的营养基质。,用途,：,1.促进特定微生物的生长繁殖。,2.用于微生物纯种的分离、鉴定。,3.制造微生物制品。,实现有效控制微生物生长繁殖前提条件是：,合理配制培养基,培养基应具有的条件：,1.含有满足微生物生长发育的水分、碳源、氮源、生长因子及基本的离子（磷、硫、钠、钙、镁、钾、铁）及各种微量元素。,2.具有适宜的酸碱度(PH)。,3.具有一定的缓冲能力及一定的氧化还原电位和合适的渗透压。,一、配制培养基的原则,1.选择适宜的营养物质,根据不同微生物的营养需要配制,不同,的培养基。,如：自养、异养,细菌-,牛肉膏蛋白胨(普通肉汤),培养基；,放线菌-,高氏1号合成,培养基；,酵母菌-,麦芽汁,培养基，,马铃薯蔗糖,霉菌,-,查氏,培养基，,马铃薯蔗糖,2.控制营养物质浓度及配比,合适,（1）营养物的浓度,浓度大-,抑制,作用，,如高糖，盐；,浓度小-,不能满足,微生物生长的需要。,（2）营养物质配比,-影响微生物生长繁殖和代谢产物积累。,碳氮比,（C/N=,碳元素,与,氮,元素,）,碳源过多-抑制作用；,碳源过少-菌种衰老和自溶,氮源过多菌体生长旺盛，积累代谢产物少。,氮源过少,-,菌体生长繁殖缓慢。,谷氨酸发酵,：,C/N=4:l时，菌体大量繁殖，谷氨酸积累少。,C/N=3:1时，菌体繁殖受抑制，谷氨酸大量增加。,正常,:,细菌,：C:N=6:1,真菌,：C:N=10:1,3.控制PH值,各类微生物生长的最适pH各不相同。,细 菌：7,7.5,放线菌：7.8,8.0,酵母菌、霉菌：4.5,6.0,生长和代谢-改变培养基pH。,维持pH值的恒定方式,：,在培养基里加,PH缓冲剂(6.4,72,),或,不溶性的碳酸盐。,磷酸二氢钾(碱性)或磷酸氢二钾(酸性),PH=6.8,（CaCO3）,配制培养基的原则,1.选择适宜的营养物质,2.营养物质的浓度及配比合适,3.控制培养基的PH值,4.原料来源的选择,5.选择适宜的灭菌处理方法,二、培养基的种类及应用,1.分类原因,(1),微生物种类不同，需要的营养物质不同。,(2),同一种微生物，培养或研究目的不同，配制的培养基也不同。,2.分类角度,按,组成成分,分：合成、天然、半合成培养基,按,物理状态,分：固体、半固体、液体培养基。,按,功能,分：基础、选择、加富、鉴别培养基。,按照培养,微生物,的种类分：细菌、霉菌、酵母菌、放线菌培养基。,（一）根据培养基成分,1.合成培养基,又称限定性培养基，指由化学成分的营养物质（,已知营养物质的,成分的化学性质和数量,）配制而成的培养基,。,优点,:化学成分精确、重复性强,。,缺点,:,配制过程复杂，微生物生长较慢，价格昂贵。,应用,：,实验室内，研究微生物营养、代谢、,菌种选育,、菌种鉴定、生物测定等定量要求较高的研究。,2.天然培养基,又称复杂培养基，采用动植物组织或微生物细胞或其提取物和粗消化产物制成的。,营养物质来源于天然物质。,天然物质：,牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、麦芽汁、玉米粉、马铃薯、牛奶和血清等。,蒸熟的马铃薯、豆芽汁、麦芽汁,-霉菌、酵母菌,普通牛肉汤、酵母膏、牛肉膏、蛋白胨等,-细菌,。,优点,：配制方便，营养丰富，,价格低廉。,缺点,：成分不稳定，营养成分难以控制，结果复重性差。,应用,：生产上大规模培养菌种。,3.半合成培养基,即有天然有机物，又有已知成分化学药品的培养基,。,在天然培养基的基础上适当加入无机盐类或在合成培养基的基础上添加某些有机物。,如,马铃薯蔗糖,培养基,。,马铃薯蔗糖培养基成分:,去皮马铃薯200克，葡萄糖20克，水1000mL.,优点,：有效地满足微生物对营养物质的要求，适合大多数微生物。,应用,：生产上、实验室,（二）,根据培养基的物理状态分,1.固体培养基,在液体培养基中加入,凝固剂（,1.5,2.0%的琼脂,），使液体培养基凝固呈固体状态，或直接由天然的固体营养物质制成的培养基，,如白酒、固体食醋生产。,用途,：,分离、鉴定、活菌计数、菌种保藏等,。,凝固剂,：琼脂、明胶和硅胶三种。,凝固剂,要求,:,不被微生物利用分解，生长温度范围为固体。,凝固点温度不能太低。琼脂:96,，45,无毒，灭菌不会破坏。,透明及粘着力强。,配制方便；便宜。,2.半固体培养基,在液体培养基中加入少量凝固剂,使之呈柔软的糨糊状或直接将营养物质配制成半流体状态的培养基。,凝固剂加量,：0.2%,0.7%的琼脂。,应用,:,观察细菌的,运动特征,(有无鞭毛)、,培养微好氧细菌，检验噬菌体。,小曲白酒-边糖化边发酵、酱油-高盐稀醪发酵3.液体培养基,把各种,营养物质,都溶解于,水,中，,混合,制成的,液体,状态的培养基。,培养基中,不加任何凝固剂。通过振荡和搅拌增加通气量。,特点：,成分均匀，便于灭菌处理、运输和监测。,应用：,微生物生理生化特性研究、大规模的工业生产（,啤酒、葡萄酒、乳制品生产,）,。,（三）按照培养基的功能分,(1)基础培养基,:含有一般微生物生长繁殖所需的基本营养物质的培养基。,用途,:,作为一些特殊培养基的基础成分。,细菌,:牛肉膏蛋白胨培养基,霉菌,:马铃薯葡萄糖琼脂培养基,酵母菌,:麦芽汁琼脂培养基,(2)选择培养基,在培养基中加入某些,化学药品,以,抑制,不需要的微生物生长，而,促进,需要的微生物生长的培养基。,化学药品,-,抑菌剂和杀菌剂,常用染色剂,（,结晶紫、亮绿、孟加拉红）,或,抗生素,（青霉素、链霉素）.,分离,革兰氏阴性,菌-加青霉素或结晶紫(抑制G+).,分离,酵母菌和霉菌,-加抗生素(青霉素、链霉素，抑制细菌和放线菌,)。,用途,:将所需要的微生物从混杂的微生物中分离出来。,培养基中加入某些化学药品抑制不需要的微生物生长，促进需要的微生物生长。,(3)加富培养基,在基础培养基里专门加入,待分离微生物特别需要,的,营养物质，而使待分离微生物达到选择的目的。,如：血清、血液、动植物组织液、酵母浸膏等。,用途,：,培养营养要求比较,苛刻,的异养微生物。,富集或,分离,某种微生物。,纤维素-富集纤维素降解微生物,石蜡油-富集分解石油的微生物,与选择培养基区别,：,加富培养基,：,增加,所要分离的微生物数量，成为优势菌，逐步淘汰其他微生物。,选择培养基,：,抑制,不需要微生物的生长，使所需要菌成为优势菌。,(4)鉴别培养基,培养基中加有指示剂，从而用肉眼就能使目的微生物或待分离微生物的菌落与其他微生物菌落区别开来。,用途,：微生物的分类、鉴定或筛选菌种。,常用的鉴别培养基,：,伊红-美蓝琼脂培养基（EMP）成分：蛋白胨10克 乳糖5克 蔗糖5克 K,2,HPO,4,2克 *伊红Y0.4克 美蓝0.06克 蒸馏水1000ml,伊红和美蓝作用:,抑菌某些细菌生长和鉴别染色，产酸指示剂。,区分,大肠杆菌和,沙门氏菌和志贺氏菌,大肠杆菌,：,发酵乳糖产酸，使伊红与美蓝结合生成沉淀，呈现紫黑色菌落，经反射可看到绿色金属光泽。,沙门氏菌和志贺氏菌,:,不能发酵乳糖,形成无色菌落.,区分大肠杆菌和,产气肠杆菌,大肠杆菌:,在EMB上,菌落较小,有绿色金属光泽。,产气杆菌：,菌落较大，湿润，呈灰棕色,培养基中加有能与某一菌的无色代谢产物发生显色反应的指示剂，从而用肉眼就能使该菌菌落与外形相似的它菌相区分,一些鉴别培养基,培养基名称,加入化学物质,微生物代谢产物,培养基特性变化,主要用途,酪素,培养基,酪素,胞外蛋白酶,蛋白水解圈,鉴别产蛋白酶的菌种,明胶培养基,明胶胞外蛋白酶,明胶液化,鉴别产蛋白酶的菌种,油脂培养基,食用油、吐温中性红批示剂,胞外脂肪酶,由淡红色变成深红色,鉴别产脂肪酶菌株,淀粉培养基,可溶性淀粉,胞外淀粉酶,淀粉水解圈,鉴别产淀粉酶的菌种,H,2,S试验培养基,醋酸铅,H2S,产生黑色沉淀,鉴别产H2S菌,糖发酵培养基,溴甲酚紫,乳酸、醋酸,由紫色变黄色,鉴别肠道细菌,伊红美蓝培养基,伊红、美蓝,酸,带金属光泽深紫色菌落,鉴别水中大肠菌群,(四)按照培养微生物的种类分,培养基按微生物的种类可,分为,四类：,细菌培养基,、,放线菌培养基,、,酵母菌培养基,和,霉菌,培养基,。,常用的细菌培养基-营养肉汤和营养琼脂培养基；,常用的放线菌培养基-高氏1号培养基；,常用的酵母菌培养基-马铃薯蔗糖培养基和麦芽汁培养基；,常用的霉菌培养基-马铃薯蔗糖培养基、豆芽汁葡萄糖（或蔗糖）琼脂培养基和察氏培养基等。,培养基是微生物菌种生长繁殖和发酵的重要物质基础，也是微生物赖以生存的外界环境。在科学实验和实际生产中，会遇到许多问题，有些培养基即是液体培养基，又是选择培养基也可能是天然培养基，掌握不同类型的培养基特点，并将之灵活地应用于具体的实际工作之中。,本节要点：,一、培养基,按照微生物生长繁殖所需要的，用人工方法配制而成的适合于微生物生长繁殖或产生代谢产物的营养基质,。,二、配制培养基的原则:,1.选择适宜的营养物质 2.控制营养物质浓度及配合合适3.控制PH值4.原料来源的选择.选择适宜的灭菌处理方法。,三、,培养基的分类：按,组成成分,:合成、天然、半合成；,按,物理状态,分,：固体、半固体、液体培养基；,按用途分,:,基础培养基、选择培养基、鉴别培养基、加富培养基。,四、,基础培养基,是含有一般微生物生长繁殖所需的基本营养物质的培养基。,选择培养基,在,培养基中加入某些,化学药品,以,抑制,不,需要的微生物生长，而,促进,需要的微生物生长的培养基。,加富培养基,在基础培养基添加特殊营养物质，用以培养营养要求比较苛刻的某些微生物或分离某种微生物,。,鉴别培养基是,培养基中加有指示剂，从而用肉眼就能使目的微生物或待分离微生物的菌落与其他微生物菌落区别开来,。,常用的鉴别培养基,：伊红-美蓝琼脂培养基（EMP）,五、培养基按,微生物的种类,分为,：,细菌培养基、放线菌培养基、酵母菌培养基和霉菌培养基。,培养基配制的核心,：确定培养基的营养物质及其配比,。,作业,：,1.什么是培养基?有何作用?,2,.,配制培养基的原则是什么?,3.培养基是如何进行分类的?什么是基础、选择、鉴别、加富培养基？,4.详细说明培养基按微生物的种类如何分类？,5.培养基配制的核心是什么？,思考题,:,在实际生产中如何选择和配制培养基?,