1、单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,分子生物学在白血病中的应用,2016-3-8,融合基因实验室,一、白血病相关基因改变的常见类型,融合基因,基因突变,基因表达异常,1.融合基因：,所谓融合基因，是指将两个或多个基因的编码区首尾相连置于同一套调控序列（包括启动子、增强子、核糖体结合序列、终止子等）控制之下，构成的嵌合基因。,概 念,Chr 9,Chr 22,ABL,BCR,BCR-ABL融合基因,2.基因突变：,错义突变（点突变）,插入突变,缺失突变,移码
2、突变,错义突变（点突变）：,DNA分子中一个碱基对被另一个不同的碱基对取代所引起的突变。,如：JAK2V617F,JAK2基因,mRNA水平（cDNA水平）：第1849位点G突变为T,蛋白水平：第617位氨基酸位点由缬氨酸（V）突变,为笨丙氨酸（F）,插入突变：,较长片段的DNA的插入而发生突变，但不改变阅读框,如：NOTCH1 H1590-L1592insFGP,NOTCH1基因,mRNA水平（cDNA水平）：c.47754776ins(TGGGCC),蛋白水平：H1590-L1592insFGP,缺失突变：,较长片段的DNA的缺失而发生突变，但不改变阅读框,如：JAK2,N542-E543
3、del,JAK2基因,mRNA水平（cDNA水平）：c.1624-1629 del 6bp,蛋白水平：,N542-E543 缺失N、E氨基酸,移码突变：,DNA片段中某一位点插入或丢失一个或几个（非3或3的倍数,碱基对时，造成插入或丢失位点以后的一系列编码顺序发生,错位的一种突变。,如：CALR L367fs(46)突变,CALR基因,mRNA水平（cDNA水平）：c.1179_1230del 52bp,蛋白水平：第367位氨基酸（亮氨酸）位点发生移码，在,367位点起后的46位氨基酸终止。,三、白血病相关基因分类,BCR-ABL,FLT3-ITD,JAK2V617F,C-KIT,PML-RA
4、Ra,NPM1,RUNX1,AML1-ETO,DNMT3A,TET2,ASXL1/ASXL2,IDH1/IDH2,SF3B1,SRSF2,U2AF1,Class 1,增 殖,Class 2,分 化,Class 3,表观遗传,Class 4,剪切因子,四、白血病相关常见基因,AML,CML,MPN,ALL,CLL,MDS,AML,相 关 基 因 异 常,融合基因：,1、,PML-RARa:,95%AML-M3 分为三型 L型、S型、V 型,PLZF-RARa,NPM1-RARa,2、,AML1-ETO:,40%AML-M2(主要为M2b),3、,CBF,-MYH11：,90%AML-M4Eo,4
5、MLL-AF17,MLL-AF6,AML-M4/M5,MLL-AF9,AML,相 关 基 因 异 常,基因突变：,FLT3-ITD,NPM1,（,A/B/D,型）,c-Kit,IDH1,IDH2,ASXL2,NRAS,KRAS,P53,DNMT3A,基因定量分析：,WT1,定量,FLT3-ITD,：,AML-M3,中发生频率较高,c-Kit,：,50%AML1-ETO,阳性,AML,CBF,-MYH11阳性AML,ASXL2,：,AML1-ETO阳性AML,CML,相 关 基 因 异 常,BCR-ABL:95%CML CML特异 marker,亚型：,cDNA Protein,b3a2、b
6、2a2型 P210,e19a2型 P230,e1a2型 P190,MPN,相 关 基 因 异 常,PV、ET、PMF的诊断,BCR-ABL 排除早期慢粒,PV,:JAK2V617F JKA2exon12,ET,：JAK2V617F MPL CALR,PMF,:JAK2V617F MPL CALR,BCR-ABL,JAK2V617F,MPL,CALR,JAK2exon12,MDS,相 关 基 因 异 常,WT1,定量,DNMT3A,TET2,ASXL1,SF3B1,SRSF2,RUNX1,SF3B1,：主要见于,50-70%,环形铁粒幼增多性贫血,SRSF2,：主要见于,CMML,ALL,相 关 基 因 异 常,BCR-ABL:35%成人ALL,TEL-AML1:儿童ALL 预后好,E2A-PBX1,：预后不好,MLL-AF4,：婴幼儿多见,NOTCH1,：预后好,FBXW7,：预后不好,PTEN,NRAS,KRAS,B-ALL,T-ALL,CLL,相 关 基 因 异 常,P53,NOTCH1,NOTCH1,：,见于,B,系或,T,系,CLL,在,CLL,中为预后不好指标,五、检测方法介绍：,1、RT-PCR,2、PCR,3、PCR-测序,4、RQ-PCR,六、结果报告单分析：,Thank you!,
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