病理检验技术-.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,病理检验技术,组织制片技术,病理检验,病理检验属于形态学检验，主要通过肉眼观察有关组织或器官的形态改变，借助显微镜观察组织结构和细胞形态的细微变化，对疾病做出病理学诊断。,病理组织制片技术,病理组织制片技术一般包括以下基本技术流程：,取材、固定、洗涤、脱水、透明、浸蜡（透蜡）、包埋、切片、贴片、烤片、染色、封片,等。这些技术流程相互联系、互为影响，每一项技术处理是否得当都直接影响切片质量。,基本步骤,收集标本（活检、尸检、动物实验）取材固定切块,1*1*0.3,自来水冲洗,(1-2h),组织脱水（,75%,乙醇、,85%,乙醇、,95%,乙醇,I,、,95%,乙醇,II,、,100%,乙醇,I,、,100%,乙醇,II,，低浓度乙醇,2-4h,，高浓度乙醇,1h,）组织透明（二甲苯,30,）浸蜡（软、硬蜡、大组织,4-16h,）组织,2-4h,包埋 冷却修蜡块 焊蜡块 切片 贴片 烤片 切片脱蜡 切片染色（常规,HF,和瑞特）,一、取材,按照病理检查的目的和要求，切去适当大小和数量的组织块，用于制作组织切片的过程，称为取材,注意事项：,1.,避免组织结构变形,2.,组织块大小适当,3.,及时取材,4.,标明包埋方向,5.,染色包裹小标本,6.,充分暴露病灶,7.,确定取材部位,8.,清除多余组织,9.,重复取材（补材）,10.,认真核对,四、脱水,将组织内的水分用某些化学试剂置换出来的过程称为脱水。所使用的化学试剂称为脱水剂,脱水的目的 组织块经固定和水洗后，含有大量水分，而水与苯、二甲苯等透明剂不混溶，所以透明前需用乙醇吧组织中的水分置换出来，为透明做好准备,常用脱水剂：乙醇、丙酮、丁醇、异丁醇、叔丁醇、正丁醇、环己酮,脱水方法；一般吧脱水剂配成各种浓度，自低到高浓度依次进行，使组织中所含水分逐渐减少直至被脱水剂取代,五、透明,使用某些化学剂（如二甲苯等）将组织中的脱水剂置换出来，以利于浸蜡和包埋，因组织块浸入这些试剂后常呈半透明状，故称透明（或媒浸）。使用的化学药剂称为透明剂,透明剂：二甲苯：是最为常用的一种透明剂，它能与酒精，丙酮相混合，又是石蜡的溶剂。在透明过程中，组织继续发生硬化，由于二甲苯对组织的收缩性强，作用迅速，因此，组织在二甲苯中时间不宜过长，否则组织容易变脆变硬，一般是达到组织的透明为度，小块组织在半至一小时内透明。,六、浸蜡,组织经媒剂的透明作用之后，移入熔化的石蜡内浸渍，石蜡逐渐浸入组织间隙，取代透明剂，这一程序就叫浸蜡。根据所用石蜡的熔点，浸蜡需要能够保持于,54,60.C,温箱内进行。,为了尽可能排除透明剂，浸蜡可以分两级或三级进行。以熔点较低的软石蜡作为第一步，然后再换为熔点较高的石蜡作为第二步，第三步。浸蜡时间,1,4,小时，或更长，并使之过夜则较易切割,七、包埋,就是将已经经过固定，脱水，透明，浸蜡的组织块从最后的蜡浴取出置入充满熔融石蜡的包埋框内，包埋成块，使组织和包埋剂相熔一体并迅速冷却，这个程序称为包埋。包埋剂凝固后，进一步加强了组织的硬度和韧度而便于进行切片。,1.,组织取材,2,毫米厚度，固定于福尔马林数小时后再换以新鲜福尔马林固定数小时。,2.,组织流水冲洗,6,12,小时。,3.70,酒精,2,4,小时。,4.85,酒精,2,4,小时。,5.95,酒精（,）,2,4,小时。,6.95,酒精（,）,2,4,小时。,7.100,酒精（,）,2,4,小时。,8.100,酒精（,）,2,小时。,9.,二甲苯（,）,0.5,1,小时。,10.,二甲苯（,）,0.5,小时。,11.,浸蜡（,）,2,小时。,12.,浸蜡（,）,2,小时。,13.,组织包埋,。,八、切片,切片的步骤：,1,、将蜡块固定于切片机头上的夹座内，调整到稍离开切片能够切到的位置上，注意蜡块组织切面与切片刀口要垂直平行。,2,、再调整蜡块组织切面恰好与刀口接触，旋紧刀架，固定好机头。,3,、根据需要调整切片厚度。,4,、摇动切片机手轮先进行修整切片，直到切出完整的最大组织切面后，再进行切制。,5,、实践中可用右手转动切片机手轮，左手用毛笔托起蜡片，协调地进行切片操作。,6,、切下的切片带，一端用镊子轻轻拉起，应尽可能将切片带拉直展开，用毛笔将切片带从刀口向上挑起，拉下切片带，然后轻拖铺于恒温水面上。,九、贴片,将单张或数张切片，用镊子夹住蜡片的一边并提起，铺于恒温水中，立即用毛笔轻轻拉展以切片无皱褶为最好。如有皱褶时用镊子细心地逐个轻轻拨开，注意不可拨破组织。然后分开每张切片，选取其中最完整的，没有皱褶的切片。,十、烤片,在制片时,需要将组织切片放在烤片机上,使组织与载玻片牢牢的粘合在一起,烤片是病理组织制片中的一个重要环节。烤片的好坏，会影响到染色的质量和成败。,十一、染色,染色就是利用染料在组织切片上给与颜色，使其与组织或细胞内的某种成分发生作用，经过透明后通过光谱吸收和折射，使其各种微细结构能显现不同颜色，这样在显微镜下就可显示出组织细胞的各种成分。,十二、封片,切片滴中性树胶后，加盖玻片封片。,有助于保存运输,谢谢观赏,