1、单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,WB的失败图分析,1,、目的条带啥也没有,原因,：只重复做没有思考。这次目的条带和内参的二抗种属是不同的。,网上查阅经验,：一点没有，甚至连内参都没有，可能抗体加错了，转膜问题甚至膜放反；,条带细微接近没有，上样量少，一抗浓度低，显色液失效,.,解决办法,：实验前,检查抗体种属,是否加错，确认,转膜没有问题,。,20150825_,重复做,CST1,只有点内参,20150826_CST1,重做,2,、高背景,20150814,_JNk,高效价第一次,.bmp,原因,：封闭不够好，洗膜不充充分，抗体浓度特别是二
2、抗过高。,网上查阅经验,：奶粉封闭时间够，注意操作规范，不偷工减料洗膜,实际解决方法,：奶粉,封闭时间延长,了半个小时，,对于这种剪小后的片，,用小洗涤盒洗，总之保证其洗膜充分,20150816,_JNK,高效价第二次,.bmp,3,、出现许多黑点和斑,原因,：膜上其他部位与一抗或者二抗非特异性结合。,网上查阅经验,：不要封闭时才去匆忙配奶粉，,要确保奶粉完全溶解,否则不溶颗粒附着膜上。,溶解后静止，轻吸上层牛奶封闭,，封闭结束，三次洗膜彻底,201507,内参略成功,.bmp,20150829sirt3,失败品,4,、条带拖尾,可能原因,：蛋白量太大，一抗浓度和时间太长,;,个人猜测，跑胶的
3、问题,解决办法,：调整蛋白量，同时一抗浓度缩小和孵育时间缩短,201508-HSF-LXF.jpg,5,、出现非均一性背景,原因,：,膜可能干过！,解决办法,：确保蛋白面不要被风干很长时间，一定要,用不漏水的封闭盒并盖上盖子,，防止过夜,16,个小时液体流失。,Gapdh.jpg,6,、条带中出现规则白圈,原因,：,转膜出现气泡！,网络经验：,放膜时候，使膜,U,型放，两边下压；,盖海绵前，确定气泡除尽，盖后放置动作要小幅轻微，防止产生不必要的气泡。,7,、最边缘条带弯曲,原因,：电泳电流不均,解决办法,：尽量不使用两边的两孔,BNP+Gapdh.jpg,8,、其他电泳过程出现的问题现象,（1
4、整个条带呈“”状：凝胶冷却不均一，电泳槽老化。,（2）整个条带呈“”：凝胶左右两头没有凝固好,（3）溴酚蓝拖尾：样品溶解不好。,（4）纵向的纹理：上样样品中存在不溶性颗粒,（5）溴酚蓝很粗：浓缩胶浓缩效果不好，可能是浓缩胶太短，或者是浓缩胶配错。,（6）在分离胶中跑不动：Tris-Cl PH值不对，或者忘记加SDS。,8,、配胶问题导致的失败,条带变形,原因,：胶体中存在气泡，或不溶性杂质，胶不均不平整,解决办法,：配胶的小烧杯，水，,SDS,，,tris,等等干净无杂质。贴边角加入液体，凝固时间避免大幅度动作触碰。,9,、配胶问题导致的失败,条带哑铃状,原因：配胶问题，可能是插或拔梳子引起
5、的凹凸不平整；,还有可能，样品含较多杂质杂质沉积空中间,.,10,、其他,（1）蛋白分子量偏高或者偏低。,可能是胶的浓度与目的蛋白的浓度不对应，比如说100KD的蛋白你用12%的胶跑，或者说20KD的蛋白你用6%的胶跑。,（2）蛋白质降解。,蛋白质降解后很可能会在比原来位置低的地方出现主带，然后会出现一些其他带，最主要特点是所有的条带比正常的都低，并且条带模糊不清晰。,（3）所有条带连成一片没有间隔。,原因最可能是上样量过多，其次是样品弥散（比如电泳长时间停止样品弥散）。,(4).,201507,月内参,Gapdh,烧伤组,THANKS,总结,杜绝实验盲目重复,认真总结分析错误,好好学习实验原理！,
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