实验诊断--一院实验诊断-第二章第二节溶血性贫血的实验室检查(医学PPT课件).ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,第二章,第二节 溶血性贫血的实验室检测,溶血性贫血的定义及分类,【,定义,】,由于红细胞内在或外在原因导致红细胞,生存时间缩短、破坏增多或加速，骨髓造血功能不,能代偿而发生的贫血。,若骨髓造血功能能够代偿称为,溶血性疾病,。,免疫性、阵发性睡眠型血红蛋白尿症、机械性物理性、化学性、生物性、脾功能亢进、微血管血性贫血。,红细胞膜缺陷病、先天性红细胞酶缺陷病、血红蛋白异常病、卟啉代谢异常病。,红细胞外在异常,（获得性溶血性贫血）,红细胞内在异常,（遗传性溶血性贫血）,按病因分类,溶贫的定义及病因分类？,病因,主要疾病,红细胞膜缺陷,遗传性球形红细胞增多症,红细胞酶缺陷,丙酮酸激酶缺乏症、,G-6PD,血红蛋白病,地中海贫血,红细胞内在缺陷（遗传性溶血性贫血）,病因,主要疾病,免疫因素,自身免疫性溶血性贫血,物理因素,阵发性睡眠性血红蛋白尿,化学损伤,砷化物、硝苯基中毒等,感染因素,溶血性链球菌感染等,其他,脾亢,红细胞外在因素（获得性溶血性贫血）,溶贫的初步判断,1,、血象：,正细胞正色素性贫血；,WBC,、,PLT,多正常；,外周血易见幼红细胞、,Howell-Jolly,氏小体、,嗜多色红细胞及膜缺陷所致形态异常。,2,、骨髓有核细胞增生明显活跃，红系,50%,，,以中晚幼红为主；粒系、巨核系正常粒红比减低。,3,、网织红细胞计数增多，多,3%,（,10010,9,/L,）。,一、溶血性贫血的筛查试验,（,一）血浆游离血红蛋白测定（,FHb,）,【参考,区间,】,50mg/L,（,1-5mg/dl,）,【临床意义】,FHb,是,血管内溶血的指征，,血型不合,FHb,最为明显，也可见于,G6PD,、蚕豆病、,PNH,、,PCH,、,AIHA,等。,（二）,血清结合珠蛋白测定（,Hp,）,【参考,区间,】,0.71.5,g/L,（,70150mg/dl,）,【临床意义】,Hp:,各种溶血性贫血、肝内阻塞性黄疸,、,传染性 单核细胞增多症、先天性无结合珠蛋白血症等。,Hp:,肝外阻塞性黄疸、急慢性感染、结核病、风湿或类风湿性关节炎、淋巴瘤、,SLE,、应用糖皮质激素。,Hp,由肝细胞合成,的,2,糖蛋白，,作用,是,运输血管内游离的血红蛋白至网状内皮系统降解,。,（三）血浆高铁血红素白蛋白试验,【参考,区间,】,阴性,【临床意义】,鉴别血管内或血管外溶血，阳性见于各种原因所致的严重血管内溶血。,原理,血红蛋白高铁血红蛋白高铁血红素高铁,血红素白蛋白,（四）尿含铁血黄素试验,【参考,区间,】,阴性,【临床意义】,用于,诊断,慢性血管内溶血,阳性主要见于,PNH,。,血红蛋白在肾小管上皮细胞中代谢产生含铁血红,素，,随,细胞脱落至尿中时，用铁染色法呈镜下蓝色颗,粒。,（五）红细胞寿命测定,用,51,Cr,标记红细胞，检测红细胞半衰期,【参考,区间,】,正常红细胞半衰期,2532,天,【临床意义】,溶贫时红细胞半衰期,肾阈值,与珠蛋白结合后被运输到肝脏分解,一部分,Hb,转变为高铁,Hb,白蛋白,Hb,被肾小管上皮细胞重吸收，,在细胞内代谢成含铁血黄素,Hb,6.血红蛋白尿,5.高铁血红素白蛋白,3.血清结合珠蛋白测定,2.血浆游离Hb测定,4.尿含铁血黄素试验,含铁血黄素,随细胞脱落至尿中，铁染色（）,红细胞生成,7.,51,Cr标记红细胞寿命测定,1.血象及骨髓象,血象：RBC减少，Hb减少，Ret增高,骨髓象：骨髓增生明显活跃，红系增多，粒和巨核系大致正常，粒红比减低。,红细胞破坏,常用的溶贫筛查试验,二、红细胞膜缺陷的检测,红细胞孵育渗透脆性试验,红细胞膜聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,膜缺陷,病的基,因检测,红细胞渗透脆性试验,自身溶血试验及纠正试验,【原理】,红细胞置于等渗盐水中，膜不破坏。红细胞置于不同浓度NaCl溶液中，水分通过细胞膜进入细胞内，红细胞膨胀至破裂而溶血。红细胞膜对不同浓度低渗溶液抵抗力不同，破坏程度不同。,1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14,0.50 0.48,0.46,0.44,0.42,0.40,0.38,0.36,0.34,0.32,0.30,0.28,0.26,0.24,NaCl,浓度,试管号,（一）红细胞渗透脆性试验,(,erythrocyte osmotic fragility test,),【参考,区间,】,开始溶血 0.420.46（4.24.6g/L）NaCl溶液，,完全溶血 0.280.34（2.83.4g/L）NaCl溶液。,【临床意义】,渗透脆性试验并非遗传性红细胞膜缺陷的特异性诊断试验。,（1）红细胞对低渗盐水抵抗力降低,渗透脆性增高，如遗传球。,（2）红细胞对低渗盐水抵抗力增强,渗透脆性减低，如IDA。,简述红细胞渗透脆性试验检测原理及临床意义？,【参考,区间,】,未孵育：,50%,溶血,4.04.45gNacl/L,；,37,孵育,24h,：,50%,溶血为,4.655.9gNacl/L,。,红细胞孵育过程中，葡萄糖的消耗增加，而使,贮备的,ATP,减少，导致需要能量的红细胞膜对阳性,离子的主动传递受阻，造成钠离子在红细胞内集聚，,细胞膨胀，孵育渗透脆性增加,。,（二）,红细胞孵育渗透脆性试验,【原理】,【临床意义】,用于轻型遗传性球形细胞增多症、遗传性非球形细胞溶血性贫血的诊断和鉴别诊断。,：见于遗传性球形红细胞增多症、遗传性椭圆形细胞增多症,、,遗传性非球形细胞溶血性贫血。,：见于地中海贫血、缺铁性贫血、镰形细胞贫血、脾切除术后。,（三）自身溶血试验及纠正试验,【原理】,红细胞内酶缺陷，糖酵解障碍，不能提供足,量,ATP,以维持红细胞内钠泵作用。患者红细胞无菌条件下在自身血浆中孵育,48,小时，使,ATP,储备减少，钠泵作用减弱，导致溶血增强。,在孵育过程中，分别加入葡萄糖和,ATP,，以,NACL,溶液为对照，观察溶血能否被纠正。,【,参考值,】,正常人孵育,48,小时溶血度,3.5%,加入葡萄糖、,ATP,均明显纠正，溶血度,1.0%,。,【,临床意义,】,疾病类型,自身溶血,加葡萄糖,加,ATP,遗传球,明显增强,纠正,纠正,G-6PD,明显增强,部分纠正,部分纠正,丙酮酸激酶缺乏症,明显增强,不纠正,纠正,【参考,区间,】,高铁血红蛋白还原率,75%,；高铁血红蛋白,0.31.3g/L,【临床意义】,：见于蚕豆病和伯氨喹啉型药物溶血性贫,当,G6PD,含量正常时，有足量的还原型辅酶,（,NADPH),存在，反应液中的高铁血红蛋白（棕色）能被高铁血红蛋白还原酶还原成亚铁血红蛋白（红色）。,当,G6PD,含量缺乏时，,还原速度减慢甚至不能还原仍呈棕色。,（一）高铁血红蛋白还原试验,三、红细胞酶缺陷的检测,（二）变性珠蛋白小体生成试验,变性珠蛋白小体,是血红蛋白经氧化,变性后，变性产物,沉淀析出并结合于,红细胞膜而形成的,圆形小体，反应血,红蛋白具变性性和,不稳定性。又称血红蛋白包涵体。,【参考,区间,】,有折光、圆形、紫色小体，直径5个Heinz小体的细胞为阳性细胞，,正常人Heinz小体阳性细胞028%，正常与异常的界值定为33%。,【临床意义】,（,1,）血红蛋白病：不稳定血红蛋白病显增多,（,2,）红细胞酶病：,G6PD,谷胱甘肽,（,GSH,）代谢酶异常,上述疾病Heinz小体阳性细胞,常,45%,（三）,G6PD,荧光斑点试验和活性测定,【原理】,还原型辅,(NADPH),在长波紫外线的照射下显示荧光，而氧化型辅酶,(NADP),则无此作用。当,G6PD,含量减少时，没有足量的还原型辅酶,（,NADPH),存在，荧光减弱,。,【参考,区间,】,正常人,37,、,10,分钟出现荧光斑点。,酶活性,4.97,1.43U/gHb,【临床意义】,G6PD,缺陷患者纯合子,10,分钟不出现荧光,杂合子,10-30,分钟出现微弱荧光,（四）丙酮酸激酶荧光筛选试验和活性测定,【,原理,】,烯醇式磷酸丙酮酸 丙酮酸 乳酸,【,参考区间,】,正常人,PK,荧光检测,20,分钟内消失；,酶活性,15.14.99,U/gHb,【,临床意义,】,PK,缺乏纯合子荧光,60,分钟不消失；杂合子,2560,分钟消失。,丙酮酸激酶,ADP,乳酸脱氢酶,NADH,*,NAD,四、血红蛋白异常的检测,血红蛋白病是由于血红蛋白的合成障碍或由于血红蛋白结构异常而引起的两类溶血性贫血，前者也称珠蛋白障碍性贫血（地中海贫血），后者也称异常血红蛋白病。,（一）血红蛋白电泳,（二）胎儿血红蛋白（HbF）测定,（三）限制性内切酶谱分析基因检测）,不同,Hb,分子的等电点和带电荷不同，在电场作用下因电荷差异和分子量差异而表现为不同的迁移率，由此可将不同的,Hb,区分开来，并可检出异常,Hb,电泳区带，进行定性或定量分析。通常采用,pH8.5,醋酸薄膜电泳，由于,Hb,等电点小于缓冲液的,pH,，蛋白质带负电荷，电泳时向阳极移动。,（一）血红蛋白醋酸纤维膜电泳,【参考,区间,】,正常人电泳图谱显示四条区带：,HbA,、,HbF,、,HbA,2,和非,Hb,（,NHb,）区带。,【临床意义】,本试验是诊断血红蛋白病最常用和最重要的试验。,HbA,2,：是诊断,-轻型地中海贫血的重要依据,。,HbA,2,：见于缺铁性贫血及铁粒幼细胞贫血。,【临床意义】,脐带血、新生儿、婴儿阳性，成人小于1%。,地中海贫血患者轻型者呈阳性红细胞较少，重型者阳性红细胞明显增多。,【原理】,HbF抗酸能力强，在酸性缓冲液中保湿一定时间，只有含HbF的红细胞不被洗脱，再用伊红染色呈,鲜红色,。,（二）胎儿血红蛋白（HbF）测定,1.胎儿血红蛋白酸洗脱试验,【参考,区间,】,成人2%，新生儿55%,85%，1岁左右同成人。,【临床意义】,明显,见于-地中海贫血,轻度,见于急性白血病、AA、红白血病、淋巴瘤,【原理】,在碱性溶液中HbF不易变性沉淀，其他Hb在碱性溶液中可变性被沉淀，测定上清液中,Hb,含量，即是,HbF,含量。,2.胎儿血红蛋白测定或HbF碱变性试验,检测红细胞膜异常、酶异常、血红蛋白异,常的实验诊断项目有哪些，各写一个项目名称及临床意义?,五、自身免疫性溶血性贫血,1,针对不完全抗体的抗球蛋白试验，可诊断自身免疫性溶血性贫血（,AIHA,),。,2,针对自身完全抗体的冷凝集实验，诊断冷凝集素综合症。,3,针对冷热双相溶血素的冷热双相溶血试验，可以诊断阵发性冷性血红蛋白尿症。,自身免疫性溶血性贫血系体内免疫异常进而产生自身抗体或补体，结合在红细胞膜上，加速红细胞破坏引起的溶血性贫血。主要有三项定性或定量的实验检测：,（一）抗人球蛋白试验（,Coombs,试验）,【原理】,患者,RBC,与多个不完全抗体的,Fc,段结合,RBC,凝集现象,正常人,RBC,抗人球蛋白直接反应,(+),抗人球蛋白间接反应,(,),抗人球蛋,白,致敏,RBC,血清中不完全抗体（,IgG,、,IgM,、,IgA,、,C3,）,直接Coombs试验：检测红细胞表面有无不完全抗体。,间接Coombs试验：检测血清中有无不完全抗体。,【参考,区间,】,健康人阴性,【临床意义】,直接反应,(+),：,AIHA,、,SLE,、类风湿关节炎、恶,性淋巴瘤、不合血型输血、新生,儿溶血病等。,间接反应,(+),：用于,Rh,或,ABO,妊娠免疫性新生儿,溶血病母体血清中不完全抗体的,检测。,简述抗人球蛋白试验检测原理及临床意义？,（二）冷凝集试验参考,区间,】,效价,10%,为阳性,【临床意义】,阳性见于,PNH,、部分巨幼贫、再障、,AIHA,等,此实验为,PNH,筛查试验,【原理】,蔗糖溶液离子浓度小，经孵育可以增强补体与红,细胞膜的结合，使,PNH,患者对补体敏感的红细胞膜上,形成小孔，促使蔗糖进入红细胞而导致溶血,。,（二）酸溶血试验（,Ham,试验）,【参考,区间,】,阴性,【参考,区间,】,阳性见于,PNH,、某些,AIHA,。,此实验为,PNH,常用实验,【原理】,PNH,患者的红细胞膜蛋白缺陷，,缺乏一组膜蛋白，,这些膜蛋白通过糖肌醇磷脂（,GPI,）连接在膜上统称为,GPI,连接蛋白,，属于补体调节蛋白。,PNH,时,RBC,膜缺少,GPI,连接蛋白,，对补体敏感，,在酸化的正常血清中,（,PH6.6-6.8,），经,37,孵育，易破坏溶血,。,简述酸溶血试验检测原理及临床意义？,（三）蛇毒因子溶血试验,【参考,区间,】,溶血度,5%,此实验为,PNH,特异性试验,【原理】,从眼镜蛇毒中纯化提取一种溶血因子，是分子量,14000,的蛋白质，能直接激活血清中的补体,C3,通过旁,路途径激活补体系统，,PNH,患者红细胞破坏造成溶血。,THE END!,