医学精子活率密度畸形率.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,精子活率密度畸形率,实验目的,通过实验，了解精子的运动方式；识别正常精子和异常精子的形态。初步学会和掌握精液密度、精子的活率、畸形率和精液酸碱度（,PH,）的测定方法。熟悉肉眼检查精液品质的方法。,实验材料,家畜精液、载玻片、凹灶玻片、盖玻片、球棒、医用中性石腊油、,75%,酒精棉球、酒精灯、伊红染液、纱布、棉花、火柴、,PH,比色器、,PH,试纸、烧杯、显微镜、保温箱。,方法步骤,一、精液的肉眼检查,（一）射精量,(,ml,),概念:射精量是指每次射精的体积,测定:以连续3次以上正常采集到的精液的平均值代表,测定方法:,将采得的精液倒入有刻度的试管或杯中，测其容量,。,各种家畜的平均射精量为：,奶牛：,5-10,；肉牛：,4-8,；绵羊：,0.8-1.2,；猪：,150-500,；山羊：,0.5-1.5,；马：,30-100,射精量不正常的原因,现 象,原 因,过 少,采精过频、性机能衰退、睾丸炎、发育不良,过 多,副性腺发炎、假阴道漏水、尿潴留、采精操作不熟练,（二）观察精液的颜色并嗅闻气味,观察精液的色泽并嗅闻气味。,一般为,乳白色或灰白色,。正常牛羊精液呈乳白色或乳黄色，猪、马的精液呈淡乳白色或浅灰白色,。,正常精液具有一种特有的腥臭味，该气味由前列腺产生。是由一种称为精氨的化学物质经过氧化以后散发出来的，很像栗子花的味道。精氨是前列腺分泌物所含的多种成分之一。,腥味：有脓液,臊味：有尿液或包皮液,不正常精液,颜色,原因分析,正常精液特征,依从浓到稀：乳黄-乳白-白色-灰白,淡红（鲜红）,生殖道下段出血或龟头出血,淡红（暗红）,副性腺或生殖道出血,绿,副性腺或尿生殖道化脓,褐,混有尿液,(,三,),云雾状,是指新鲜精液在33-35 温度下，精子成群运动所产生的上下翻卷的现象。,云雾状的明显程度代表高浓度的精液中精子活力的高低。,云雾状分级标准,+翻明显而且较快,+翻明显但较慢,+仔细看才能看到精液的移动,-无精液移动,二、,精子活率测定,精子活率,：,在显微镜下观察，在一个视野内向直线前进运动的精子占全部精子总数的百分率。,一般在,37-38C,温度下进行评定，牛、羊精液尚需用生理盐水作稀释后才能评定。活力一般用,0-1.0,的,10,级评分，一般新鲜采精液活率应该为,0.70.8,左右。,测定精子活率的方法很多，有活精子计算法，死活精子染色法和目测法。目测法因使用的材料和工具不同，又可分为平板压片法、悬滴检查法和油盖检查法三种。,1,、平板压片法,（,1,）,取高温消过毒的,载玻片、盖玻片、玻棒,若干,备用。,（,2,）滴一滴精液（如太浓，可先用生理盐水稀释）于消毒过的载玻片上，盖上消毒过的干净盖玻片。,（,3,）将制好的片子放在显微镜载物台上，先用低倍镜观察，后用高倍镜（,400,600,倍）观察（如气温低，须将显微镜置于保温箱内升温到,37,后，再进行镜检）。,2,、悬滴检查法,（,1,）滴一小滴精液于消毒好的盖玻片中央。,（,2,）在凹灶处周围涂上少量水，然后将凹处对准盖玻片上的精液，并覆盖于盖玻片上，使其贴在一起。,（,3,）将玻片倒转过来，使精液滴悬挂于盖玻片下，便可放在显微镜下观察。,3,、油盖检查法,（,1,）滴一滴精液于消毒过的载玻片上。,（,2,）在精液上面滴一滴医用中性石腊油即可放在显微镜下观察。,4,、活率的评定,（,1,）在显微镜下观察精子的运动方式，并区别直线前进式运动、旋转式运动和摆动式运动的精子活动的情况。,（,2根据视野中呈直线前进式运动的精子所占比例进行测定。如全部精子均呈直线前进式运动，看不到非直线前进式运动的精子，可评为“,1.0,”分；如果视野中只有,80,的精子呈直线前进式运动，其余,20%,呈非直线前进式运动，则评为“,0.8,”分，其余依此类推。测定时要求多看几个视野，然后进行综合评定。在一个视野中，如果呈前进式运动的精子占多数，则重点估测非前进式运动的精子所占比例，反之则估测前进式运动的精子所占比例。,三、精子密度检查,测定精液密度的方法有估测法，红细胞计数法和光电比色法。其中估测法通常结合精子活率进行检查，一般用测定活率的平板压片法进行。,取一小滴精液于清洁的载玻片上，加上盖玻片使精液分散成均匀一薄层，但不得有气泡，也不能使精液外流或溢于盖玻片上，置显微镜下放大,400,600,倍观察，按下列等级评定其密度（如图,2-1,）。,图,2-1,稀,中,密,1,、稀：精子分散存在，精子间的空隙超过一个精子长度，这种精液一般每毫升所含精子在,2,亿以下。,2,、中：精子之间的空隙明显，精子彼此之间距离约有一个精子的长度。有些精子的活动情况可以清楚地看到。这种精液的密度评为,“,中,”,，一般每毫升所含精子数约在,2,10,亿之间。,3,、密：在整个视野中精子密度很大，彼此间空隙很小，看不清各个精子运动的活动情况，这一级属于,“,密,”,，一般每毫升含精子数约在,10,亿以上畜种,牛,羊,猪,马,鸡,密度 亿,/ml,8-12,20-30,2-3,1.5-3,30-50,各种家畜精液的精子密度,四、精液,PH,的测定,1,、比色试纸法,（,1,）取一滴精液于清洗干净的凹玻片上，然后用一小张精密试纸（,6.5,8.0,）放于精液滴上。,（,2,）让精液渗湿试纸后即在精密试纸比色图上比色，并记录结果。,五,、,精子畸形率的检查,精子畸形率：是指畸形精子占视野中总精子数的百分率。,精子畸形分为四类：,头部畸形：头部巨大、瘦小、细长、缺损、双头、皱缩等。,颈部畸形：颈部膨胀大、纤细、曲折、双颈等。,中段畸形：膨大、纤细、带有原生质滴等。,主段畸形：弯曲、曲折、回旋、双尾等。,精子畸形率猪不超过18%，羊不超过14%，马不超过12%。如果畸形率超过20%，则视为精液品质不良，不能用做输精。,1,、滴一小滴精液于消毒过的载玻片一端。,2,、用另一块边缘光滑的玻片（最好为凹灶玻片）的一端斜抵于精液前成,35,角，使凹灶玻片底面与精液接触，并向两旁散开后，即向载玻片的另一端轻快推去，使精液均匀地涂于载玻片上。,3,、让抹片风干后，先在显微镜下观察所抹片子如何，如理想，则可染色；否则，洗去重做。,4,、在风干的抹片上滴上,2,3,滴,5%,伊红染液，并用玻棒稍为推开。染色,3,5min,，然后轻轻用水洗去多余的染料，候干镜检。,也可以用下列方法固定染色。（,1,）用0.5%,的龙胆紫酒精染色,3min,，水洗，待干后即可镜检（也可用由普通红蓝墨水代替）。（,2,）置,95%,酒精中（或,5%,福尔马林溶液）固定,5,6min,，取出以水冲洗后，凉干或烘干，用蓝、红墨水等染色,3,5min,，再用水冲洗，干燥后置于显微镜下检查。,5,、镜检：在任意若干个视野中计算,200,个精子中有多少个畸形精子（注意区别正常精子和头、颈、中段部以及尾部畸形的精子）。并记载于表中。（见图,2-3,）,6,、计算精子的畸形率：,精子畸形率,=,畸形精子数,/,（正常精子数畸形精子数）,100%,左图为正常精子（左下为原生质小滴），右图为各种畸形精子,作业,1,、列表记载本次实验所得的精液密度、精子的活率及精液,PH,数值。,2,、将精子畸形率的检查结果详细记入下列表格中。,在检查精子活率时，为了获得比较准确的结果，你认为应注意哪些事项？,项目,正常精子,畸形精子,总观察数,畸形率,（,%,）,头部,颈部,中段,尾部,总计,观察数,总计,