中国ALK阳性NSCLC诊断专家共识V14.ppt

Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,Click to edit Master title style,*,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,Click to edit Master title style,*,*,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,Click to edit Master title style,中国,ALK,融合基因阳性非小细胞肺癌诊断共识,2013 V1.0,（草稿）,中国,ALK,融合基因阳性非小细胞肺癌诊断共识,目的：,提高我国,ALK,融合基因型肺癌的个体化精准治疗能力,（,precision therapy,）,非小细胞肺癌的个体化靶向治疗：,伴随分子诊断是前提,虽然,ALK,融合基因阳性患者仅占,NSCLC,的,5%,，但是,总体患者负荷较大，治疗需求迫切,ALK,融合基因阳性,NSCLC,具有独特临床,&,病理、治疗和预后特征，,已成为,NSCLC,中的一个分子亚型,第一个,ALK,抑制剂克唑替尼已获得,SFDA,的批准（,2013.01,）,ALK prevalence in China,Author,ALK incidence,Publications,Zhang X,Wu YL et al.,11.6%(12/103),Mol Cancer 2009,Wong,et al.(Hongkong),4.9%(13/265),Cancer 2009,Li H,Chen HQ,et al.,3.0%(7/230 smokers,AC),Lung Cancer 2012,Sun Y,Chen H,Ji H,et al.,5.8%(3/52 surgical AC,non-smokers),JCO 2010,Wu SG,Yang PC,et al.(Taiwan),34%(39/116,AC,WT EGFR),JTO 2012,Rikova K,et al,4.7%(6/137),Cell 2007,Wang Z,Wang J,et al.,9.7%(11/113,Stage IV),Oncology 2012,Ren S,Zhou C,et al.,9.6%(10/104,Female,AC,non-smoker),Cell Biochem Biophys.2012;Cancer 2012,GLCI internal data:7%(70/977);7.7%(31/400),中国,ALK,融合基因阳性非小细胞肺癌诊断共识,总体原则,综合肺癌获取的各类生物材料的特征、分子分析方法的特点、实验室自身条件，需要多学科大协作，合理采取有效检测方法和流程，,以保证,ALK,融合型肺癌的,检出率和准确率,从临床诊断角度出发，综合最新的研究数据，并结合,SFDA,批准的伴随诊断方法，,定期更新,，保证检测结果的,可信性,和临床实际,可操作性,ALK+target population,ALK+can be enriched in clinical factors:age,histology,smoking status,ALK+can be enriched in molecular subtypes:EGFRwt,KRASwt,and AC,30%in Caucasian pts(AC,EGFR wt and KRAS wt),42%in Chinese mailand pts(AC,EGFR wt and KRAS wt),34%in Taiwanese pts(AC EGFRwt),ALK+concomitant with EGFR mutations:,GLCI data:1.3%(13/977)overally;in EGFR mut pts,3.9%(13/336)co-alteration rate;in ALK+pts18.6%(13/70)co-alteration rate,EURTAC data(2012 ESMO by Rosell):in EGFRmut pts,15.8%(15/95)co-alteration rate,GLCI internal data;,Rosell,ESMO 2012;,Horn,JCO 2011,中国,ALK,阳性非小细胞肺癌诊断流程图,NSCLC,活检组织标本,EGFR,突变检测,腺癌（粘液性或实性，,signet cell,？）,阴性或,unknown,下一步,ALK,分离探针,FISH,原理,3-ALK,探针杂交端粒的断点大约是,300 KB,，并用橘色荧光标示。,5-ALK,探针杂交着丝粒的断点大约是,442 kb,，并用绿色荧光标示。,Vysis ALK Break Apart FISH Probe Kit.06N38-020,30-608495/R2,FISH,诊断,橘红色与绿色探针相互临近或粘合：,ALK,阴性,橘红色与绿色探针相互分离或,单个橘红色探针：,ALK,阳性,FISH,检测的局限性,结果判读需标准化，必需经过培训的病理科医师进行判读,晚期患者小活检标本,(2mm),，很难保证每个视野存在,50,个癌细胞,价格昂贵，,2600,元左右,/,例，无法适用于筛选,FISH,检测的优势,目前，临床研究的结果均是以,FISH,为检测手段,False positivity vs false negativity.,Split-signal FISH:,Fusion-signal FISH:,Translocation-positive,Translocation-negative,False-positive,False-negative,Microscope:,Sample/nucleus:,Slide:,ALK FISH interpretaion criteria:15%split signals,at least 50 tumor cells were analyzed,if the result is equivocal,additional 50 tumor cells should be counted.,Positive cells:,separated green and orange signals or single red signals,identified cells with rearranged ALK;,Negative cells:overlapping of orange and green signals(yellowish)indicated cells in which ALK was not,rearranged.,Martelli MP,Sozzi G,Hernandez L,et al.EML4-ALK rearrangement in non-small cell lung cancer and non-tumor lung tissues.Am J Pathol.2009 Feb;174(2):661-70,Shaw AT,Yeap BY,Mino-Kenudson M,et al.Clinical features and outcome of patients with non-small-cell lung cancer who harbor,EML4-ALK.J Clin Oncol 2009;27:424753.,The assay should be only on 10%neutral buffered FFPE human lung tumor tissue.Other types of specimens or fixatives should not be used.,Cancer,2012,Crizotinib,临床疗效与,ALK+,无关,:,ALK+%,分离率并非疗效就更好,ALK+%,分离率低并非疗效不好,A Dramatic Response to Crizotinib in a NonSmall-Cell Lung Cancer Patient with IHC-Positive and FISH-Negative ALK,Sun,Jong-Mu,et al.Journal of Thoracic Oncology.7(12):e36-e38,中国,ALK,阳性非小细胞肺癌诊断流程图,NSCLC,活检组织标本,EGFR,突变检测,腺癌（粘液性或实性，,signet cell,？）,阴性或,unknown,据组织类型选择合适技术,新鲜标本,石蜡标本,Ventana IHC,手动,IHC,检测*,？,阳性,阴性,FISH,RT-PCR,多重,PCR,或,RACE,*:,对于部分无条件行,Ventana IHC,检测的中心，手动,ALK IHC,可作为替代的筛选方法,:,如果是细胞学样本，推荐使用,RT-PCR,检测,虚线：建议在富集人群（粘液性腺癌、含印戒细胞成分、不吸烟、年龄,60,岁）中进行筛选,3+/2+/1+,ALK,融合基因阳性非小细胞肺癌,在,ALK,融合阴性的患者，免疫组化显示无,ALK,表达。,RT-PCR,FISH,：进行,Vysis LSI ALK,双色打散,FISH,探针检测到,ALK,融合（分裂的红色和绿色信号）。,dx.doi.org/10.1155/2013/757490,对,AmoyDx EML4-ALK,融合基因检测，实时,RT-PCR,显示,delta Rn,对,PCR,循环数的变化。,在,ALK,融合阳性的患者，免疫组化显示,ALK,表达。,RT-PCR,临床检测数据：腺癌发生率,7.7%,Characteristics,EML4-ALK,Mutation,N(%),Wild type,N(%),P,Age,years,60,60,9(3.6),19(7.9),240(96.4),220(92.1),0.040,Sex,Male,Female,9(3.1),19(9.8),286(96.9),174(90.2),0.002,Stage,IA,IB,IIA,IIB,IIIA,IIIB,IV,12(9.0),4(2.9),2(33.3),1(2.3),9(5.5),0,0,122(91.0),132(97.1),4(66.7),42(97.7),156(94.5),1,3,0.036,b,Histopathology,AD,SCC,AD-SCCe,Others,25(7.2),2(2.0),1(5.6),0,324(92.8),99(98.0),17(94.4),20,0.053,d,Differentiation,Poor,Good,Unidentified,8(6.3),17(5.0),3(12.5),119(93.7),320(95.0),21(87.5),0.594,Smoking status,No,Yes,Unknown,21(8.2),4(2.6),3(4.0),236(91.8),152(97.4),72(96.0),0021,f,Probaility of disease-free survival,1.0,0.8,0.6,0.4,0.2,0.0,6.0,18.0,12.0,24.0,Time(months),Logrank,P=0.006,ALK positive,ALK negative,J.X.Zhou,，,et al.Annals of Oncology 00:17,2012 doi:10.1093/annonc/mds626,多重,RT-PCR,测序,EML4-ALK,变异体的多种引物，,GAPDH,作为对照,GLCI,内部数据：所有,12,个,ALK,融合阳性样品均通过多路,RT-PCR,测序技术得以证实。,RACE-PCR,Takeuchi et al.Multiplex Reverse Transcription-PCR Screening for EML4-ALK Fusion Transcripts.Clin Cancer Res 2008;14(20):6618,Zhang et al.Molecular cancer 2010,融合序列捕获的确定性,XC Zhang,，,YL Wu,et al.2012 ESMO,，,中国,ALK,阳性非小细胞肺癌诊断流程图,NSCLC,活检组织标本,EGFR,突变检测,腺癌（粘液性或实性，,signet cell,？）,阴性或,unknown,据组织类型选择合适技术,新鲜标本,石蜡标本,Ventana IHC,手动,IHC,检测*,？,阳性,阴性,FISH,RT-PCR,多重,PCR,或,RACE,*:,对于部分无条件行,Ventana IHC,检测的中心，手动,ALK IHC,可作为替代的筛选方法,:,如果是细胞学样本，推荐使用,RT-PCR,检测,虚线：建议在富集人群（粘液性腺癌、含印戒细胞成分、不吸烟、年龄,5%,的肿瘤细胞呈现颗粒状细胞质强着色；,IHC 2+,：,5%,的肿瘤细胞呈现中度细胞质着色；,IHC 1+,：,5%,的肿瘤细胞呈现微弱或模糊的细胞质着色或,5%,的肿瘤细胞有任何程度的着色；,IHC 0,：肿瘤细胞无着色。,”,E Thunissen,et al.Virchows Arch(2012)461:245-257,日本肺癌协会,ALK,诊断共识,Yoshiko Murakami,et al.Frontiers in Oncology,.,2012;doi:10.3389/fonc.2012.00024,欧洲,11,家中心病理科,ALK,诊断共识,Thunnissen E,et al.Virchows Arch.2012;461:245257,中国,ALK,阳性非小细胞肺癌诊断流程图,NSCLC,活检组织标本,EGFR,突变检测,腺癌（粘液性或实性，,signet cell,？）,阴性或unknown,据组织类型选择合适技术,新鲜标本,石蜡标本,Ventana IHC,手动,IHC,检测*,？,阳性,阴性,FISH,RT-PCR,多重,PCR,或,RACE,*:,对于部分无条件行,Ventana IHC,检测的中心，手动,ALK IHC,可作为替代的筛选方法,:,如果是细胞学样本，推荐使用,RT-PCR,检测,虚线：建议在富集人群（粘液性腺癌、含印戒细胞成分、不吸烟、年龄,60,岁）中进行筛选,3+/2+/1+,ALK,融合基因阳性非小细胞肺癌,Ventana IHC,试剂设计,ALK,融合蛋白,:,无,ALK,重排的,NSCLC,不表达,ALK,融合蛋白,部分,ALK,融合蛋白表达较低,Ventana IHC,的原理,:,使用具有高度敏感性和特异性的一抗,D5F3,全自动仪操作，充分保证特异性,独有,Optiview,扩增技术，充分保证敏感性,D5F3 rabbitt monoclonal antibody,Optiview DAB IHC Detection,Optiview Amplification Kit,FISH,阳性标本使用,IHC,检测,全自动,Ventana IHC,：信号扩增,常规,IHC,：无信号扩增,D5F3 rabbit mAb,Control rabbit mAb,ALK-positive NSCLC by Vysis FISH and Ventana ALK IHC,ALK(+),病例,ALK(+),病例,D5F3 rabbit mAb,Control rabbit mAb,ALK-positive NSCLC by Vysis FISH and Ventana ALK IHC,D5F3 rabbit mAb,Control rabbit mAb,Large majority of positive cases exhibit strong staining.,全自动,Ventana IHC,判读标准简单，仅存在阴性,or,阳性的判读,IHC,阳性,=FISH,阳性,EC Minca,et al.J Mol Diag,2013,Ventana IHC,：判读标准简单客观,VENTANA.1011623EN Rev C.2012;FT0700-410f,临床解释,染色说明,ALK,阳性,肿瘤细胞细胞质中存在强颗粒状染色（任何阳性肿瘤细胞的百分比），,已知的假阳性染色要排除，包括：,光镜下肺泡巨噬细胞胞质内斑点,神经源性细胞（神经和神经节细胞）,腺上皮细胞染色,腺上皮细胞胞内淋巴侵润,NSCLC,患者的正常粘膜组织和坏死肿瘤组织有时也能见到染色颗粒（包括粘液素），这些都应该排除在外,ALK,阴性,肿瘤细胞细胞质中无强颗粒状染色,IHC,阳性,=FISH,阳性,IHC,阴性,=FISH,阴性,全自动,Ventana IHC,全自动检测，避免操作流程中的误差，可重复性好,全自动,Ventana IHC,价格便宜，可同时用于,ALK,的筛选和诊断,EMEA,（欧盟）批准,Ventana IHC,用于诊断,ALK,阳性,NSCLC,，从而帮助确定可使用克唑替尼的患者,中国患者检测价格预估,250,元,/,例,中国,ALK,阳性非小细胞肺癌诊断流程图,NSCLC,活检组织标本,EGFR,突变检测阴性或,unkown,是否必须在富集人群中检测,ALK,？,下一步,是否需要富集人群检测,ALK,：,EGFR,突变？,EGFR,与,ALK,双突变的存在：,5%-8%,EURTAC,研究中：双突变概率,15.8%,（,RT-PCR,法）,有文献报道，双突变患者克唑替尼治疗有效,是否需要富集人群：临床因素,如果按照临床因素富集，将漏诊,33%,（,2/6,）,的,ALK,阳性患者,Yoshiko Murakami,et al.Frontiers in Oncology,.,2012;doi:10.3389/fonc.2012.00024,是否需要富集人群：病理因素,如按病理因素富集：可能会遗漏,30%(5/17),的,ALK,阳性患者,中国,ALK,阳性非小细胞肺癌诊断流程图,NSCLC,活检组织标本,EGFR,突变检测,阴性或,unknown,据组织类型选择合适技术,新鲜标本,石蜡标本,Ventana IHC,手动,IHC,检测*,阳性,阴性,FISH,RT-PCR,多重,PCR,或,RACE,*:,对于部分无条件行,Ventana IHC,检测的中心，手动,ALK IHC,可作为替代的筛选方法,:,如果是细胞学样本，推荐使用,RT-PCR,检测,虚线：建议优先在富集人群（粘液性腺癌、含印戒细胞成分、不吸烟、年龄,60,岁）中进行筛选。,3+/2+/1+,ALK,融合基因阳性非小细胞肺癌,Q1,：是否必须在富集人群中检测,ALK,？,Q2,：手动,IHC,的判读标准,？,Q3,：是否需推荐细胞学的诊断方法？,谢谢！,宗旨：,“提高临床肿瘤标志物的应用实践能力”,依照,CSCO,“团结、协作、务实的服务精神和“服务、协调、引导”的工作理念，开拓进取、不断创新,中国,ALK,阳性非小细胞肺癌诊断流程图,NSCLC,活检组织标本,Ventana IHC,ALK IHC,检测*,IHC,阳性,（,3+/2+/1),IHC,阴性,阳性,阴性,ALK,融合基因阳性非小细胞肺癌,FISH,EGFR,突变检测，如阴性,RT-PCR,多重,PCR,或,RACE,*:,对于部分无条件行,Ventana IHC,检测的中心，手动,ALK IHC,可作为替代的筛选方法,:,如果是细胞学样本，推荐使用,RT-PCR,检测,虚线：建议在富集人群（粘液性腺癌、含印戒细胞成分、不吸烟、年龄,60,岁）中进行筛选,中国,ALK,阳性非小细胞肺癌诊断流程图,NSCLC,活检组织标本,Ventana IHC,ALK IHC,检测*,IHC,阳性,（,3+/2+/1),IHC,阴性,阳性,阴性,ALK,融合基因阳性非小细胞肺癌,FISH,EGFR,突变检测，如阴性,Q1,：是否必须在富集人群中检测,ALK,？,Q2,：手动,IHC,的判读标准？,RT-PCR,多重,PCR,或,RACE,*:,对于部分无条件行,Ventana IHC,检测的中心，手动,ALK IHC,可作为替代的筛选方法,:,如果是细胞学样本，推荐使用,RT-PCR,检测,虚线：建议在富集人群（粘液性腺癌、含印戒细胞成分、不吸烟、年龄,60,岁）中进行筛选,Q3,：是否需推荐细胞学的诊断方法？,