不同生姜提取物的.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,不同生姜提取物的,急性毒性及体外抑癌作用研究,The study of acute toxicity and,invitro anticancer effect of gingers extract,申请答辩人：黄玉艾 指导教师：卢静,2009,年,6,月,5,日,内,容,试验结果及结论,试验方法,试验中的关键技,术,生姜提取物的制备,背景介绍,前人对生姜的药理生理活性已研究的比较多，生姜能,维持抗氧化酶系,(SOD,、过氧化氢酶、,GSH,过氧化物酶,),的活性，显著降低大鼠的脂质过氧化反应，降低血液中丙二醛（,MDA,）含量从而具有抗氧化活性。,生姜还含有较多的挥发油，可以,抑制人体对胆固醇的吸收，防止肝脏和血清胆固醇的蓄积。,生姜,预防和控制癌症的发生和进展一直是全世界积极探索的课题。,前人研究的生姜抗肿瘤原理有抑制肿瘤组织中血管的生成作用、通过免疫调节抗肿瘤、对癌细胞转移的影响、通过细胞毒作用抗肿瘤等。抗肿瘤作用研究相对较少，研究时间也相对较短。,至今没有人用,MTT,法从对肿瘤细胞毒性的方面对生姜粗提物的抗肿瘤活性进行研究。,生姜中某些有效成分抗癌作用研究进展,试验内容,制备生姜提取物,急性毒性试验,细胞毒性试验,抗肿瘤试验,生,姜,提,取,物,的,制,备,生姜水提物和生姜醇提物浓度,急性毒性试验,1.66g/ml,（姜粉）,细胞相关试验,1g/ml,（姜粉）,试验中的关键技术,动物实验的灌胃技术,细胞培养技术,细,胞,复,苏,细,胞,传,代,培,养,细,胞,冻,存,急性毒性试验,GB15193-03,食品安全性毒理学评价程序和方法,进行最大耐受量试验,试验原理,细胞毒性以及抗肿瘤试验,MTT,法,试,验,方,法,急性毒性试验,急性毒性试验选取健康小鼠,60,只，每组,10,只，为雄性空白对照组、雄性水提组、雄性醇提组、雌性空白对照组、雌性生姜水提组和雌性生姜醇提组。,采用小鼠经口灌胃，按体重给药，,0.2ml/10g,，灌胃两次。,基于,MTT,法的细胞试验,细胞毒性试验,HL-7702,人正常肝细胞系,抗肿瘤试验,BEL-7404,人肝癌细胞系,SMMC-7721,人肝癌细胞系,接种,用胰蛋白酶消化，制成细胞悬液，然后以,每孔,100,微升接种于,96,孔板，,CO,2,培养箱内孵育,24,小时,染毒,每孔加入,40,微升的受试物，作用,24h,后,加,M,T,T,再加入,10,微升的,MTT,，,4h,显色,弃上清，每孔加入,150l,的,DMSO,，震荡，,溶解甲儹颗粒，于酶标仪上读取,490nm,处的吸光度值,MTT,法操作步骤,试,验,结,果,灌胃后性别对小鼠长势的影响,在急性毒性试验中，灌胃一周后，小鼠无中毒和死亡现象，通过分析灌胃一周后体重增长的数值，我们可以看到：空白组之间差异不显著，雄性组与雌性组间的差异也不显著（,P,0.01,），但是与对应的空白组之间的差异显著。,灌胃后提取方法对小鼠长势的影响,浓度,水提物,醇提物,水提物,醇提物,g/ml,（姜粉）,OD值,OD值,抑制率,抑制率,0.00316,0.2814,0.3020,0.25%,0,0.01,0.2773,0.2755,1.72%,2.35%,0.0316,0.2741,0.2750,2.84%,2.53%,0.1,0.2704,0.2663,4.16%,5.63%,0.316,0.1151,0.2009,59.20%,28.80%,1,0.0410,0.0167,85.47%,94.09%,生姜水提物和生姜醇提物各剂量组,OD,值及抑制率,在细胞毒性试验中以,10,为底,0.5,的对数为组距，两种提取物均设置六个剂量组，作用于人正常肝细胞系。,加入生理盐水的阴性对照组细胞的状态,加入生理盐水的阴性对照组的细胞生长状态良好，结构清晰，边缘整齐，细胞外围有光晕，折光性好,不同剂量的生姜水提物作用后细胞的生长状态,不同剂量的生姜醇提物作用后细胞的生长状态,浓度,水提组,醇提组,水提组,醇提组,g/ml,（姜粉）,OD值,OD值,抑制率,抑制率,0.00316,0.2814,0.3020,0.25%,0,0.01,0.2773,0.2755,1.72%,235%,0.0316,0.2741,0.2750,2.84%,2.53%,0.1,0.2704,0.2663,4.16%,5.63%,0.316,0.1151,0.2009,59.20%,28.80%,1,0.0410,0.0167,85.47%,94.09%,生姜提取物各剂量组,OD,值及抑制率,低浓度组的细胞状态与阴性对照组相似，毒性很小，低于,0.1g/ml,的抑制率小于,5.63%,抗肿瘤试验浓度设置及实验结果,受试物名称,代码,浓度,以姜粉计,BEL,OD均值,SMMC,OD均值,BEL,抑制率,SMMC,抑制率,生姜水提物1,WEG1,0.1g/ml,0.031,0.003,68462,92.711,生姜水提物2,WEG2,0.01g/ml,0.083,0.013,14.744,69.679,生姜醇提物1,EEG1,0.1g/ml,0.027,0.009,72.308,78.134,生姜醇提物2,EEG2,0.01g/ml,0.037,0.014,61.923,66.764,环磷酰胺,CTX,0.01g/l,0.050,0.026,48.846,39.359,纯肿瘤细胞,0.098,0.043,OD,值越高说明肿瘤细胞活性越强，,OD,值越低说明肿瘤细胞被杀死的越多，该组别抑制肿瘤效果越明显,。,不同浓度生姜提取物对,BEL-7404,抑制作用,*表示与,BEL,比较,P0.05,*,表示与,BEL,比较,P0.01;,#,表示与,BEL,比较,P0.05,#,表示与,CXT,比较,P0.01,对于,BEL-7404,肿瘤细胞系，有水提一组，醇提一组，和醇提二组三个实验组的抑制效果好与环磷酰胺组。,不同浓度生姜提取物对,SMMC-7721,抑制作用,*表示与,SMMC,比较,P0.05,*,表示与,SMMC,比较,P0.01;,#,表示与,SMMC,比较,P0.05,#,表示与,CXT,比较,P0.01,生姜提取物对,SMMC,的抑制效果比,BEL,还要略好一些，有四个实验组的抑制效果好于环磷酰胺,提取物对人正常细胞和肿瘤细胞抑制率的比较,人正常肝细胞,人肝癌细胞,受试物,浓度,HL-7702,（,%,）,BEL-7404,（,%,）,SMMC-7721,（,%,）,生姜水提物1,0.1g/ml,4.16,68.462,92.711,生姜水提物2,0.01g/ml,1.72,14.744,69.679,生姜醇提物1,0.1g/ml,5.63,72.308,78.134,生姜醇提物2,0.01g/ml,2.35,61.923,66.764,环磷酰胺,0.01g/L,-,48.846,39.359,通过与细胞毒性试验中生姜提取物对正常细胞的抑制率比较，发现,0.1g/ml,和,0.01g/ml,浓度的生姜提取物，对正常细胞的抑制率均远远小于对肿瘤细胞的抑制率。,结 论,1,生姜浓缩提取物对小鼠经口的最大耐受量大于,66.67g/kg,2,细胞毒性试验,生姜水提物的半数抑制浓度为,0.332g/ml,生姜醇提物,0.431g/ml,3,生姜提取物对肝癌细胞系有明显的抑制效果,若能将生姜的天然提取物研制为抗癌药物，取代现在广泛应用的对人体有很大副作用的抗癌药物环磷酰胺，将会有很好的发展前景。,恳请评委老师指正！,谢谢！,