临床生物化学讲义完整版.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义,单击此处编辑母版样式,单击此处编辑幻灯片母版样式,第二层,第三层,第四层,第五层,*,山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义,临床生物化学讲义（一）,山东省千佛山医院,检验科 张丽,zhangli,内容简介,临床生物化学常用的检测方法,肝胆疾病的生物化学检测,肾脏疾病的生物化学检测,血清脂类及脂蛋白生物化学检测,内容简介,糖及其代谢物的生物化学检测,心脏疾病的生物化学检测,无机离子的生物化学检测,化学比色法常见的几种类型,临床生物化学常用的检测方法,化学比色法,免疫比浊法,离子选择性电极电位法,电泳法,化学比色法,基本原理：根据比尔定律，特定波长的光通过溶液时，溶液的吸光度与溶液的浓度成正比。待测物经过一定的化学反应生成的产物，对特定波长的光具有吸收峰，从而对物质进行定量检测。这是最常用的一种方法。,举例：总蛋白，白蛋白的测定,免疫比浊法,基本原理：抗原抗体在特殊缓冲液中快速形成抗原抗体复合物，使反应液出现浊度。当反应液中保持抗体过剩时，形成的复合物随抗原量增加而增加，浊度亦增加。如检测散射光强度则为散射比浊，如检测透过光则为透射比浊。我们所用为透射比浊,举例：前白蛋白，载脂蛋白等蛋白的测定,思考题,简述临床生物化学常用的几种检测方法，并各举一例。,肝胆疾病的生物化学检测,1.肝脏的生理功能,1.代谢功能：三大物质（糖、蛋白质和脂类）的同化、储存和异化；核酸代谢、维生素的活化和储藏；激素的灭活及排泄；胆红素、胆酸的生成；铁、铜等金属的代谢,2.排泄功能：对胆红素和某些染料的排泄,3.解毒功能：生物转化功能（同化、异化）,4.物质合成功能：凝血和纤溶因子、纤溶抑制因子的生成及对活性凝血因子的灭活清除,2.肝功能实验的内容,蛋白质代谢功能检查,胆红素代谢检查,胆汁酸代谢检查,摄取、排泄功能检查,血清肝酶谱的检查,蛋白质代谢功能检查,肝脏是蛋白质代谢的主要的器官，许多蛋白质如白蛋白、糖蛋白、凝血因子、纤溶因子及各种转运蛋白等都由肝细胞合成，当肝细胞受损时，合成上述蛋白的功能降低，蛋白质的合成量就减少,球蛋白虽然不是肝细胞合成，但当肝实质细胞受损，间质细胞增生时，球蛋白的生成增加,因此，在肝脏疾病时，可表现出血液中蛋白质质和量的改变,其主要表现为白蛋白减少，纤维蛋白原减少，球蛋白的增多等,因此，测定血清中蛋白质含量和分析其组分的变化，可以了解肝脏蛋白质代谢的功能,1.总蛋白、白蛋白的检测,总蛋白：双缩脲法,蛋白质是由许多氨基酸通过肽键相互结合而成的，二价铜离子在碱性溶液中与蛋白中的肽发生反应形成紫红色络合物，在,540nm,有吸收峰，并与蛋白含量,成正比。,蛋白,+Cu,2+,Cu,蛋白络合物（紫红色）,白蛋白的检测,溴甲酚绿终点法,血清中白蛋白与溴甲酚绿在,pH4.2,环境中结合生成绿色复合物，溶液由黄色变为绿色，在,630nm,有吸收峰，其颜色深浅与白蛋白浓度成正比，从而测出白蛋白含量。,白蛋白,+BCG,白蛋白溴甲酚绿复合物,与溴甲酚紫法的比较,溴甲酚绿法操作简单、快速，即可手工操作，也能自动化分析，是目前国内最常用方法。,溴甲酚绿法除与白蛋白结合外，还与部分球蛋白结合，对血清白蛋白特异性较,溴甲酚紫法差,溴甲酚紫法测定,白蛋白具有高特异性,临床意义,血清总蛋白与白蛋白升高,急性失水、肾上腺皮质功能亢进,血清总蛋白与白蛋白降低,肝细胞损害合成减少：肝炎、肝硬化、肝癌,总蛋白60,g/L,白蛋白25 g/L，低蛋白血症,营养不良：摄入不足,丢失过多：肾病、烧伤、大出血,消耗增加：结核、甲亢、恶性肿瘤,血清总蛋白与白蛋白升高,TP80g/L（高蛋白血症）,G35g/L（高球蛋白血症）,慢性肝病、M,蛋白血症、自身免疫性疾病、慢性炎症和感染如结核、麻风、慢性血吸虫病,血清,TP,降低,生理性减少（,e.g.3y）、免疫功能抑制、先天性低TP,A/G,倒置,肝功能损伤、,M,蛋白血症。如慢性肝炎、肝硬化、肝癌、多发性骨髓瘤,血清前白蛋白测定,免疫比浊法,标本中PAB与特异性抗体反应形成不溶性复合物，可在340nm测定该复合物的浊度，与同样处理的标准品比较，得出标本中PAB的含量。,临床意义,降低：营养不良、慢性感染、肿瘤、肝炎、肝硬化、肝癌，对早期肝炎、急性重肝具有特殊诊断价值,升高：Hodgkin病,胆红素代谢检查,胆红素主要是在网状内皮系统中，由衰老RBC的血红蛋白分解后形成,生成后在血液中与白蛋白聚合，此时尚未与其它化合物结合，称为非结合胆红素（间接胆红素或游离胆红素）,非结合胆红素被转运到肝脏，经肝细胞摄取后，通过肝脏的生物转化作用，与葡萄糖醛酸结合后 称为结合胆红素（直接胆红素）,胆红素代谢检查,结合胆红素由胆道排入肠腔，被细菌还原成尿胆原,尿胆原一部分被肠粘膜吸收进入体内被肝细胞摄取，其中大部分又转变成胆红素随胆汁排入肠腔，形成“肝肠循环”,残留肠腔的尿胆原氧化后，以粪胆素排出,因此，当胆红素生成过多或肝细胞的摄取、结合、转运、排泄等过程发生障碍，可导致血中胆红素增高，形成黄疸。,总胆红素,(T-BIL),重氮盐法,总胆红素在强酸环境中，加入溶解剂，与重氮试剂反应，产生偶氮胆红素,胆红素,+2P-,苯磺基重氮,1,，,5-,萘二磺酸盐,2-,偶氮胆红素,生成的偶氮胆红素，在波长545nm处有一吸收峰，吸光度的变化与总胆红素含量成正比。,直接胆红素,(D-BIL),重氮盐法,结合胆红素可直接与重氮试剂反应，产生偶氮胆红素,直接胆红素,+2P-,苯磺基重氮,1,，,5-,萘二磺酸盐,偶氮胆红素,生成的偶氮胆红素，引起波长545nm处吸光度的上升，吸光度的变化与直接胆红素含量成正比。,临床意义,增高见于肝脏疾病，如原发性胆汁性肝硬化、急性黄疸性肝炎、慢性活动性肝炎、病毒性肝炎、阻塞性黄疸、肝硬化等。肝外疾病如溶血性黄疸、新生儿黄疸、胆石症、胰头癌、输血错误等总胆红素也增高。,胆汁酸测定,酶循环法,胆汁酸被3,-羟基类固醇脱氢酶及Thio-NAD特异性地氧化，生成3-酮类固醇及Thio-NADH，3-酮类固醇在3,-羟基类固醇脱氢酶及NADH存在下，生成胆汁酸和NAD，循环往复从而放大微量的胆汁酸量，测定生成的Thio-NADH的吸光度与标准比较，得出胆汁酸含量。临床意义,血清总胆汁酸升高,肝损害：肝炎、肝硬化、肝癌,胆道阻塞：胆管梗阻,门脉分流,血清酶学检查,肝脏是酶含量最丰富的器官，肝细胞损伤时，许多酶如ALT、AST、GGT、ALP释放入血，导致血浆酶水平升高,1.肝脏疾病时酶活力改变的机制,酶合成异常,肝细胞释放增加,2.分类,血清酶学检查,反映肝细胞病变和坏死的酶,反映肝、胆淤滞的酶,反映肝纤维化的酶,反映肝细胞合成功能的酶,肝细胞病变和坏死的酶,谷氨酸氨基转移酶（谷丙转氨酶，ALT）,连续监测法,ALT催化L-丙氨酸的氨基转移，生成丙酮酸。丙酮酸与NADH在LDH的催化下反应生成乳酸和NAD,+,。NADH在340nm处有特异吸收峰，其被氧化的速率与血清中ALT的活性成正比，在340nm处测定NADH下降速率，即可测出ALT活性。,天门冬氨酸氨基转移酶（谷草转氨酶，AST）,连续监测法,AST催化L-天冬氨酸的氨基转移与MDH催化的反应偶联，使NADH氧化生成NAD+。NADH在340nm处有特异吸收峰，其被氧化的速率与血清中AST的活性成正比，在340nm处测定NADH下降速率，即可测出AST活性。,与赖氏法的比较,连续监测法多用于自动化生化分析仪，准确性好、精确性好,赖氏法多用于手工操作，实验条件要求不高，便于基层医疗单位开展，但重复性差，准确性差。,临床意义,急性病毒肝炎ALT：500-1000U/L ASTALT多见,一些药物或毒物所致升高：氯丙嗪、异烟肼、奎宁和酒精、铅、汞、四氯化碳、有机磷中毒,肝细胞合成酶,胆碱酯酶（AChE),实验方法：,临床意义：肝脏合成AChE,肝实质细胞损害时，AChE活力降低,胆道梗阻的酶,碱性磷酸酶（ALP）的测定,连续监测法,无色的对-硝基苯磷酸二钠在ALP作用下，生成在405nm处有特异吸收峰的淡黄色对-硝基苯酚，通过测定在405nm处吸光度的变化速率计算ALP活性。,临床意义,血清中的碱性磷酸酶主要来自肝脏和骨骼,肝胆系统疾病：阻塞性黄疸、急、慢性黄疸肝 炎、肿瘤引起的胆汁淤积，可增高520倍,黄疸的鉴别诊断：肝外胆道阻塞+患者常升高,骨骼疾病：纤维性骨炎、佝偻病、骨软化病、骨转移癌、骨折愈合期,生理性升高：生长期的儿童和青少年,-谷氨酰转肽酶（GGT）的检测,原理：GGT分布在胆管或胆道系统,连续监测法,r-谷氨酰-3-羧基-对硝基苯胺和双甘肽在,-GT作用下，生成对硝基苯胺及r-谷氨酰双甘肽，所释放出的对硝基苯胺与,-GT活性成正比，通过在405nm处测定对硝基苯胺的变化，可求出,-GT活力。,临床意义,胆道阻塞性疾病，升高明显，可达530倍,急、慢性病毒性肝炎、肝硬化,酒精性肝炎,其他：脂肪肝、胰腺炎、前列腺肿瘤,其它酶类,酶类肿瘤标志物检测,-,L-岩藻糖苷酶（AFU）与原发性肝癌诊断标志（81.2%），AFP,联合检测可提高肝癌检出率,肝纤维化的酶学检查,单氨氧化酶,思考题,思考题,1.肝损害蛋白检查的意义。,2.血清酶学在肝胆疾病检查的意义。,名词解释,1.结合胆红素,2.非结合胆红素,填空题,1.正常成人血清总蛋白正常参考值为,，白蛋白正常参考为,，球蛋白正常参考为,，A/G正常参考为,。,2.临床上多用,法测定总蛋白，,法测定白蛋白。,当血清总蛋白,g/L或球蛋白,g/L时，称为高蛋白血症或高球蛋白血症。,3.血清蛋白电泳结果中，按泳动速度从正极起分为,、,、,、,、,。,4.当胆红素生成过多或肝细胞的摄取、结合、转运、排泄等过程发生障碍，可导致血中胆红素增高，从而发生,。,肾脏疾病的生物化学检测,肾脏功能,排泄水分、代谢产物、废物，保留有用物质,调节水分和渗透压,调节电解质及酸碱平衡,制造某些重要的生理活性物质,肾小球功能检查,肾小球滤过率（GFR）是反映肾小球滤过功能的客观指标，用单位时间内两肾生成的超滤液量即原尿的生成量来表示,肾清除率是指双肾于单位时间（min）内，能将多少毫升血浆所含的某物质全部清除，结果以ml/min或L/24h表示,肾清除率,肾清除率可分别测定肾小球滤过率、肾血流量、肾小管对各种物质的重吸收和分泌作用,全部由肾小球滤出，肾小管不吸收、不分泌，如菊粉，可作为肾小球滤过率测定的理想物质，能完全反映肾小球滤过率,由肾小球滤出，肾小管也排泌，如尿素、肌酐等，反映肾小球滤过率不如菊粉准确,全部由肾小球滤出，又被肾小管全部吸收，如葡萄糖，可作为肾小管最大吸收率的测定,除肾小球滤过外，大部分通过肾小管分泌排出，如对氨马尿酸等，可作为肾血流量的测定,1.内生肌酐清除率,肌酐为肌肉中磷酸肌酸的代谢产物，是反映肾小球的滤过功能的较好指标,原理,血浆肌酐种类：内源性和外源性,血浆肌酐的代谢：大部分从肾小球滤过，不被肾小管重吸收，且肾小管的排泌量很少,条件：在严格控制饮食和肌肉活动相对稳定的情况下，血浆肌酐的生成量和在尿中的排出量较恒定，其含量的变化主要受内源性肌酐的影响,内生肌酐清除率（,Ccr）：指肾单位时间内，清除多少毫升血浆中的内生肌酐,临床意义,判断肾小球损害的敏感指标，可较早判断肾小球损害,对肾功能的初步估价，可作为观察肾移植成功与否的客观指标，移植成功，该指标逐步回升，发生排斥，则下降,对临床治疗的指导意义,药物使用的参考,慢性肾炎临床分型的参考,2.血尿素氮和血肌酐的测定,原理,血尿素氮（BUN）和血肌酐（Scr）主要经肾小球滤过而随尿液排出，在肾实质受损时，肾小球滤过率降低，导致BUN和Scr在血中的浓度增加,参考值,BUN 3.27.1 mmol/L,Scr 男性 53 106,mol/L,女性 44 97,mol/L,尿素(UREA)的测定,临床实验室常采用脲酶速率法、离子选择电极法等,脲酶速率法,脲酶催化尿素水解产生NH,3,和CO,2,。在谷氨酸脱氢酶催化下，NH,3,与,-酮戊二酸和NADH反应生成NAD+。NADH在340nm处有特异性吸收峰，通过测定NADH下降速率与同样处理的标准比较，得出尿素含量。,肌酐(CREA)的测定,氧化酶比色法,肌肝+H,2,O,肌酸,肌酸+H,2,O 肌酐酶 肌氨酸+尿素,肌氨酸+H,2,O+O,2,氨基乙酸+H,2,O,2,+甲醛,H,2,O,2,+笨酚+4-氨基安替比林 醌亚胺（红色）4H,2,O,醌亚胺在500nm处有最大吸收峰，其吸光度值与CREA含量成正比。,与碱性苦味酸法比较,氧化酶比色法可消除假肌酐的影响,临床意义,各种严重肾脏疾病引起肾功能不全时可增高；,上消化道出血、严重感染和饮食中蛋白质过多，也可导致BUN暂时升高；,由于血肌酐受其他影响较小，能反映患者肾功能情况，Cr 明显升高，提示预后差,3.血尿酸（UA）的测定,原理,UA是体内嘌呤代谢终产物，小部分经肝分解破坏，大部分经肾小球滤过，在近端肾小管中98-100%被重吸收，故正常情况下UA的清除率较低,酶比色法,尿酸酶催化UA氧化生成尿囊素和H,2,O,2,，过氧化氢在过氧化物酶的存在下与笨酚、4-氨基安替比林氧化缩和成红色醌式染料，此染料在500nm处有最大吸收峰，其吸光度值与UA含量成正比。,临床意义,血液尿酸增高常见于肾脏疾病、痛风、子痫、白血病与肿瘤J及其他疾病如慢性铅中毒引起的肾损害、长期禁食等,4.2-微球蛋白,原理,2-M在体内主要由淋巴细胞产生的一种小分子蛋白，正常人血中2-M浓度很低，可自由通过肾小球，然后在近端肾小管几乎被全部重吸收,免疫比浊法,2-MG与特异性抗体反应形成不溶性复合物，可在340nm测定该复合物的浊度，与同样处理的标准品比较，得出血清中2-MG的含量。,临床意义,尿液2-M升高是反映近端小管受损的非常灵敏和特异的指标,肾小球滤过功能下降时，血2-M水平升高,胱氨酸蛋白酶抑制剂c的检测,CystatinC有核细胞合成，有稳定的生成率，既使在急性炎症反应期生成亦不受影响，经肾小球自由滤过，在肾近曲小管几乎被完全重吸收并降解，无肾小管分泌，因此其血浓度取决于肾小球虑过率，是反映肾小球虑过率的灵敏标志物,测定方法：免疫透射比浊法,临床意义：CystatinC几乎不受肾前因素的影响，也没有肾外的排泄途径，是判断肾小球滤过功能的早期诊断指标之一,尿液酶的测定,尿液中含有数十种酶,血清酶进入尿液：当肾小球滤过增加而肾小管重吸收功能紊乱，血清酶进入尿液，活性增强,细胞酶释放入尿液：肾小球病变、肾小管细胞破坏，间质炎症等使细胞破坏，细胞酶释放入尿液使溶酶体酶增加,泌尿生殖系统肿瘤、炎症、红细胞、细菌等也可使尿酶增加,常见的测定酶,N-乙酰-氨基葡萄糖（NAG）、LDH、-谷氨酰转移酶、溶菌酶,思考题,填空题,1.,是反映肾小球滤过功能的客观指标，它用,来表示。,3.血尿酸是体内,终产物，小部分经肝分解破坏，大分部经,滤过，在,中98-100%被重吸收，故正常情况下尿酸的清除率较低。,4.正常人血2-微球蛋白的参考值是,。,单选题,1.尿酶法测定血清中尿素时，加脲酶后尿素水解首先产生（）,A.氨和谷氨酸 B.谷氨酸及CO,2,C.CO,2,及氨 D.谷氨酸及CO,2,E.硫酸铵,2.尿液中不受饮食和尿量影响，排出量最为恒定的是（）,A.肌酸 B.肌酐 C.尿素 D.尿酸 E.以上均不是,3.临床上血中尿酸高的疾病应除外（）,A.痛风 B.肾功能损害 C.白血病 D.恶性肿瘤 E.肝硬化,血清脂类及脂蛋白生物化学检测,概述,血浆脂类包括游离胆固醇（FC）、胆固醇酯(CE)、磷脂（PL）、甘油三酯（TG）、糖脂和游离脂肪酸（FFA）等,血浆中最多的脂质为胆固醇、PL和TG，游离胆固醇和胆固醇酯称为总胆固醇,血浆脂类以脂蛋白复合体的形式存在,血浆脂蛋白分类：CM、VLDL、IDL、LDL、HDL和Lp(a),磷脂,游离脂肪酸（FFA）,FFA,与,Alb,结合其它均包含在脂蛋白中,胆固醇,甘油三酯,超速离心法与电泳法分离血浆脂蛋白,1.血清胆固醇测定CH,酶比色法（Trinder反应）,胆固醇酯在胆固醇酯酶的作用下分解生成胆固醇，胆固,醇,在胆固醇氧化酶及过氧化物酶作用下最终生成红色醌类化合物,，,红色醌类化合物颜色深浅与胆固醇的浓度成正比。(波长500nm）,临床意义,胆固醇的监测用于评估罹患动脉硬化的风险以及对脂类/脂蛋白的代谢紊乱进行诊断和监测治疗。,增高见于糖尿病昏迷患者，还常见于原发性高胆固醇血症、动脉粥样硬化、肾病综合征、总胆管阻塞、粘液性水肿、肥大性骨关节炎、老年性白内障、牛皮癣等。,降低见于恶性贫血、溶血性贫血、甲状腺功能亢进、感染、营养不良、肝硬化、急性肝坏死等。,2.甘油三脂TG,磷酸甘油氧化酶法（Trinder反应）,甘油三脂在脂肪酶、甘油激酶等酶的作用下，生成3-磷酸甘油，再经磷酸甘油氧化酶（GPO）氧化生成磷酸二羟丙酮和过氧化氢，过氧化氢与4-氨基安替比林在过氧化物酶作用下生成红色醌类化合物。其显色程度与TG成正比。（波长500nm）临床意义,血中的甘油三酯以乳糜微粒和前,-脂蛋白中含量最高，它与动脉粥样硬化的形成密切相关，甘油三酯的升高与冠心病的发生也有很大关系。,增高：脂肪肝、阻塞性黄疸、动脉粥样硬化、高脂血症等,降低：严重肝衰、甲状腺功能减退等,3.高密度脂蛋白胆固醇（HDL）,一般通过HDL-C亚型含量间接反映HDL水平,化学修饰酶法,胆固醇酯酶(CHER)和胆固醇氧化酶(CHOD)经化学修饰后，对LDL、VLDL、乳糜微粒中的胆固醇反应性降低，仅对高密度脂蛋白中的胆固醇起作用。,临床意义,HDL-胆固醇参与体内胆固醇酯逆转运，起到抗动脉粥样硬化作用，所以是冠心病的保护因子。HDL-胆固醇水平与AS性心、脑血管疾病发病率成负相关。HDL-C:CHOL能更好的预测心、脑动脉粥样硬化的危险性。,肝损害和肾病综合征时，HDL-C降低,4.低密度脂蛋白胆固醇（LDL）,LDL是血清中携带胆固醇的主要颗粒,LDL向组织及细胞内运送胆固醇，直接促使动脉粥样硬化,选择性溶解法,试剂中添加仅使LDL溶解的表面活性剂，LDL之外的脂蛋白（HDL、VLDL、乳糜微粒）由于受表面活性剂和糖化合物的阻碍而不能参与反应，在反应液中以脂蛋白形式残存。,临床意义,LDL水平升高与冠心病的发生呈正相关,5.载脂蛋白A,1,Apo-A,1,是HDL的主要载脂蛋白成分（90%）,Apo-A,1,有清除组织内脂质和抗粥样动脉样硬化作用,临床意义,Apo-A,1,血清水平与冠心病发病率负相关,6.载脂蛋白B,Apo-B是LDL的主要载脂蛋白（98%）,是动脉粥样硬化的风险指标,临床意义,Apo-B,水平与动脉粥样硬化和冠心病正相关,胆汁淤积也可使血清,Apo-B,升高,载脂蛋白的测定方法,免疫透射比浊法,血清中载脂蛋白的与试剂中相应单克隆抗体相结合，形成抗原抗体复合物，产生混浊，其浊度的高低与血清中APOA-1成正比。,7.脂蛋白a(Lpa),免疫透射比浊法,人血清中Lp(a)与试剂中相应的特异性单克隆抗体在适当的介质中，形成抗原-抗体复合物，产生一定的浊度，浊度的高低在足量抗体存在时与抗原的含量成正比。,临床意义：Lp(a)动脉粥样硬化的独立危险因素。,游离脂肪酸FFA,酶比色法,游离脂肪酸在乙酰辅酶A合成酶(ACS)和乙酰辅酶A氧化酶(ACO)的作用下，.生成过氧化氢（H,2,O,2,）。生成的过氧化氢（H,2,O,2,）在过氧化酶和显色剂的作用下产生美兰，美兰在一定光波长具有吸收峰，吸光度的大小与游离脂肪酸的浓度成正相关。,临床意义,游离脂肪酸的代谢受脂肪代谢、糖代谢和内分泌的影响，与胰岛素抵抗有关。,其含量升高表示患有糖尿病、甲状腺机能抗进症、肢端肥大症和重症肝功能障碍等疾病。,含量降低表示患有甲状腺机能低下、下垂体功能不全和阿狄森氏病（Addison）等疾病。,思考题,甘油三脂和胆固醇的测定方法是什么,那种胆固醇与心血管疾病正相关？哪种负相关？,THANK YOU,临床生物化学讲义（二）,山东省千佛山医院,检验科 张丽,zhangli,内容简介,临床生物化学常用的检测方法,肝胆疾病的生物化学检测,肾脏疾病的生物化学检测,血清脂类及脂蛋白生物化学检测,内容简介,糖及其代谢物的生物化学检测,心脏疾病的生物化学检测,无机离子的生物化学检测,化学比色法常见的几种类型,糖及其代谢物的生物化学检测,血糖及血糖浓度的调节,糖尿病,糖及其代谢物的生物化学检测,糖尿病自身抗体的检测,血糖及血糖浓度的调节,血糖主要是指血中的葡萄糖，正常人血糖浓度相对恒定在,3.896.11mmol/L,范围内。通过体内相关激素对血糖的调节，使血糖的来源与去路保持动态平衡。,血糖及血糖浓度的调节,血糖的来源：,碳水化合物的消化和单糖的吸收,糖原的分解,糖异生,血糖的代谢去路,有氧氧化 产生能量（,ATP,），是血糖去路的主要途径,合成糖原,转换成甘油三酯、蛋白质或氨基酸等其它非糖物质,当血糖浓度高于肾糖阈时，从尿中排出,糖尿病,定义：糖尿病是由于与胰岛素分泌绝对或相对不足和,(,或,),胰岛素抵抗而引起的代谢性疾病，其特征是高血糖症,糖尿病的分型,1,型糖尿病：由于胰岛,B,细胞破坏引起的胰岛素分泌绝对不足，具有酮症酸中毒倾向,2,型糖尿病；由于患者胰岛,B,细胞对胰岛素不敏感，即胰岛素抵抗,特殊类型的糖尿病,妊娠期糖尿病,糖尿病的诊断,出现糖尿病症状，随机血糖（,RPG,）,11.1mmol/L,空腹血糖（,FPG,）,7.0mmol/L,，空腹指最少,8h,内无热量食物的食入,口服葡萄糖耐受试验（,OGTT,），血浆葡萄糖（,2h PG,）,11.1mmol/L,这三种方法可单独用来诊断糖尿病，任何一种出现阳性必须用三种中任意一种复查才能正式确诊,糖尿病的诊断,若OGTT-2h血糖7.8mmol/L(1 40 mg/dl)但11.1mmoi/L(200 mg/dl)，FPG 7.0mmol/L(1 40 mg/dl)可以诊断为糖耐量低减(IGT).,若FPG6.1mmol/L(110mg/dl)8.0%为比HbAlc增高,临床意义：,可为较长时间段的血糖提供回顾性评价，不受短期血糖浓度的影响，主要用于评估血糖控制情况,糖尿病自身抗体的检测,谷氨酸脱羧酶抗体,谷氨酸脱竣酶抗体,(glutamic acid，decarboxylase antibodles GAD一Ab)是胰岛细胞自身免疫反应的特异性标志。正常成人GAD一Ab为阴性(酶免法)。在糖尿病发病前期和发病时的阳性率一般都很高为60%一80%最高可达96%而在2型DM中仅为3.2%。GAD一Ab测定对迟发性成人自身免疫性糖尿病(LADA)的鉴别诊断具有决定性意义，其灵敏度为76%特异性为88%优于胰岛细胞抗体,糖尿病自身抗体的检测,胰岛细胞抗体,胰岛细胞抗体,(lslet Cell autoantibodies ICAS)主要为具有补体结合活性的lgG类抗体。正常成人ICAs为阴性(酶免法)。ICAS在新诊断为1型DM病人中阳性率为70%一90%.发病1一2年内阳性率达85%，1型糖尿病儿童阳性率可达94%。随着病情迁延阳性率逐渐下降。2型DM阳性率仅为5%一10%。有研究表明ICAs阳性者中有61%在5年内可发展成为1型糖尿病。其与GAD一AB相比在发病前期其阳性率较低故对1型DM发病的预测价值不如GAD一Ab,糖尿病自身抗体的检测,胰岛素抗体,胰岛素抗体,insulin autoantibodies，IAA可阻止胰岛素发挥生物学活性，是产生胰岛素抵抗的重要原因。正常成人IAAs为阴性(酶免法)。IAAs阳性通常见于接受异源性胰岛素治疗的病人，在新诊断为1型DM病人中IAA也可出现在发病前，但其对1型DM发病的预测价值不如GAD一Ab和ICAs。IAA多见于5岁以下儿童病人，且常呈高滴度。,思考题,一、A型题：,1.胰岛素由何种细胞分泌（）,A.胰岛细胞 B.胰岛细胞 C.胰腺细胞,D.胰岛细胞和细胞 E.皆不是,2.胰岛素的化学本质是（）,A.蛋白质 B.类固醇 C.氨基酸衍生物 D.脂肪酸衍生物 E.核苷酸,3.胰岛素在体内的生物半寿期为（）,A.510秒钟 B.510分钟 C.510小时D.510天 E.510月,思考题,5.有关1型糖尿病的叙述错误的是（）,A.胰岛细胞的破坏 B.胰岛素绝对不足 C.常见于青少年,D.常检出自身抗体 E.胰岛素抵抗,6.有关2型糖尿病的叙述错误的是（）,A.胰岛细胞的功能减退 B.胰岛素相对不足 C.常见于肥胖的中老年成人,D.常检出自身抗体 E.胰岛素抵抗,7.有关果糖胺的叙述错误的是（）,A.主要是测定糖化清蛋白 B.所有糖化血清蛋白都是果糖胺,C.反映过去23周的平均血糖水平 D.可替代糖化血红蛋白,思考题,E.是糖尿病近期控制水平的监测指标,8.当血糖超过肾糖阈值时,可出现（）,A.生理性血糖升高 B.病理性血糖升高 C.生理性血糖降低,D.病理性血糖降低 E.尿糖,9.测定血糖的标本最常采用的抗凝剂和防腐剂组合是（）,A.碘乙酸钠-EDTA.Na2 B.叠氮钠-肝素锂 C.氟化钠-草酸钾,D.氟化钠-肝素钠 E.冰醋酸-肝素,10.随机血糖的参考值范围为（）,A.2.87.8mmol/L B.3.896.11mmol/L C.4.55.9mmol/L,D.7.011.1mmol/L E.11.1mmol/L,思考题,二、B型题：,A.己糖激酶法,B.葡萄糖氧化酶法,C.Follin-Wu法,D.邻甲苯胺法,E.同位素稀释质谱分析法,1.血糖测定的常规方法是（）,2.血糖测定的参考方法是（）,A.尿硝酸盐,B.血浆白蛋白,思考题,C.尿酮体D.全血乳酸,E.胰岛素抗体,3.怀疑糖尿病酮症酸中毒时需检测（）,4.1型糖尿病常伴有哪一指标阳性（）,5.怀疑糖尿病乳酸酸中毒时需检测（）,三、X型题：,1.影响糖代谢的激素有（）,A.胰岛素 B.胰高血糖素 C.肾上腺素 D.生长激素,思考题,E.皮质醇 F.甲状腺激素 G.生长抑素,2.升高血糖的激素有（）,A.胰岛素 B.胰高血糖素 C.肾上腺素 D.生长激素,E.皮质醇 F.甲状腺激素 G.生长抑素,3.胰高血糖素的生理作用有（）,思考题,A.促进肝糖原分解 B.促进糖异生 C.促进脂肪动员,D.促进肝脏生成酮体 E.抑制胰岛素释放,4.最新的按病因将糖尿病分为以下几类（）,A.型糖尿病 B.型糖尿病 C.1型糖尿病 D.2型糖尿病,E.特殊类型的糖尿病 F.妊娠期糖尿病 G.糖耐量异常,思考题,5.有关糖化血红蛋白的叙述正确的是（）,A.包括HbA1和HbA0,B.糖化血红蛋白的形成是不可逆的,C.反映过去68周的平均血糖水平,D.用胰岛素治疗的糖尿病人，应将糖化血红蛋白作为常规检测指标,E.是最长期的糖尿病控制指标,6.胰岛素对糖代谢调节的主要作用有（）,A.促进肌肉、脂肪细胞摄取葡萄糖,B.促进糖原合成，减少糖原分解,C.促进糖氧化分解，加速糖的利用 D促进糖转变为脂肪，减少脂肪分解,E.抑制糖异生作用,7.具有促进糖异生作用的激素有（）,A.胰岛素 B.胰高血糖素 C.肾上腺素 D.糖皮质激素 E.生长激素,思考题,四、名词解释：,糖尿病,五、问答题：,1.简述2001年颁布的糖尿病诊断标准。,2.简述在糖尿病的临床诊断上检测C肽比胰岛素好的理论依据？,心脏疾病的生物化学检测,概述：在我国，冠状动脉硬化性心脏病，简称冠心病和脑血管病是城市人口的前三位死因，是严重威胁人类健康的重要疾病，其病理组织学基础都为动脉硬化。检验医学在预防动脉硬化的存在、严重程度及判断心肌损伤方面都能为临床提供重要而有用的信息，使心血管病学重要组成部分。,心脏疾病的生物化学检测,组成：,与生物化学有关的冠心病危险因素,急性心肌损伤的生物化学标志物,与生化有关的冠心病危险因素,血脂：血脂危险水平临床首选TC，HDL-C和TG作为冠心病辅助诊断指标,炎症：超敏C反应蛋白（hsCRP）被看作冠心病的独立危险因素。在心梗发生3h，中风后12h可测到升高的CRP,凝血因子：冠脉内血栓形成是冠心病发展加剧的主要因素之一，主要危险因素有：纤维蛋白原（FB）、凝血因子和血浆纤溶酶原激活抑制剂（PAI-1）,急性心肌损伤的生物化学标志物,近几年，一致认为肌红蛋白和CK-MB亚型是急性心肌梗死早期标志物，肌钙蛋白是心肌损伤的确诊标志物。具体包括,心肌酶学,心肌肌钙蛋白（包括cTnT和cTnI）,肌红蛋白Mb,心肌酶学的检测,谷草转氨酶(AST/GOT),乳酸脱氢酶(LDH),乳酸脱氢酶同工酶I（LDH-1）,-羟丁酸脱氢酶（,-HBDH）,肌酸激酶（CK）,肌酸激酶同工酶（CK-MB）,谷草转氨酶(AST/GOT)的测定,试验方法：速率法,AST作用于底物天冬氨酸和,-酮戊二酸生成谷氨酸和草酰已酸，后者与还原型辅酶I（NADH2）在苹果酸脱氢酶的作用下生成苹果酸和氧化型辅酶I（NAD+）,监测340nm波长下NADN 2吸光度的下降速率，计算AST的活性。,谷草转氨酶(AST/GOT)的测定,临床意义：,AST广泛存在于人体多种组织器官中，以心肌和肝脏含量最高，血清中AST升高主要见于心脏和肝脏疾病。在急性心肌梗死时，8-12小时开始生高，48-60小时达峰值，最高可达正常的10倍以上，4-5天恢复正常。,在急、慢性肝炎及大面积肝细胞受损时，AST和ALT均可升高，主要是ALT升高，当两种酶都升高，且AST大于ALT时，表示肝脏损伤严重。,谷草转氨酶(AST/GOT)的测定,肌损伤、皮肌炎、进行性肌营养不良、大面肾或肺梗塞、急性胰腺炎、溶血性贫血、烧伤均可以使AST升高。,注意事项：,溶血干扰AST测定，可引起不同程度的升高，因此标本严禁溶血。,抗凝剂对酶的活性有抑制作用，尤其是草酸盐和EDTA类的抗凝剂。,乳酸脱氢酶(LDH)的测定,试验方法：速率法,试验原理：,LDH作用于底物乳酸和NAD+生成丙酮酸和NADH2，监测340nm波长下NADH2吸光度的上升速率，计算LDH的活性。,乳酸脱氢酶(LDH)的测定,临床意义：,LDH广泛存在于人体多种组织器官，急性心肌梗死发病12-24小时开始升高，48-72小时达峰值，一般为正常的5-6倍，最高可达10倍以上，可持续10天左右。,心衰和心包炎伴肝淤血、严重休克和重度贫血和未治疗的贫血、白血病（特别是M5型）,时可中度升高。,乳酸脱氢酶(LDH)的测定,皮肌炎等肌肉损伤性疾病时也可以升高。,中毒性黄疸和传染性单核细胞增多症可显著升高。,50%LDH升高的病例与恶性肿瘤有关，尤其是腹腔和肺部肿瘤，因此测定这些部位的流出液的LDH活性更有意义。,1/3的肾病患者血清LDH也可以升高。,乳酸脱氢酶(LDH)的测定,注意事项：,红细胞内含有大量LDH，因此标本严禁溶血。,抗凝剂对酶的活性有抑制作用，尤其是草酸盐和EDTA类的抗凝剂,乳酸脱氢酶同工酶I（LDH-1）,乳酸脱氢酶是由M亚单位和H亚单位组成的四聚体，根据不同亚单位含的比例不同构成5种同工酶，心脏、肾脏和红细胞所含的同工酶比例相近，以LD1和LD2为主,试验方法：化学抑制法,试验原理：,用硫氰酸胍选择性的抑制带M亚基的乳酸脱氢酶同工酶（LDH2-5）活性，以速率法测定LDH活性即为LDH1的活性。,乳酸脱氢酶同工酶I（LDH-1）,临床意义：心肌组织主要含有LDH1,心肌损伤时LDH1从心肌细胞溢出而使血清中此酶活性升高，有时LDH1的升高会早于总LDH。,其他组织也含LDH其他同工酶，因此总LDH升高,而LDH1不升高，可以排除心肌损伤性疾病。,同LDH相比，更具有器官的特异性，可以较好的反映和心肌损伤，并与其他组织器官损伤鉴别。,注意事项：同LDH测定。,-羟丁酸脱氢酶（,-HBDH）,试验原理：,以,-酮丁酸取代丙酮酸与NADH2为底物在LDH1的作用下生成,-羟丁酸和NAD+，监测340nm波长下NADH2吸光度下降的速率，计算LDH1的活性即为,-HBDH活性。,临床意义：同LDH1测定。,注意事项：同LDH1测定。,肌酸激酶（CK）,试验方法：速率法,试验原理：,CK作用于底物磷酸肌酸和ADP生成肌酸和ATP，后者与葡萄糖在己糖激酶（HK）的作用下生成葡萄糖-6-磷酸（G-6-P）和ADP，G-6-P氧化型辅酶II在葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G-6-PDH）作用下生成6-磷酸葡萄糖和还原型辅酶II（NADPH2），监测340nm波长下NADPH2吸光度的上升速率，肌酸CK活性。,肌酸激酶（CK）,临床意义：,急性心肌梗死时升高，一般在发生梗死后4-6小时开始升高，24小时达峰值，且升高的幅度比AST和LDH大，3-4天恢复正常。,重体力劳动、肌肉损伤、皮肌炎、系统性红斑狼疮、假性肥大性肌营养障碍、心肌炎、脑血管疾病、甲状腺功能低下、长期肌肉注射都会引起此酶升高。,儿童较成人轻度升高，一般出生后24小时迅速升高，可达正常成人的2-5倍，14-20天开始下降，6岁后逐渐降至成人水平。,4甲状腺功能亢进的病人可降低。,肌酸激酶同工酶（CK-MB）,CK是由M和B两种亚基组成的二聚体，共有三种同工酶，CK-MB在心肌中所占的比例最高,试验方法：免疫抑制法,试验原理：,以CK-M亚基作抗原免疫动物制备的CK-M抗体加入CK试剂I中，与待测样本中的CK-M亚基发生抗原抗体反应而使其失去活性，再加入CK试剂II启动CK反应，测得的CK活性为CK-B亚基的活性。由于正常人血清中CK-BB活性几乎为零，因此将CK-B活性结果乘以2即为CK-MB活性。,肌酸激酶同工酶（CK-MB）,临床意义：肌酸激酶同工酶（CKMB）,CK-MB主要存在于心肌细胞，因此在急性心肌梗死时升高明显。急性心肌梗死发病4小时开始升高，24小时达峰值，48小时可降至正常水平，比CK总活性更特异，CK-MB活性大于CK总活性5%即有诊断意义。,肌酸激酶同工酶（CK-MB）,巨CK和线粒体同工酶（CK-Mt）干扰CK-MB测定，可使该方法测定的CK-MB假性升高，有时甚至会出现大于总活性。其主要原因是：巨CK是由于IgG与CK结合后使得酶的构型发生改变，CK-M抗体无法与CK-M亚基结合；CK-Mt是由两种相同亚基组成的二聚体，氨基酸组成和氨基末端的氨基酸与CK-M亚基不同，因此CK-M亚基也无法与之发生免疫反应，而不能抑制其活性，测定结果再乘以2，就会出现CK-MB假性升高，甚至高于总活性的情况。一般CK-MB活性大于总活性的30%就应该考虑上述原因。,思考题,一、A型选择题,1 下列危险因素中，哪种指标可更准确地预报冠心病发生（）,A.TC B.TG C.HDL-C D.TCHDL-C,2.有关CRP的描述下列哪项不正确(),A.是炎性淋巴因子刺激肝脏和上皮细胞合成,感染、创伤、手术可导致升高。,B.CRP的升高反映了动脉硬化存在低度的炎症过程和粥样斑块的脱落。,C.在AMI发生后6h在血中才能测得升高的hsCRP。,E.AMI患者中hsCRP和TC/HDL-C联合分析，可大大提高预测冠心病的准确性。,思考题,3动脉血栓形成的主要危险因素中，下列哪项指标除外（）,A血浆纤维蛋白原 B.血浆凝血活酶转变加速素,C.凝血因子 D.血浆纤溶酶原激活抑制剂,4.下列哪项不是冠心病的确定危险因素(),A.纤维蛋白原增高 B.C-反应蛋白增高,C.HDL增高 D.凝血因子异常,5.下列哪项指标通常被作为心肌损伤确诊标志物(),A.CK B.CK-MB C.LD1 D.CTn,6.下列哪项不属于传统心肌酶谱检测指标(),思考题,A.CK-MB B.LD1 C.CK D.CTn,二、X型选择题,1.目前作为冠心病辅助诊断的首选指标是(),A.LP(a)B.TC C.HDL-C D.TG,2.动脉血栓形成的主要危险因