1、单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,分辨率公式,n,=,介质折射率（空气,1,，水,1.33,，香柏油,1.5,）,=,标本对物镜镜口张角的半角，,sin,的最大值为,1,。,=,照明光源的波长，白光,0.5,m,。,横向分辨率,R,x,y,=0.61,/nsin,纵向分辨率,R,z,=2,/(nsin,),2,退 出,Technology for Cell Biology,首 页,(,一,),普通光学显微镜的分辨率：,0.2,微米,一、光学显微镜技术,思
2、考：,如何提高显微镜的分辨能力？,人眼的分辨率：,100,m,不同光线的波长,名,称,波,长,(nm),可见光,760,-,390,紫外光,390,-,13,X,射线,13,-,0.05,射线,1,-,0.005,电子束,:,100V,0.123,10,000V,0.0122,100,000V,0.00387,（二）普通光学显微镜的成像原理,光镜的结构,光学部分,照明部分,机械部分,（三）荧光显微镜,以,紫外线,为光源，照射被检物体发出能观察到的荧光。,荧光显微镜显示同一细胞中的多种结构成分,细胞核,内质网,细胞骨架,（四）相差显微镜,通过致密部分,(,如细胞核,),速度慢通过疏松部位,(,如
3、细胞质,),速度快,相位差,(,光程差,),振幅差,(,明暗差,),相差显微镜,倒置相差显微镜,载物台的上方：,光源,长焦距,聚光器,载物台的下方：,物镜,应用：直接对培养的,细胞进行观察,体外培养的细胞,(a),：正在分裂生长的,Hela,细胞,(b),：,CHO,单层细胞的培养,用激光作光源，逐点、逐行、逐面快速扫描。,类似荧光显微镜，但能扫描不同层次，形成立体图像。,(,五,),激光共聚焦显微镜,信噪比,英文名称：,signal-to-noise ratio;,signal to noise ratio,定义,：,特定参数,(,信号,),值与非特异性参数,(,噪声,),的比值。,如实验中
4、样品的放射性与本底放射性强度之比；荧光在,X,射线底片上所造成的感光强度与非特异感光背景强度之比等,二、电子显微镜,1.,透射电子显微镜,分辨率,=,0.1 nm,2.,扫描电子显微镜,-,标本表面的三维结构,显示细胞,表面,三维立体结构,显示细胞,断面,三维立体结构,电镜与光镜的比较,显微镜,分辨本领,光源,透镜,真空,成像原理,LM,TEM,200nm,100nm,0.1nm,可见光（,400-700,）,紫外光,（约,200nm),电子束,（,0.01-0.9,）,玻璃透镜,玻璃透镜,电磁透镜,不要求真空,不要求真空,要求真空,1.33x10,-5,1.33x10,-3,Pa,利用样品对
5、光的吸收形成明暗反差和颜色变化,利用样品对电子的散射和透射形成明暗反差,一,.,细胞组分的分级分离,第二节,.,细胞生物学其他研究方法,分离不同类型细胞,大小 密度 形状,小 轻 不规则,大 重 圆形,1.,差速离心法,方法：,从高速到低速逐级沉降,分离对象：,体积、质量差别较大的颗粒,二 细胞培养,（一）细胞培养,从机体中取出组织或细胞，模拟体内的生理环境，使之能够继续生存的一种方法。,（二）分类,原代培养,(primary culture):,直接从生物体获取,细胞进行培养。,传代培养,(secondary culture),：,将原代培养的细,胞以定比例扩大培养。,体外培养的细胞,(a),：正在分裂生长的,Hela,细胞,(b),：,CHO,单层细胞的培养,三、细胞融合（细胞杂交）,1.,概念：在自发或人工诱导下，相同或不同基因型细胞之间相互融合的过程。,2.,诱导因子：生物：仙台病毒,化学：聚乙二醇,物理：电脉冲,3.,分类：,异核体：,不同基因的细胞核融合,同核体：,相同基因的细胞核融合,小 结,1.,掌握,分辨率的概念,2.,显微镜技术（掌握各种显微镜用途）,3.,细胞培养概念,4.,细胞融合概念、诱导因子、分类,
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