生物检定法省公开课一等奖全国示范课微课金奖PPT课件.pptx

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第五章 生物检定法,第1页,第一节 概述,一、生物检定定义,:,利用药品对,生物体,(,整体动物、离体组织、微生物等）作用以测定其效价或生物活性一个方法。它以药品,药理作用,为基础，,统计学,为工具，选取特定试验设计，在一定条件下比较供试品和相当,标准品,所产生特定反应，经过等反应剂量间百分比计算，从而测得供试品中活性成份效价。,第2页,二、生物检定包含整体和离体测定,:,整体：,直接反应药品对生物作用，但费动物，供试品用量多，耗时长，精密度和灵敏度较差。,离体：,个体差异小，试验时间较短，精密度和灵敏度较高，能在一定程度上保留药理作用特征，尤其适合用于微量激素测定，缺点是不一定能反应供试品在整体作用。,第3页,三、生物检定应用范围,1,药品效价测定,2,检验方法查对,3,体内微量生理活性物质测定,4,中药质量控制,5,一些有害杂质程度检验,第4页,第二节 生物检定中基本概念,（一）生物反应是生物检定基础,生长素测定方法：,形态方法,生物化学方法,a,去垂体大鼠体重增加法,a,正常狗血中含氮物降低法,b,正常大鼠体重增加法,b,去垂体大鼠血清碱性磷酸酶增加法,c,侏儒小鼠体重增加法,c,去肾大鼠中尿素氮降低法,d,去垂体大鼠尾椎生长法,d,正常狗或正常大鼠氮贮留增加法,e,正常大鼠肝重,增加法,e,去垂体大鼠血清无机磷增加法,f,正常大鼠下颌骨或头盖骨测定法,f,遗传性高血糖大鼠血糖上升法,g,去垂体大鼠胫胃端软骨增加法,g,去垂体大鼠肾转脒基酶活性上升法,第5页,（二）剂量与反应关系,质反应,:,当观察某一反应或反应某一特定程度出现是否，比如死或不死，惊厥或不惊厥，只能出现与不出现两种情况，故不能用量来表示个体反应程度，只能用一组动物中出现正或负反应百分率来表示，如死亡率，惊厥率，这类反应称质反应。,量反应,:,药品对生物体所引发反应伴随药品剂量增加产生量变能够测量者，称为量反应。比如血压改变值，血糖浓度，器官组织重量等。,第6页,时反应,:,为特殊量反应,它是观察某一反应或反应某种程度出现所需时间，比如血液凝结时间，动物生存时间等。,第7页,（三）对比检定,当标准品剂量,ds,和供试品剂量,dt,产生反应程度相等时，,ds，dt,为标准品和供试品等反应剂量，,ds,中所含单位,ds.Ps,和,dt,中所含单位,dt.Pt,相等，即,Psds=Ptdt,两药效价比值,R=Pt/Ps=ds/dt (6-1,),即标准品与供试品效价比值,R,是它们等反应量反比。效价强,R,倍，等反应剂量就小,R,倍，相反亦然。,式中,Ps,已知，,ds,和,dt,是试验中所用剂量，,Pt,是供试品效价是需要经过试验测定。,Pt=dsPs/dt (6-2),第8页,lgR=M=lgPT/Ps=lgds/dT,M=lgR=lgPt-lgPs=lgds-lgdt=Xs-Xt,效价比值（,R,）,=antilgM=antilg(Xs-Xt,）（,6-3,）,供试品效价,Pt=antilg(Xs-Xt+lgPs,）,当供试品按标示量或预计效价进行试验时,P,T,=R,*,供试品预计效价或标示量 （,6-,4,）,第9页,第三节 生物检定惯用方法,质反应直接测定法,质反应平行线测定法,量反应平行线测定法,第10页,质反应直接测定法,直接测定法就是在较短时间内能够准确测得各个动物对,S,和,T,最小效量方法。,最小效量（,MED,）。,因为生物个体差异，最小有效量参差不齐，但有一定规律性。,如洋地黄测定鸽法：,直接测定详细方法是将试验对象分成两组，一组为,S,，,一组为,T,，,分别测定,S,和,T,MED,，,然后再计算出,S,和,T,各自地,lgMED,及均值,Xs,和,Xt,。,R=antilgM=antilg,（,Xs-Xt,）,第11页,S,T,MLDs(ds),Xs,MLD,T,(d,T,),X,T,/Kg,lg(ds*10),/kg,lg(d,T,*10),1.15,1.01,1.10,1.14,1.06,0.95,1.061,1.0044,1.041,1.057,1.0250.978,1.11,1.23,1.06,1.31,0.94,1.36,1.045,1.090,1.025,1.117,0.973,1.134,Xs,和,6166,X,T,和,6.384,Xs,平均,1028,X,T,平均,1.064,第12页,第四节生物检定实例,一、,胰岛素生物检定法,本法系比较胰岛素标准品,(S),与供试品,(T),引发小鼠血糖下降作用，以测定供试品效价。,标准品溶液配制,供试品溶液与稀释液配制检定法,第13页,二、,肝素生物检定法,本法系比较肝素标准品,(S),与供试品,(T),延长新鲜兔血或兔、猪血浆凝结时间作用,以测定供试品效价。标准品溶液配制标准品稀释液配制,第14页,供试品溶液与稀释液配制按供试品标示量或预计效价，照标准品溶液与稀释液配制法配成高、中、低三种浓度稀释液。相邻两浓度之比值,(r),应与标准品相等，供试品与标准品各剂量组凝结时间应相近。血浆制备快速搜集兔或猪血置预先放有,8,枸橼酸钠溶液容器中,枸橼酸钠溶液与血液容积之比为,1:19,，边搜集边轻轻振摇，混匀，快速离心约,20,分钟（离心力不超出,1500g,为宜，,g,为重力常数）。马上分出血浆，分成若干份分装于适宜容器内，低温冻结贮存。临用时置,370.5,水浴中融化,用两层纱布或快速滤纸过滤，使用过程中在,4,8,放置。,第15页,检定法（,1,）新鲜兔血取管径均匀（,0.83.8cm,或,1.07.5cm,）、清洁干燥小试管若干支，每管加入一个浓度标准品或供试品稀释液,0.1ml,每种浓度不得少于,3,管,各浓度试管支数相等。取刚抽出兔血适量，分别注入小试管内，每管,0.9ml,马上混匀,防止产生气泡，并开始计算时间。将小试管置,370.5,恒温水浴中，从动物采血时起至小试管放入恒温水浴时间不得超出,3,分钟，注意观察并统计各管凝结时间。,第16页,（,2,）血浆取上述规格小试管若干支，分别加入血浆一定量，置,370.5,恒温水浴中预热,5,10,分钟后，依次每管加入一个浓度标准品或供试品稀释液及,1,氯化钙溶液（每种浓度不得少于,3,管,各浓度试管支数相等），血浆、肝素稀释液和氯化钙溶液加入量分别为,0.5,、,0.4,和,0.1ml,（或,0.8,、,0.1,和,0.1ml,），加入氯化钙溶液后，马上混匀，防止产生气泡，并开始计算时间，注意观察并统计各管凝结时间。将各管凝结时间换算成对数，照生物检定统计法（附录,）中量反应平行线测定法计算效价及试验误差。检定法（,1,）可信限率,(FL,),不得大于,10,。检定法（,2,）可信限率,(FL,),不得大于,5,。,第17页,三、缩宫素生物检定,取健康无伤成年雌性大鼠，断乳后即与雄鼠隔离，出生后不超出,3,个月,体重,160,240g,。试验当日，选择阴道涂片在动情前期动物，也可用雌性激素处理使子宫涂片为动情前期或动情期动物。,检定法：,取选定大鼠快速处死，剖腹取出子宫，仔细分离附在子宫肌上结缔组织,注意防止因牵拉使子宫肌受损。在子宫分叉处剪下左右,2,条，取一条将其下端固定于离体器官恒温水浴装置浴杯底部，上端用线与统计装置相连，以描记子宫收缩；浴杯中加入一定量子宫肌蓄养液,第18页,(10ml),，连续通入适量空气。蓄养液应调整至,32,35,之间并保持恒温,(0.5,),，子宫放入浴杯后，静置约,15,分钟,按次序准确注入等体积标准品或供试品两种浓度稀释液，待子宫肌收缩至最高点开始松驰时（约,60,90,秒钟），放去蓄养液并用蓄养液洗涤一次，再加入等量蓄养液，静置。按随机区组设计次序轮番注入每组四个剂量，重复,4,6,组。,统计各剂量所致子宫收缩幅度（,g,），照生物检定统计法中量反应平行线测定法计算效价及试验误差。试验可信限率,(FL,),不得大于,10,。,第19页,第六节 药品标准物质研究,1,药品标准物质研究情况,2,药品标准物质必备条件：,材料均匀,性能稳定,准确定值,制备分装测定等需经国家权威部门认可,第20页,3,标准品效价,表示方法,动物单位,效价单位,4,基因工程药品标准品质量要求,原料判定,成品判定,制备要求,第21页,本章重点内容,概念：,生物检定,:,质反应：,时反应,:,量反应：,第22页,