凯氏定氮法.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,Hanon Group Inc.,Hanon,定氮仪产品介绍,凯氏定氮法,凯氏定氮法是测定氮,蛋白质的经典方法。目前，均普遍采用凯氏定氮仪定氮法对土壤，食品，农产品，饲料以及一些物质进行氮,蛋白质含量的测定。用此法测定试样时，需经过消解、蒸馏、滴定三个过程。蒸馏和滴定是凯氏定氮法测定过程。,Hanon Group Inc.,Hanon,定氮仪产品介绍,凯氏定氮法原理,:,样品与浓硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，其中碳和氢被氧化为二氧化碳和水逸出，而样品中的有机氮转化为氨与硫酸结合成硫酸铵。然后加碱蒸馏，使氨蒸出。,用,H3BO3,吸收后再以标准,HCl,溶液滴定。根据标准酸消耗量可以计算出蛋白质的含量。,也可以用过量的标准,H2SO4,或标准,HCl,溶液吸收后再以标准,NaOH,滴定过量的酸。,Hanon Group Inc.,Hanon,定氮仪产品介绍,凯氏定氮法,根据凯氏定氮原理测定需要三个步骤，即消解，蒸馏，滴定。Hanon K9860型凯氏定氮仪可完成全自动蒸馏，滴定过程。消解总反应式：,2NH2（CH2）2COOH+13H2SO4=NH42SO4+6CO2+12SO2+16H2O,一定要用浓硫酸（98%）,加硫酸钾 作为增温剂，提高溶液沸点，纯硫酸沸点 340，加入硫酸钾之后可以提高至400以上。也可加入硫酸钠，氯化钾等提高沸点，但效果不如硫酸钾。,加硫酸铜作为催化剂。还可以作消化终点指示剂（做蒸馏时碱性指示剂）。还可以加氧化汞、汞（均有毒，价格贵）、硒粉、二氧化钛。,加氧化剂如双氧水、次氯酸钾等加速有机、物氧化速度。,2.蒸馏 消化液+40%氢氧化钠加热蒸馏，放出氨气。,Hanon Group Inc.,Hanon,定氮仪产品介绍,凯氏定氮法,3.吸收与滴定,用4%硼酸吸收，用盐酸标准溶液滴定，指示剂用混合指示剂（甲基红,溴甲基酚绿混合指示剂）国标用亚甲基兰+甲基红。,指示剂 红色 绿色 红色,（酸）（碱）（酸）,用过量的 H2SO4 或 HCl 标准溶液吸收，再用 NaOH 标准溶液滴定过剩的酸液，用甲基红指示剂。,配制：,方法1、3.5 g KI+1.3 g HgCl2 溶于70 毫升水。加30毫升4 mol/L氢氧化钠（或氢氧化钾）溶液，必要时过滤，并存于玻璃瓶中盖紧口。,方法2、溶解11.5 g HgI2+KI 10 g于适量少许水，后加水稀释至50 ml,静置后，取其澄清液，弃去沉淀，储存于棕色瓶中。,Hanon Group Inc.,Hanon,定氮仪产品介绍,凯氏定氮法,注意：,F,氮换算为蛋白质的系数，一般为,6.25,也可查表。,说明：,所用试剂溶液应用无氨蒸馏水配制。,消化时不要用强火，应保持和缓沸腾，以免粘贴在凯氏瓶内壁上的含氮化合物在无硫酸存在的情况下消化不完全而造成氮损失。,消化时应注意不时转动凯氏烧瓶，以便利用冷凝酸液将附在瓶壁上的固体残渣洗下，并促进其消化完全。,样品中若含脂肪较多时，消化过程中易产生大量泡沫，为防止泡沫溢出瓶外，在开始消化时应用小火加热，并时时摇动；或者加入少量辛醇或液体石蜡或硅油消泡剂，并同时注意控制热源强度。,当样品消化液不易澄清透明时，可将凯氏烧瓶冷却，加入,30,过氧化氢,2,3 m1,后再继续加热消化。,若取样量较大，如干试样超过,5 g,可按每克试样,5 m1,的比例增加硫酸用量。,Hanon Group Inc.,Hanon,定氮仪产品介绍,凯氏定氮法,般消化至呈透明后，继续消化,30,分钟即可，但对于含有特别难以氨化的氮化合物的样品如含赖氨酸、组氨酸、色氨酸、酪氨酸或脯氨酸等时，需适当延长消化时间。有机物如分解完全，消化液呈蓝色或浅绿色，但含铁量多时，呈较深绿色。,蒸馏装置不能漏气。,蒸馏前若加碱量不足，消化液呈蓝色不生成氢氧化铜沉淀，此时需再增加氢氧化钠用量。氢氧化铜在,70,90,时发黑。,蒸馏完毕后，应先将冷凝管下端提离液面清洗管口，再蒸,1,分钟后关掉热源否则可能造成吸收液倒吸。,Hanon Group Inc.,Hanon,定氮仪产品介绍,凯氏定氮法,含氮量：,N(%)=,1.401M,W,(V-V0),粗蛋白含量：,P(%)=,N(%)C,M=,标准酸摩尔浓度；,W=,样品重量（克）；,V0=,空白样滴定标准酸量消耗量（毫升）；,V=,样品滴定标准酸消耗量（毫升）；,C=,粗蛋白转换系数,