免疫学检验基础理论知识.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,抗原,:,凡能刺激机体产生抗体和致敏淋巴细胞并能与之发生特异性结合的物质称为抗原,(antigen,、,Ag),。,抗原物质具有免疫原性与反应原性。,免疫原性（抗原作用）,:,指能刺激机体产生抗体和致敏淋巴细胞的特性。,反应原性（抗原反应）,:,指抗原与相应的抗体或致敏淋巴细胞发生反应的特性。,抗 原,完全抗原与半抗原,完全抗原,:,具有免疫原性与反应原性的物质，多为分子量大于,5000,的蛋白质。,半抗原,:,只具有反应原性而无免疫原性的物质，一般为小分子化合物，例如某些激素、药物等。,抗 原,免疫系统组成,定义：抗原与相应抗体之间的特异性结合反应。,原理：抗原抗体的特异性结合是基于抗原决定簇与抗体超变区分子间的结构互补性和亲和性。这种特性是有抗原、抗体分子空间构型所决定的。,抗原抗体反应,特异性,空间结构互补，如同钥匙和锁，一一对应。,共同抗原：物质表面往往不止一种抗原决定簇，两种不同抗原物质可具有部分相同或类似结构的抗原决定簇。能与彼此相应的抗体出现交叉反应。,抗原抗体反应特点,比例性,指抗原与抗体特异性结合反应时，生成肉眼可见结合物的量与反应物浓度的关系，只有当二者浓度比例适当是，才出现可见反应。,钩状效应（倒钩）：抗体过量,-,前带，抗原过量,-,后带。,抗原抗体反应特点,可逆性抗原与相应抗体结合复合物后，在一定条件下又可解离为游离抗原与抗体的特性称为抗原抗体结合的可逆性。,复合物解离因素：,1.,抗体对相应抗原的亲和力。,2.,环境因素。,PH,值，离子强度。,抗原抗体反应特点,反应物自身因素,抗原：理化性状，表面抗原决定簇的种类和数目,抗体：,来源：来源不同动物的免疫血清，等价带宽窄不同。,浓度：与相应抗原浓度合适才易出现可见反应。,特异性与亲和力：早期获得的抗血清亲和力低，特异性好；后期获得的往往亲和力高。诊断试剂尽可能选高特异性、高亲和力的抗体。才能提高试验的可靠性。,影响抗原抗体反应的因素,反应环境条件,电解质,反应必须要有电解质参与。,酸碱度,一般以,pH6,9,为易,温度,一般以,15,40,，最适温度为,37,。范围内温度越高反应速度越快，温度越低反应越慢但结合的越牢固。,56,会导致解离甚至变性。,影响抗原抗体反应的因素,双抗体夹心法,适用于检测分子中具有至少两个抗原决定簇的多价抗原，而不能用于小分子半抗原。,利用连接在固相载体上的抗体和酶标抗体可分别与样品中被检测抗原分子上的两个不同抗原决定簇结合，形成固相抗体,-,抗原,-,酶标抗体免疫复合物。,酶联免疫吸附实验类型,1,、已知抗体包,被于载体表面,3,、加酶标抗体,与抗原结合,4,、加酶作用的底物,产生颜色,2,、加待检物,抗原与抗体结合,4,、加酶作用的底物,不产生颜色,洗涤,洗涤,洗涤,洗涤,1,、已知抗体包,被于载体表面,2,、加待检物无抗,原与抗体结合,3,、加酶标抗体,无抗原结合,+,-,Y,Y,Y,E,Y,E,Y,E,Y,Y,E,Y,E,Y,E,Y,Y,Y,Y,E,Y,E,Y,E,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,双抗体夹心法测抗原,14,间接法,此法是测抗体的常用方法。将抗原连接在固相载体上，样本中待检抗体与之结合成 固相抗原,-,待检抗体复合物，再用酶标二抗（针对待检抗体的抗体）与固相复合物中的抗体结合。,酶联免疫吸附实验类型,1,、已知抗原吸,附于载体表面,2,、加待检物,无抗体与抗原结合,3,、加酶标抗,Ig,与抗体结合,4,、加酶作用的底物,产生颜色,1,、已知抗体吸,附于载体表面,2,、加待检物,有抗体与抗原结合,3,、加酶标的抗,Ig,抗体,4,、加酶作用的底物,不产生颜色,洗涤,洗涤,洗涤,洗涤,-,Y,E,Y,Y,Y,E,Y,E,Y,Y,Y,E,Y,Y,E,Y,Y,E,Y,Y,E,Y,Y,E,Y,E,Y,+,间接法测抗体,16,竞争法,竞争法可用于抗原和半抗原的定量测定，也可对抗体进行测定。,酶标记抗原（抗体）与待测品中的抗原（抗体）具有相同的与固相抗体结合的能力；反应体系中，固相抗体（抗原）和酶标抗原（抗体）是固定限量，且前者的结合位点少于酶标记与待测抗原（抗体）分子数量和；反应后，结合于固相载体上的复合物中被测定的酶标抗原（抗体）的量与待测品中的抗原（抗体）的浓度成反比。,酶联免疫吸附实验类型,洗涤,洗涤,+,-,Y,Y,Y,Y,Y,Y,E,Y,Y,E,Y,Y,Y,Y,E,Y,Y,E,Y,E,Y,E,Y,E,2,、加待检物,抗原与酶标抗,原竞争与抗体,结合,3,、加酶作用,的底物不显色,或显色弱,3,、加酶作用,的底物显色,1,、已知抗体包,被于载体表面,1,、已知抗体包,被于载体表面,2,、加待测物,和酶标抗原，,酶标抗原与抗,体结合,Y,E,竞争法测抗原,18,捕获法,最常用于,IgM,抗体检测。先将针对,IgM,的第二抗体连接于固相载体，用以结合样品中所有的,IgM,抗体，然后加入特异抗原与待检,IgM,抗体结合；再加入抗原特异的梅标抗体，最后形成固相二抗,-IgM-,抗原,-,梅标抗体复合物,。,酶联免疫吸附实验类型,洗涤,洗涤,洗涤,洗涤,+,-,E,Y,E,Y,E,Y,E,Y,E,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,1,、固相化抗人,IgM,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,Y,1,、固相化抗人,IgM,2,、加待测物,特异性,IgM,与,非特异性,IgM,和抗人,IgM,结合,3,、加特异性,抗原，与特异,性抗体结合,4,、加酶标抗体,与特异性抗原结,合，加底物显色,3,、加特异性抗,原，不能与非,特异性,IgM,结合,4,、加酶标抗体,无抗原结合，,加底物不显色,捕获法原理,2,、加待测物,非特异性,IgM,和抗人,IgM,结合,20,谢 谢,