1、单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,构建基因组文库，筛选目的基因,基因组文库(gene library)：将某种生物的基因组DNA切割成一定大小的片段，并与合适的载体重组后导入宿主细胞，进行克隆。这样每一个细胞接受了含有一个基因组DNA片段与载体连接的重组DNA分子，而且可以繁殖扩增，这些存在于所有重组体内的基因组DNA片段的集合，即基因组文库，它包含了该生物的所有基因。,构建流程,抽提基因组DNA,鸟枪法制备DNA片段,DNA片段与载体重组,转化宿主菌,筛选目的基因（核酸探针法、免疫结合法）,构建cDNA文库，筛选目的基因,cDNA
2、文库(complementary DNA library)以组织细胞中的mRNA为模板，反转录合成双链cDNA，各cDNA分子分别插入载体形成重组子，再导入宿主细胞克隆扩增。这些在重组体内的cDNA的集合即cDNA文库。,cDNA文库仅包含正在表达的基因,不同物种、不同组织的cDNA文库不相同,基因总量少，易筛选,基因组含有的基因在特定的组织细胞中只有一部分表达，而且处在不同环境条件、不同分化时期的细胞其基因表达的种类和强度也不尽相同，所以,cDNA,文库具有组织细胞特异性。,cDNA,文库显然比基因组,DNA,文库小得多，能够比较容易从中筛选克隆得细胞特异表达的基因。但对真核细胞来说，从基因
3、组,DNA,文库获得的基因与从,cDNA,文库获得的不同，基因组,DNA,文库所含的是带有含子和外显子的基因组基因，而从,cDNA,文库中获得的是已经过剪接、去除了内含子的,cDNA,。,PCR扩增目的基因片段,如果已经知道目的基因的序列，就能很方便地用,PCR,聚合酶链式反应，,polymerase chain reaction,，从基因组,DNA,或,cDNA,中获得目的基因，可不必要经过复杂的,DNA,文库构建过程。,用于克隆序列清楚的基因,以基因组DNA为模板，直接进行PCR扩增较难,多采用以mRNA为模板的RT-PCR法,人工合成较短的DNA,差异显示法(differential display,DD)筛选差异表达的基因,
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