高中生物选修一DNA的粗提取与鉴定.pptx

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,讨论,2,：怎样证实他们是遗传物质？,讨论,3,：怎样才能将细胞内这些物质分离出来？,讨论,1,：组成生物体遗传物质是什么？,1/23,5.1 DNA,粗提取与判定,2/23,一、基础知识,（一）提取,DNA,方法,1.,提取生物大分子基本思绪,选取一定物理或化学方法，分离含有不一样物理或化学性质生物大分子,2.,提取,DNA,基本思绪,提取,DNA,，去除其它成份,利用,DNA,与,RNA,、,蛋白质,和,脂质,等,在物理和化学性质方面差异,3/23,DNA,溶解性,DNA,和蛋白质等成份,在不一样浓度,NaCl,溶液中溶解度不一样,利用这一特点，,选择适当盐浓度,就能使,DNA,充分溶解，,而使杂质沉淀；,或者让其它成份溶解，,DNA,析出,3.DNA,等大分子理化性质,4/23,DNA,不溶于酒精溶液，,但细胞中一些蛋白质则溶于酒精。,将,DNA,与蛋白质深入分离。,DNA,不溶于酒精溶液,DNA,对酶、高温和洗涤剂耐受性,蛋白酶,水解蛋白质，,对,DNA,没有影响,高 温,大多数蛋白质不能忍受,60,80,而,DNA,在,80,以上才会变性,洗涤剂,溶解细胞膜，去除脂质和蛋白质,但对,DNA,没有影响,5/23,6/23,试剂：,（二）,DNA,判定,条件：,二苯胺,沸水浴条件下，,DNA,遇二苯胺被染成,蓝色,沸水浴,现象：,7/23,二、试验设计,（一）试验材料选取,从以下材料中选取,2,3,种,标准：,菜花、香蕉、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜；,鱼卵、猪肝、鸡血、哺乳动物红细胞；,在液体培养基中培养大肠杆菌,凡是含有,DNA,生物材料都能够考虑,选取,DNA,含量相对较高组织,8/23,（二）破碎细胞，获取含,DNA,滤液,1,、动物细胞,2,、植物细胞,轻易破碎,需要溶解细胞膜,鸡血细胞溶液：,加入一定量蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后搜集滤液,想一想：为何加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？,蒸馏水对于鸡血细胞来说是一个低渗液体，,水分大量进入血细胞，使血细胞胀裂；,加上搅拌作用，加速鸡血细胞细胞膜、核膜破裂，从而释放出,DNA,加入一定洗涤剂和食盐,充分,搅拌和研磨，过滤后搜集研磨液,想一想：洗涤剂和食盐作用分别是什么？,洗涤剂,离子去污剂，能溶解细胞膜，利于,DNA,释放,食 盐,NaCl,，利于,DNA,溶解于研磨液中,9/23,使细胞核内,DNA,释放不完全，提取,DNA,量变少，造成看不到丝状沉淀物、用二苯胺判定不显示蓝色等,为了纯化提取,DNA,需要将滤液作深入处理,讨论：滤液,/,研磨液中可能含有哪些成份？,答：可能含有核蛋白、多糖和,RNA,等杂质,想一想：假如研磨不充分，会对试验结果产生 怎样影响？,10/23,1.DNA,溶解性,2.DNA,对,酶,、,高温,和,洗涤剂,耐受性,（三）除去滤液中杂质,11/23,讨论：方案二与方案三原理有什么不一样？,方案二：利用蛋白酶分解杂质蛋白，使提取,DNA,与蛋白质分开；,方案三：利用,DNA,和蛋白质对高温耐受性不一样，使蛋白质变性，与,DNA,分离,12/23,（四）,DNA,析出与判定,与滤液,体积相等,冷却,酒精溶液,(,体积分数,95,),，,静置,2,3min,，溶液中会出现白色丝状物,粗提取,DNA,用玻璃棒沿一个方向搅拌，,卷起丝状物，并用滤纸吸收上面水,1,、,DNA,析出,13/23,14/23,2.DNA,判定,向两支试管中分别加入,2mol/L NaCl,溶液,5ml,其中一支试管中加入,DNA,丝状物,各加入,二苯胺,试剂,4ml,混匀后，置于沸水浴中加热,5min,待冷却后，比较两只试管中溶液颜色改变,观察现象：,溶解丝状物溶液变为,蓝色,15/23,观察你提取,DNA,颜色，,假如不是白色丝状物，,说明,DNA,中杂质较多；,二苯胺判定出现蓝色,说明试验基本成功，,假如不展现蓝色，,可能所提取,DNA,含量低，,或是试验操作中出现错误，,需要重新制备,四、课题结果评价：,是否提取出了,DNA,16/23,课题延伸,本课题使用洗涤剂是多组分混合物，在严格科学试验中极少使用。试验室提取高纯度,DNA,时，通常使用十六烷基三甲基溴化铵（,CTAB,）、十二烷基硫酸钠（,SDS,）或吐温等化学试剂。,17/23,2,、你认为从细胞中提取某种特定蛋白质与提取,DNA,一样轻易吗？,答：提取蛋白质比提取,DNA,难度大,。这是因为，与,DNA,相比，,蛋白质对温度、盐浓度、,pH,等条件要敏感得多,，很轻易失活；而且,蛋白质空间结构各种多样，理化性质各不相同,，使得蛋白质提取没有一个统一方法，只能依据特定蛋白质特征探索提取条件，设计特定方法。,18/23,为何重复地溶解与析出,DNA,，能够去除杂质？,1,、用高盐浓度溶液溶解,DNA,，能除去,在高盐中不能溶解杂质,；,2,、用低盐浓度使,DNA,析出，能除去,溶解在低盐溶液中杂质。,所以，经过重复溶解与析出,DNA,，就能够除去与,DNA,溶解度不一样各种杂质。,19/23,过滤用蒸馏水稀释过鸡血细胞液,目标,:,取得含核物质滤液,过滤含粘稠物,0.14,mol/LNaCl,溶液,目标,:,获取纱布上粘稠物,过滤溶解有,DNA,2,mol/LNaCl,溶液,目标,:,得到含,DNA,滤液,本试验中有三次过滤,分别有什么作用,?,20/23,第一次搅拌加蒸馏水鸡血细胞液,加速细胞破裂,第二次搅拌加,2,mol/LNaCl,溶液滤液,使,DNA,与溶液混合均匀,第三次搅拌加蒸馏水至,0.14,mol/LNaCl,溶液,稀释,NaCl,溶液,析出,DNA,第四次搅拌放入,2,mol/LNaCl溶液中纱布上粘稠物,使,DNA,尽可能多溶于溶液中,第五次搅拌体积分数为,95%,酒精,提取含杂质较少,DNA,试验中有五次用玻璃棒搅拌,?,分别有什么作用,?,21/23,方法步骤,加入物质,目标,1,.,制备鸡血细胞液,柠檬酸钠溶液,2,.,提取鸡血细胞细胞核物质,20 m1,蒸馏水,幻灯片,18,3,.,溶解细胞核内,DNA,2 m1,L,NaCI,溶液,40,mL,幻灯片,18,4,.,析出含,DNA,黏稠物,蒸馏水,5,.,滤取含,DNA,黏稠物,6,.,将,DNA,黏稠物再溶解,2 mol,L,NaCl,溶液,20 mL,7,.,过滤含,DNA,NaC,l,溶液,8,.,提取含有杂质较少,DNA,冷却,95,酒精,50 mL,幻灯片,18,A,:,(,1),向试管中加入,0,.,015 mol,L,NaCl,溶液,5,mL,(,2),加入,DNA,(,3)4,mL,二苯胺试剂,9,.,DNA,判定,B,:,(1),向试管中加入,0,.,015mol,L,NaCl,溶液,5,mL,(,2)4 m,L,二苯胺试剂,22/23,加入柠檬酸钠溶液目标是预防血凝固,加速血细胞破裂,溶解,DNA,使,2mol/L,NaCl,溶液稀释至,0.14mol/L,使得,DNA,最大程度地释出,使含,DNA,黏稠物被留在纱布上,使含,DNA,黏稠物尽可能多溶解于溶液中,除去含,DNA,滤液中杂质,提取,DNA,A,出现蓝色,B,无改变,23/23,