1、单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验五 微生物的接种技术及分离纯,目的要求,初步掌握微生物的分离、培养和菌种保藏的基本方法。,练习微生物接种、移植和培养的基本技术，掌握无菌操作技术。,实验原理,土壤是微生物生活的大本营，为了获得某种微生物的纯培养，一般是根据该微生物对营养、酸碱度、氧等条件要求不同，而供给它适宜的培养条件，或加入某种抑制剂，淘汰其他一些不需要的微生物，再用各种方法分离、纯化该微生物，直至得到纯菌株。,稀释涂板法、划线分离,实验材料,样品：,新鲜土壤。,培养基：,灭菌的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、高氏一号培养基、马铃薯蔗糖培养
2、基。,无菌水：,带有玻璃珠装有45,mL,无菌水三角瓶、装有9,mL,无菌水的试管。,其它：,无菌培养皿、无菌吸管、无菌三角玻棒、电子天平、记号笔、接种环、酒精灯、火柴。,试剂：,1万,U/mL,链霉素液、10苯酚,实验步骤,稀释涂板法,划线分离,微生物的培养,制平板：每组制培养皿3付。,在无菌培养皿底部注明分离菌名、稀释度、组别、班级。,实验步骤1,（,微生物的分离稀释涂平板法）,制备土壤稀释液：(无菌操作过程见教师示范）,1.,称取土壤5,g，,放入45,mL,无菌水的三角瓶中，振荡10,min，,即为稀释10,1,的土壤悬液。,2.,另取装有9,mL,无菌水试管5支，用记号笔编上10,2
3、10,3,、10,4,、10,5,、10,6,。取已稀释成10,1,的土壤液，振荡后静止0.5,min，,用无菌吸管吸取1,mL,土壤悬液加入10,2,的无菌水的试管中，并在试管内,轻轻吹吸,数次，使之充分混匀，即成10,2,土壤稀释液。同法依次连续稀释至10,4,、10,5,、10,6,土壤稀释液。,在土壤稀释过程中，需换用不同的吸管,图1 土壤稀释液的制备和稀释液的取样,吸取稀释液,取一吸管，以无菌操作法分别吸取10,4,、10,5,、,10,6,土壤稀释液0.1,mL，,加在已制好的平板培养基上。,涂板,用玻璃刮铲将稀释液在培养机上充分混匀铺平，倒置于恒温箱培养,。,计算出每克土壤中
4、细菌的数量。,即用某一培养皿内真菌的菌落数乘以该培养皿接种液的稀释倍数即得。,挑取单个菌落，进行划线分离。,实验程序,2,（,微生物的分离,平板涂抹法）,实验程序,2,（,微生物的分离,混菌法）,制平板,吸取稀释液,取一吸管，以无菌操作法分别吸取10,4,、10,5,、,10,6,土壤稀释液0.1,mL，,加在空培养皿中。,混菌,水平轻轻转动培养皿，使菌液、培养基充分混匀铺平，放在平坦的桌面上，凝固后倒置于恒温培养箱培养。,计算出每克土壤中放线菌的数量。,挑取单个菌落，进行划线分离。,实验程序,3,（,微生物的分离,平板划线法）,制成平板。,凝固后，用接种环取相应的菌液一环（10,1,）在平板
5、上划线。,1.连续划线法：,将挑取有样品的接种环在平板培养基表面作连续划线。完毕后，倒置于2830,0,C,温室培养。,2.分区划线法：,用接种环以无菌操作挑取土壤稀释液1环，先在培养基的一边作第一次平行划线34条，再转动培养皿约60,0,C,角，并将接种环上剩余物烧掉，待冷却后通过第一次划线部分作第二次划线会，同法依次作第三次和第四次划线。划线完毕，盖上皿盖，倒置于温室培养。,挑取单个菌落接种于斜面培养基上，如果不纯，再移植纯化，最后得到纯培养。,实验程序,4,（,微生物的接种方法）,接种方法：常用的有斜面接种法、平板接种法、液体接种法、试管深层固体培养基的穿刺接种法。,接种工具：常用的有接种针、接种环、接种钩、接种圈、接种铲或接种锄、玻璃涂棒等（见图6）。,图6,思 考 题,平板培养时为什么要把培养皿倒置？,在划线分离时，为什么每次都需要将接种环上的剩余物烧掉？,实 验 五,结 束,
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