实验十-细菌的凝集反应.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验十 细菌的凝集反应,何伟 0604,实验目的,了解血清学方法的原理,血清学方法在微生物诊断中的作用,学会利用血清稀释法测定免疫血清的效价。,实验原理,颗粒性抗原(如细菌或红血球)的悬液与含有特异性抗体的血清混合，在适量电解质存在的情况下，经过一定时间，出现肉眼,可见,的凝集块，称为凝集反应。参加反应的抗原称凝集原，其血清中的抗体，称为凝集素。凝集反应的机制是由于抗原与其相,应,抗体间存,在,着相对应的极性基。极性基的相互吸附，使抗原外周的水化膜除去，由亲水溶胶变成憎水溶胶。由于电解质具有降低电位的作用，使抗原颗粒间的排斥力消除，从而产生了凝集现象。进行细菌的抗原分析、鉴定及分型，也可应用已知细菌检查未知血清的抗体。,有些细菌即使用生化反应,很,难区别，但其细菌抗原成份（包括菌体抗原、鞭毛抗原）却不同。利用已知的特异抗体测定有无相应的细菌抗原可以确定菌种或菌型。常用的方法为,玻片凝集反应,，用已知的特异免疫血清与待鉴定的细菌在玻片上做凝集反应，如出现凝集菌团则为阳性，说明该菌有相应的特异抗原。检测抗原的另一优点为在应用了抗生素治疗后，细菌生长被抑制，利用培养方法不能检出的细菌，因尚有抗原存在，在短期内仍可被检出，从而有助于明确病因。个别情况下还可利用噬菌体对细菌抗原型别分析，用于流行病学追踪调查。,实验材料,大肠杆菌斜面培养物，大肠杆菌悬液(含1010,9,个ml大肠杆菌的生理盐水悬液，并经60加热l h灭活)。,大肠杆菌免疫抗血清。,生理盐水、载片、小试管、试管架、移液管（1m1刻度、5ml）、水浴锅,实验步骤,玻片凝集反应,(1)取洁净干燥的载片一片，用笔划分两区，一端注明为试验，一端注明为对照。(2)用接种环取生理盐水，置二滴于对照中心；同法滴大肠杆菌免疫血清于试验中心。(3)用接种环取少量大肠杆菌培养物分别研磨乳化于盐水及血清内，并均匀混合。(4)将玻片赂为反复摆动后静置于50 恒温水浴表面上保温510 min。(5)观察是否有凝集块出现，如有则记为阳性，没有则记为阴性,实验结果,观察管底是否有凝集现象。记录结果完全凝集，凝集块完全沉于管底，液体澄清，以“十十十十”记录。凝集块沉于管底，液体稍混，以“十十十”记录。部分凝集，液体混浊，以“十十”记录。极少凝集液体混浊以“十”记录。无变化记以“一”*,取“十十”的稀释度作为免疫血清的效价,问题与讨论,(一)凝集反应为何要在适量电解质存在的情况下才能进行?,(二)生理盐水中的电解质在凝集反应中有什么作用?,(三)试管凝集反应与玻片凝集反应各有什么优点?,