1、单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验目的,掌握水样的采取方法。,掌握水样细菌总数测定的方法；了解水源水的平板菌落计数的原则。,学习检测水中大肠菌群的原理和方法。,了解大肠菌群数量与水质状况的关系。,了解大肠菌群的数量在饮水中的重要性。,实验原理,饮用水是否合乎标准，通常通过水中细菌总数和大肠菌群数来确定。,细菌总数是指,1,毫升水样在一定的培养基平板（普通琼脂培养基）中，,37,24,小时培养后所生长的菌落数，此值仅是一种近似值。一般规定，,1,毫升自来水的总菌数不得超过,100,个。,如果水源被粪便污染，则有可能也被肠道病原菌污染而引起
2、伤寒、痢疾、霍乱等肠道病的流行，但肠道病原菌在水中数量较少，又易变异与死亡，故从水中特别是自来水中分离出病原菌，常常有困难。,而大肠菌群是肠道好氧菌中最普遍和数量最多的一种，所以常将其作为粪便污染的标志，即根据水中大肠菌群的数目来判断水源是否被粪便所污染，并间接推测水源受肠道病原菌污染的可能性。一般规定每,1000,毫升自来水中大肠菌群不超过三个。,细菌总数测定,1）,自来水,吸取,1ml,水样与平皿内冷却至,45,的培养基混匀，于,37,下培养,24h,计数，共两皿。同时做不接水样的空白皿对照试验。,2）,池水、河水或湖水,采用平板菌落计数法：一般中等污秽水样，取,10,1,、,10,2,、
3、10,3,三个稀释度，污秽严重的取,10,2,、,10,3,、,10,4,三个稀释度。,最后三个稀释度的稀释水样重复上述自来水的细菌测定试验。,水样稀释过程示意图,菌落计数方法,（,1,）计算相同稀释度的平均菌落数,有较大片菌苔生长时，弃用；以无片菌苔生长的平皿计数。,若片菌苔大小不到培养皿的一半，其余一半分布均匀，将此一半计数,2,（,2,）选择平均菌落数在,30,300,之间的平板,只有一个符合此范围时,，以该平均菌落数乘稀释倍数。,有两个在,30,300,间时,，按两者菌落总数比值决定：比值小于,2,，取平均；比值大于,2,，取较小的菌落总数。,（3）,所有菌落数均大于,300,，取稀
4、释度最高的平均菌落数乘稀释倍数。,（4）,所有菌落数均小于,30,，取稀释度最低的平均菌落数乘稀释倍数。,（5）,所有菌落数均不在,30,300,之间，以最接近,30,或,300,的平均菌落数乘稀释倍数。,计算菌数落总数方法举例,例次,不同稀释的平均菌落数,两个稀释度菌落数之比,菌落总烽（个/ml）,10,-1,10,-2,10,-3,1,1365,164,20,-,16400或1.610,4,2,2760,295,46,1.6,37750或3.810,4,3,2890,271,60,2.2,27100或2.710,4,4,无法计数,1650,513,-,513000或5.110,5,5,27
5、11,5,-,270或2.710,4,6,无法计数,305,12,-,30500或3.110,4,备注,两位以后的数字采取四舍五入的方法去掉,五、实验报告,1结果,（1）自来水,平板,菌落数,1ml自来水中细菌总数,1,2,（2）池水、河水或湖水等,稀释度,10,-1,10,-2,10,-3,平板,1,2,1,2,1,2,菌落数,平均菌落数,计算方法,细菌总数/mL,大肠菌群检查,滤膜法,过滤水样,用无菌镊子夹取灭菌滤膜边缘部分，将粗糙面向上，帖放在已灭菌的滤床上、，固定好滤器，将100mL水浴(如水样含菌数较多，可减少过滤水样量，或将水样稀释)注入滤器中，打开滤器阀门，在负0.5大气压下抽
6、滤。,培养,水样滤完后，再抽气约5s，关上滤器阀门，取下滤器，用灭菌镊子夹取滤膜边缘部分，移放在品红亚硫酸钠培养基(36.1.3.1)上，滤膜截留细菌面向上，滤膜应与培养基完全贴紧，两者间不得留有气泡，然后将平皿倒置，放入37恒温箱内培养2224h。,观察结果,挑出符合下列特征菌落进行革兰氏染色、镜检。紫红色，具有金属光泽的菌落。深红色，不带或略带金属光泽的菌落,淡红色，中心色较深的菌落。,凡革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌，再接种乳糖蛋白胨培养基液，于37培养24h，有产酸产气者，则判定为总大肠菌群阳性。,计算滤膜上生长的总大肠菌群数,水中总大肠菌群数/个L,-1,滤膜生长的菌落数1000过滤水样量（滤膜上菌落数以2060个/片为适宜）,实验结果,将水中总细菌数量计算出来,将自来水中总大肠菌群数量计算出来,问题与讨论,检查饮用水中的大肠菌群有何意义？,
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