流式细胞术在临床中的应用.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,流式细胞术在临床中的应用,马雷,流式细胞术,20,世纪,60,年代末发展起来的细胞定性和定量的技术。,通过收集激光照射到细胞后的散射光信号和荧光信号反映细胞的物理化学特征，并且根据细胞的物理化学特征分选得到感兴趣的细胞。,流式细胞仪构造模式图,液流系统,光学系统,电子系统,分选系统,细胞与分子生物学、流体力学、电磁理论和生物技术、激光技术、荧光技术、光电子技术、单克隆抗体技术、计算机技术、纳米技术等。,流式细胞术是现代科学技术发展的综合交叉的产物，是集多种技术发展于一体的,“大成者”,。,涉及多种学科及技术,原理,细胞周期,G,2,M,G,0,G,1,s,0,200,400,600,800,1000,G,0,G,1,s,G,2,M,DNA分析,细胞数量,2N,4N,临床意义：,肿瘤的早期诊断与鉴别,良恶性胸腔积液和腹水的鉴别诊断,用于临床肿瘤治疗效果监测,用于临床抗肿瘤治疗时药物的选择,用于早期淋巴瘤的诊断,用于良性肿瘤与中低度恶性肿瘤的鉴别,用于肿瘤患者的预后判断,流式在肿瘤学中的应用,2、JY细胞凋亡分析,标本类型：,胸水和腹水,血液标本,组织块标本,原理,PI-Fluorescence,Events,调亡细胞,正常G0/G1期细胞,临床意义：,用于临床抗肿瘤疗效监测,早期凋亡细胞百分数是临床抗肿瘤治疗有效的较早期评价指标,流式在肿瘤学中的应用,3、JY肿瘤多药耐药基因CD243检测,标本类型：,胸腔积液,腹水,组织标本,贴壁培养细胞,原理：,化疗药物对肿瘤细胞的杀伤作用，依赖于进入细胞内部的药物浓度的高低。多药耐药基因-1是一种糖蛋白，编号为CD243。这种糖蛋白可以大量捕获进入细胞内部的化疗药物，并将其“搬出”细胞。使细胞内部化疗药物浓度降低，造成药物对瘤细胞的杀伤作用降低或消失，最终出现耐药性现象。,临床意义：,了解瘤细胞CD243表达水平，如果是高表达，提示化疗疗效可能很差，宜采取放疗如果瘤细胞CD243表达水平很低或不能检出，化疗过程中建议定期监测瘤细胞CD243水平。,辅助判断预后。,流式在免疫学中的应用,4、JY淋巴细胞亚群,标本类型：,静脉血,临床意义,可将淋巴细胞分类为,淋巴细胞,（CD45high）,T淋巴细胞,（CD3+）,B淋巴细胞,(CD19+),NK淋巴细胞,(CD16+CD56+),临床意义,B细胞减少见于原发及继发性免疫功能低下、严重的病毒感染等情况。,B细胞增高，提示机体体液免疫功能被增强，见于临床各种细菌性感染。及B细胞白血病。,NK细胞数量是肿瘤临床病情判断、疗效监测的指标。,NK细胞减少见于脑心肌炎病毒、流感病毒、EB病毒、柯萨奇病毒等。流式在免疫学中的应用,5、JY总T、T4、T8淋巴细胞,标本类型：,静脉血,临床意义,T4增高，主要见于临床各种细菌性感染性疾病。,T4降低，主要见于临床各种病毒感染性疾病。,有助于艾滋病的诊断、疾病分期判断和疗效监测。,正常人,HIV感染者,AIDS病人,T8增高，多见于HBV、巨细胞病毒（CMV）、人类疱疹病毒（EB）及结核杆菌感染。,CD8+CD38+亚群是疾病进展和病毒复制的预测指标。,T8减低，多见于r免疫球蛋白缺乏症、胸腺发育不良和糖尿病等。,AIDS病人,HIV感染者,正常人,流式在免疫学中的应用,6、JY辅助性T细胞（Th）和诱导性T细胞（Ti）检测,临床意义：,Th细胞（CD4+CD29+）减少见于免疫缺陷、严重感染、肿瘤患者，可作为肿瘤诊断及疗效监测的指标。增多见于各种感染。,Ti细胞（CD4+CD29-）具有诱发免疫应答的功能。,流式在免疫学中的应用,7、JY效应T细胞（Th1、Th2）检测,8、JY调节性T细胞检测,9、JY辅助性T 细胞17(Th17)检测,发育分化 趋化因子受体 产 生,所需细胞因子 和转录因子表达 细胞因子,正常免疫功能 异常时发生疾病,抗胞内病原体,过高引起器官特,(病毒、细菌)免疫,异性自身免疫病,初始T细胞,IL-12,IFN-,IL-4,TGF-,IL-2,TGF-,IL-6,IL-23,IL-6,IL-21,抗原刺激,后T细胞,CCR7 CXCR5,Th1,Th2,Treg,Th17,Tfh,IFN-,IL-2,LT,CXCR3,CCR5,IL-4,5,10,IL-13,25,TGF-,IL-35,IL-10,IL-17,IL-21,IL-22,CCR4,6,IL-21,IL-10,CXCR5,免疫负调节,过高或过低与肿瘤,和免疫耐受,或自身免疫病相关,抗胞外病原体,过高引起过敏性,(寄生虫)免疫,炎症和哮喘,抗胞外细菌和,过高引起炎症性,真菌免疫和炎症,疾病(EAE、CIA等),辅助B细胞,过高引起抗体相关,产生抗体,自身免疫病,过低引起免疫缺陷,CrTh2,根据King C(Annu Rev Immunol 2008)修改,Bcl-6,STAT-3,ROR,t,Foxp3,GATA-3,STAT-6,T-bet,CD4,+,T细胞亚群的分化与细胞因子的关系,TH1/TH2,自身免疫病,参与,拮抗,Th1亢进,Th2亢进,恶性肿瘤（非小细胞肺癌、肺腺癌、肺鳞癌、绒膜癌、脑胶质瘤、胃癌、卵巢癌、宫颈癌、黑色素瘤、结直肠癌、淋巴瘤 等）,良性肿瘤,感染,寄生虫病（利什曼病、蠕虫病、丝虫病和血吸虫病等）,真菌,病毒感染-丙肝,病毒感染-HIV,细菌感染-结核,细菌感染-麻风,自身免疫病,克隆氏病、胰岛素依赖性糖尿病(IDDM)、自身免疫性甲状腺炎、多发性硬化,系统性红斑狼疮(SLE)、自身免疫性淋巴细胞增殖综合征(ALPS)、自身免疫性心脏病,过敏性疾病（嗜酸性粒细胞炎症反应-哮喘）,妇科-流产,GVHD,慢性,急性,天然TREG细胞在免疫系统中的作用,平衡状态：,既可有效清除外来病原体，,又可避免过度的炎症反应。,缺乏调节性,T,细胞：,免疫反应过度，造成自身免疫病、,哮喘、过敏反应、移植排斥、流产等。,过多的调节性,T,细胞：,免疫反应低下，无法有效清除病,原体及肿瘤，造成感染及癌症。,Th17 细胞参与炎性反应和宿主抗胞外病原体反应。作为可分泌IL-17A的Th的一个亚群，Th17 在,自身免疫病,发生过程中发挥重要作用。,临床意义,Th17细胞释放的I L-1 7 可引发自身免疫性脑炎EAE)、哮喘、类风湿性关节炎(RA)等自身免疫性疾病。,流式在细菌感染疾病中的应用,10、JY中性粒细胞膜表面CD64检测,标本类型：,静脉血,原理：,无论胞内或胞外细菌感染，都会引起CD64特异性增高。,临床意义：,查阅中、外文献，发现中性粒细胞膜表面CD64检测与CRP、PCT、中性粒细胞计数相比，可以提高对感染和脓毒血症的检出率，且具有早期诊断价值，灵敏度和特异性均较高。,CD64分析可以更好区分感染性与非感染性炎症反应，诊断急性感染和全身感染的灵敏度和特异性较高,门、急诊患者细菌感染的筛查和预后判断,细菌性感染与非细菌性感染的鉴别诊断,术后感染与应激反应的鉴别诊断,感染患者的抗生素治疗监测，指导抗生素用药,流式在自身免疫性疾病的鉴别诊断,11、JY红细胞表面相关免疫球蛋白（EAIg）检测,临床意义：,阳性见于临床免疫性溶血性贫血（IHA）、系统性红斑狼疮等疾病。,用于IHA的鉴别诊断与亚型分类,用于新生儿溶血性疾病的监测,流式在自身免疫性疾病的鉴别诊断,12、JY粒细胞表面相关免疫球蛋白（GAIg）检测,临床意义：,用于自身免疫性白细胞减少症的鉴别诊断与亚型分类,流式在自身免疫性疾病的鉴别诊断,13、JY血小板表面相关免疫球蛋白（PAIg）检测,临床意义：,用于临床特发性血小板减少性紫癜（ITP）的筛查与诊断,流式在强直性脊柱炎鉴别诊断中的应用,14、JY强直性脊柱炎相关抗原HLA-B27检测,标本类型：静脉血（23ml）,原理：HLA-B27是脊柱关节病病因及发病机制的关键已经被广泛认同，各种假说均支持患者由于存在HLA-B27的高表达引起了体内异常的免疫应答，从而导致了脊柱关节病的发生。,临床意义：,用于强直性脊柱炎的辅助诊断与鉴别诊断,用于临床强制性脊柱炎高危人群的筛查,流式在造血干细胞移植中的应用,15、JY静脉血造血干细胞计数,标本类型：静脉血2ml,原理：造血干细胞表达CD34而不表达CD38，造血祖细胞既表达CD34也表达CD38。利用单克隆抗体，临床流式技术可以很轻松对造血干细胞计数。,临床意义：,用于临床进行干细胞采集前，对捐献者动员后外周血干细胞的动员效果进行监测和是否实施单采的时机判断。,用于贫血的鉴别。再障属于干细胞受累，其静脉血中的干细胞数量明显减少。而缺铁性等贫血干细胞数量正常。,流式在阵发性睡眠性血红蛋白尿症中的应用,16、JY阵发性睡眠性血红蛋白尿症单克隆检测,标本类型：静脉血（23ml）,原理：阵发性睡眠性血红蛋白尿（PNH）是一种补体介导的以血管内溶血为主要特征的获得性造血干细胞克隆性疾病。主要特征是血细胞膜上的锚蛋白减少甚至消失。通过测定红细胞表面标志物CD235a、锚蛋白CD59和能与中性粒细胞膜表面锚蛋白结合的FLAER，发现百分之一的PNH细胞克隆，是一种非常灵敏、特异的方法。,临床意义：,用于PNH的诊断与鉴别诊断,用于贫血的鉴别诊断,鉴别系别（淋，髓）,区分亚型,特殊类型（,杂合型、,AUL,）,细胞遗传学异常,预后,MDR,监测,流式在血液学中的应用,流式在血液学中的应用,18、JY白血病免疫学诊断与分型流式检测,19、JY淋巴瘤/白血病流式检测,20、JY骨髓异常综合征流式检测,21、JY多发性骨髓瘤流式检测,22、JY微小残留病流式检测,SS,CD45,SS/CD45,APL,Thank you!,