流式细胞术样本制备.ppt

上一页,下一页,返回,样本制备,研究生免疫学POWERPOINT讲稿,流式专题,制作：姚新生 审校：孙万邦 联系：,yxspah;0852-8204419 8562206,流式细胞术样本制备,流式细胞术样本制备,BD质控品,流式细胞术样本来源,含有生物学颗粒的悬液：单细胞悬液、微生物颗粒悬液、人工微球悬液,标本类型：,细胞悬液：,外周血（溶血）、PBMC、骨髓,灌洗液、体腔积液,培养细胞、细胞系,实体组织：,病理组织：新鲜样本/石蜡包埋样本,针吸组织：新鲜样本,鞘液、洗液、PMA等：洁净，无颗粒杂质,流式细胞术样本来源,血液成分的分析：如白细胞、红细胞、血小板等,分离血液中特定细胞成分，进行分析：操作复杂，分离、离心步骤导致细胞特定群体丢失，并可能引入某些误差,直接使用全血：最接近生理状况，操作简便，样本用血量小,实体组织：MediMachine,单细胞悬液的处理,荧光标记抗体的染色：使用特异的单克隆抗体,单色分析：直接标记、间接标记,双色分析：SimulSET IMK、HLA-B27,多色分析：TriTEST、MultiTEST、ProCOUNT,溶血：FACS Lysing Solution,细胞打孔：FACS Perm2,固定：1%多聚甲醛,细胞染色,染色要求：,特异识别某一群细胞，有效区分不同细胞亚群,非特异反应水平低,抗体校价高，用量适用于常规标本,使用特异的单克隆抗体最好使用荧光直接标记的抗体,采用适当的阴性对照物,抗体最适滴度,淋巴细胞表面抗原分析,样本来源,新鲜抗凝全血,PBMC,单克隆荧光抗体染色,溶血,洗细胞,固定,上机检测,细胞周期分析,准确分析细胞核中DNA含量,单细胞悬液：,细胞数0.5-110,6,碎片和粘连细胞少,DNA染色的线性度：CEN,单细胞分析：CTN进行DDM检查,CV：2,m微球,细胞周期分析,DNA Cycle Plus,Buffer Solution：细胞保存液,Solution A：破膜剂,Solution B：RNase,Solution C：PI,单细胞悬液1,10,6,cells/ml，固定,消化RNA,DNA染色,对照样本,对照样本应与实验样本平行操作,阴性对照：评估非特异反应水平，界定阴性范围,阳性对照：在诊断抗原表达确失性疾病时，需确定抗原表达正常时的抗原表达强度和百分含量,补偿调整管,质控品,体外诊断试验的必要保证,稳定样品，提供靶值和质控范围，供实验室监测流式细胞仪分析实验全过程，确保结果可靠,质控品应与实验样本同时处理，采用相同步骤，相同试剂，相同的画门分析方法,双水平控制：Low/High,三水平控制：Low/Median/High,BD Stem Cell Control,流式细胞术造血干细胞免疫表型分析与计数的全血质控物,抗体染色,溶血,流式细胞仪设置及运行状况,分析数据，计数干细胞Cat.No 340991,1,2.0ml，CD34Low,1,2.0ml，CD34High,BD Multi-Check Control,流式细胞术淋巴细胞免疫表型分析与计数的全血质控物,抗体染色,溶血,固定,流式细胞仪设置及运行状况,分析数据，计算淋巴细胞各亚群含量,BD Multi-Check Control,淋巴细胞免疫表型：,CD3,+,CD3,+,CD4,+,CD3,+,CD8,+,CD19,+,CD3,-,CD16+56,+,CD3,+,HLA-DR,+,靶值及质控范围：,%Total Lymph,Absolute Number/,L,BD Multi-Check Control,BD Multi-Check Control,Cat.No 340911,1,2.5ml,Cat.No 340912,2,2.5ml,Cat.No 340913,5,2.5ml,BD Multi-Check CD4 Low Control,Cat.No 340914,1,2.5ml,Cat.No 340915,2,2.5ml,Cat.No 340916,5,2.5ml,BD Retic-COUNT Control,Cat.No 340999,1,1.5ml，Low,1,1.5ml，Med,1,1.5ml，High,Cat.No 341000,1,1.5ml，Low,1,1.5ml，Med,1,1.5ml，High,流式细胞术网织红细胞分析与计数的全血质控物,荧光染色,流式细胞仪设置及运行状况,分析数据，计数网织红细胞,BD LeucoCOUNT Control,血制品的残留白细胞计数的质控物,荧光染色,流式细胞仪设置及运行状况,分析数据，计数残留白细胞,TruCOUNT绝对计数,Cat.No 341001：血小板制品的质控品,1,3.0ml，Low；,1,3.0ml，High,Cat.No 341001：红细胞制品的质控品,1,3.0ml，Low；,1,3.0ml，High,