流式细胞术研究进展和细胞组学新技术.ppt

单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,Cell-based,71%,Biochemical,23%,Uncertain,6%,Cell-based,40%,Biochemical,60%,Past 5 years,In Development,Source:Dr.Priya Kunapuli,Senior Research Scientist,Merck Research Laboratories;Dec.2002,Key takeaways:,Rapid movement to cell-based assays for contextual analysis,以细胞为主要研究对象的课题数量变化,细胞水平研究的历史、现在和未来,暗视野光镜，相差显微镜，微分干涉对比显微镜，偏振光显微镜，荧光显微镜,单光子共聚焦显微镜，多光子共聚焦显微镜,大体荧光成像系统,细胞计数仪,18世纪，明视野显微镜发明,流式细胞仪,分光高度计，荧光高度计，干涉光高度计,放射自显影,细胞成像定量分析系统,?,形态学研究工具的发展历程,Simple optical microscope,Basic clinical scope,Research grade fluorescence scope,High-end automated HCS systems,Confocal scanning system,Off-line compensation,LMD compensation and More,FCS 3.0 format for Listmode files,Solvent protein detection development(beads based assay),Multi-Laser,multi-power options for different use,Large and Small particle sorting,New technologies for high yield,high purity and high viability sorting,。,32 支试管,自动,上样盘（,MCL),Walkaway,独立获取样本，,减轻操作劳动,MCL,自动模式.,MCL,手工模式.,单管上样模式.,暂停/转动功能,可以方便地往试管加入刺激剂或终止剂进行试验,每支试管检测前单独震动混匀，,有利于均匀获取细胞,自动上样方式,FC500 MPL,24,孔,0.5 2.5 ml,每孔容量,96,标准孔和深孔反应板,250 ul,最小容量,40,支试管(12,x75mm),1ml,最小体积,可以固定体积上样检测,175 ul,吸样量,可以减少高通量工作需要的烦杂的取样过程,适合于零成本绝对计数,将您的注意力从操作中解放出来而集中于思路的,创新,从模拟信号到先进的数字化信号,数字化信号转换,对数查表保证最优化的线性和稳定性,4,次幂转换误差16.0,NPE=,核质包装效率,Where do you separate viable/nonviable?,体积参数对死活细胞的良好分群,Quanta,是目前市场上分析精度最高的分析工具，能用的染料最多，并且能同时得到细胞大小的精确信息,4.407565,528,530.902,7.74%,1,554,129.5,6.3,G2,11.78082,353,408.461,24.64%,4,947,108.8,5.9,S-Phase,5.901847,290,295.86257.93%,11,633,82,5.4,G1,Color,CV1,Mode1,Mean1,Pct,Counts,MCV,Diameter,Region Name,DNA dyes used on the Quanta Include:,DAPI,Propidium Iodide,Draq5,Hoechst,7-AAD,体积参数在分析细胞周期中的作用,经典的免疫系统细胞分析,INNATE,PMN NUETROPHILS,EOSINOPHILS,BASOPHILS,MONOCYTES/MACROPHAGES,DENDRITIC CELLS:,mDC,-,pDC,NK CELLS,NKT CELLS,gd,T LYMPHOCYTES,CD5+B CELLS,ADAPTIVE,B CELLS,HELPER T-CELLS,Th1,Th2,REGULATORY T-CELLS,(Th3),CYTOTOXIC T-CELLS,两群树突状细胞,MDC/PDC,先天免疫细胞分析,NK,细胞,多色分析离我们越来越近,越来越多的细胞缺乏特异性标记，需要越来越多的标记来限定。多色分析的优势是21+1,32+1,31+1+1,ETC.,节省试剂和工作量。如果做非常全面的免疫分型，三色需要20支试管，四色需要12支，而五色只需要6支。,越来越多的生命活动研究需要多参数多角度分析，例如凋亡，,AICD,等抗原特异性,T,细胞分析,四聚体（,tetramer),染色,细胞因子分泌试验,ELISPOT,Cytokine Secretion Assay,不同厂家的,MHC,四聚体产品不太一样：贝克曼库尔特公司创造性地构建和表达了,MHC,分子,3,链的区域突变的蛋白（,iTAg），,能降低其与非特异性,T,细胞结合，大大提高了特异性。并且将,MHC,四聚体直接标记荧光，和常用的抗原多肽负载后整体商品化，也有单独的,MHC,分子（,iTAg）,单独出售，极大方便了研究者,利于此技术关键问题在四聚体制备，最大的问题不是没有阳性细胞，而是阳性率太高,四聚体染色技术,Beckman Coulter,已经有的部分产品,传染性疾病相关：,HIV gag SLYNTVATL,HLA-A*0201,HIV pol ILKEPVHGV,HLA-A*0201,CMV PP65 NLVPMVATV,HLA-A*0201,EBV GLCTLVAML,HLA-A*0201,EBV GLCTLVAML,HLA-A*0201,Influenza M1 GILGFVFTL,HLA-A*0201,HBV core FLPSDFFPSV,HLA-A*0201,肿瘤性疾病相关：,Mart1 ELAGIGILTV,HLA-A*0201,Gp 100 IMDQVPFSV,HLA-A*0201,Gp 100 ITDQVPFSVHLA-A*0201,Her-2/neu KIFGSLAFL,HLA-A*0201,Her-2/neu RLLQETELV,HLA-A*0201,PR-1 VLQELNVTV,HLA-A*0201,Tyrosinase YMDGTMSQV,HLA-A*0201,抗原决定簇分析的科学平台,iTopia Epitope Discovery System,在目前主要以数据库为基础的理论性分析抗原决定簇的基础上，,iTopia,技术平台为研究者研究免疫的发生发展、疫苗的研制和免疫学检测提供了一个科学合理的解决方案,分泌细胞因子的细胞的检测和分选,DC,与,TLR,分子和,T,细胞的相互作用,DC Capture Ag Via TLR Induced Actin Remodeling,TLR activate DC endocytosis -FITC-dextran incubation,Mature DC Priming Nave T Cells,贝克曼库尔特公司,PLG,试剂,能测定保存长达5天的陈旧血,世界首先专利,特殊的克隆号和抗体保存秘方,更多的此类抗体即将问世,贝克曼库尔特公司,BBA,试剂能同时检测10种细胞因子,*,Human Th1/Th2 Cytokine I Kit,FL2(Reporter Parameter),FL4(Differentiator Parameter),Cells,Beads,细胞表面标记和样本可溶性蛋白同时检测系统单种可溶性蛋白,FL1,FL4,FL2,FL4,FL1,SS,FL4,EVENTS,Beads,Cells,细胞表面标记和样本可溶性蛋白同时检测系统多种种可溶性蛋白,干细胞中的研究应用-,Hoechst 33342 side population,干细胞能表达,ABCG2,泵蛋白，在,HOECHST 33342,染色时能将该染料泵出，因此分析不能被该染料染色的细胞群时可以发现一群不能染色的细胞既是干细胞，因此能够在众多肿瘤细胞中区分出肿瘤干细胞。,QUANTA,检测,SP,细胞群,EPICS Altra,测定,SP,细胞群,流式细胞仪对细胞结构的分析,细胞酶活性检测,Th1,细胞,DPPIV,活性实时检测与验证,神经元细胞融合检测,利用,DIL,DIO,对神经元细胞进行染色观察和流式检测,流式细胞术在生物医学研究的新方向,细胞多态性分析：受体、抗原折叠、,HLA,等，包括,CXCR4,CCR5,DC-SIGN(,与,AIDS,易感性有关），,NKR,重要分子的进一步分析，如粘附分子（物种间高度保守，与细胞间通讯，干细胞,HOMING，,肿瘤的发生，细胞分化成熟等）,信号传导（实际主要为胞浆内磷酸化及去磷酸化蛋白的检测）,新型荧光特异性探针：胞内病原体检测、转录因子检测、细胞器或细胞生命活动指标的新荧光素的应用,利用分选的细胞进行体内和体外功能研究,与其它定位性的荧光设备联合使用（如,MPE,CONFOCAL,IC200,等）,谢 谢！,游东生,贝克曼库尔特公司上海代表处,13636440348,dsyou,