高考生物复习第十二单元生物技术实践第43讲微生物的培养与应用全国公开课一等奖百校联赛示范课赛课特等奖.pptx

栏目导引,重难透析,命题破译,研析教材,夯基固本,随堂反馈,演练冲关,课后达,标检测,第十二单元生物技术实践,第,43,讲微生物培养与应用,第十二单元生物技术实践,第1页,考纲点击,1.,微生物分离和培养,2.,培养基对微生物选择作用,3.,利用微生物进行发酵来生产特定产物,第十二单元生物技术实践,第2页,一、微生物试验室培养,1,培养基,(1),概念：人们按照微生物对,_,不一样需求，配制出供其,_,营养基质。,(2),营养组成：普通都含有水、,_,、氮源和无机盐。另外还要满足微生物生长对,pH,、特殊营养物质以及,_,要求。,(3),种类：按照物理性质可分为,_,培养基、半固体培养基和,_培养基。,营养物质,生长繁殖,碳源,氧气,液体,固体,第3页,煮沸消毒法,紫外线消毒法,灼烧灭菌,高压蒸汽灭菌,第4页,3,大肠杆菌纯化培养,(1),制备牛肉膏蛋白胨固体培养基,配制步骤：计算,_,溶化,_,倒平板。,(2),纯化大肠杆菌,纯化大肠杆菌，其关键步骤是,_,。,纯化培养方法：,_,法和,_,法。,纯化培养原理：在培养基上得到由一个细胞 繁殖而来肉眼可见,_,，即可取得较纯菌种。,称量,灭菌,接种,平板划线,稀释涂布平板,菌落,第5页,二、土壤中分解尿素细菌分离和计数,1,分离原理：,土壤中细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成,_,，这种物质在把尿素分解成无机物过程中起,_,作用。以尿素为唯一氮源培养基能促进分解尿素细菌生长和繁殖，并抑制或阻止其它微生物生长，从而将目标菌分离。,2,统计菌落数目：,统计样品中活菌普通用,_,法。,3,试验流程：,土壤取样,制备,_,微生物培养与观察,细菌计数。,脲酶,催化,稀释涂布平板,培养基,第6页,三、分解纤维素微生物分离,1,纤维素酶,(1),组成：纤维素酶是一个复合酶，它包含,C,1,酶、,C,X,酶和葡萄糖苷酶。,(2),作用,第7页,2,菌种筛选,(1),方法：,_,。,刚果红染色法,第8页,纤维素,纤维素酶,第9页,1.(,北京海淀区期末,),培养基中普通都含有水、碳源、氮源和无机盐四种成份。,(,),2.,将土壤浸出液涂布在无菌选择培养基上分离分解尿素细菌，是否无菌操作影响较小。,(,),3.,培养基分装到培养皿后进行灭菌。,(,),4.,从有机废水中分离微生物用于废水处理时，接种后培养皿须放在光照培养箱中培养。,(,),5.,外植体消毒标准是既杀死材料表面微生物，又降低消毒剂对细胞伤害。,(,),第10页,6.(,高考四川卷,T3D),用稀释涂布平板法培养计数，应选择有,30,300,菌落数平板。,(,),7.(,山东青岛市期末,),筛选能分解尿素细菌所利用培养基中，尿素是唯一氮源。,(,),8.,分解尿素细菌在分解尿素时，能够将尿素转化为氨，使得培养基酸碱度降低。,(,),9.,土壤中纤维素分解菌筛选流程中,“,选择培养,”,是必不可少。,(,),10.,在富含纤维素培养基中加入刚果红染色剂，若出现周围存在透明圈菌落，则说明筛选到了分解纤维素微生物。,(,),第11页,考点一培养基及微生物纯化培养技术,培养基种类,特点,用途,液体培养基,固体培养基,半固体培养基,不加凝固剂,工业生产,加凝固剂,(,如琼脂,),微生物分离、判定,活菌计数,菌种保藏,观察微生物运动、分类、判定,第12页,种类,制备方法,原理,用途,举例,选择培养基,判别培养基,培养基中加入一些化学物质,依据一些微生物对一些物质特殊需求或抗性而设计,从众多微生物中分离所需微生物,加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌,培养基中加入某种指示剂或化学药品,产生特定颜色或其它改变,判别不一样种类微生物,用伊红,美蓝培养基判别大肠杆菌,第13页,第14页,条件,结果,惯用方法,应用范围,消毒,灭菌,较为温和物理或化学方法,仅杀死物体表面或内部部分对人体有害微生物,煮沸消毒法,日惯用具,巴氏消毒法,不耐高温液体,化学药剂消毒法,用酒精擦拭双手，用氯气消毒水源,强烈理化原因,杀死物体内外全部微生物,包含芽孢和孢子,灼烧灭菌法,接种工具,干热灭菌法,玻璃器皿、金属工具,高压蒸汽灭菌法,培养基及容器,第15页,比较项目,平板划线法,稀释涂布平板法,关键操作,接种环在固体平板培养基表面连续划线,一系列梯度稀释,;,涂布平板法操作,第16页,比较项目,平板划线法,稀释涂布平板法,注意事项,菌体获取,优点,缺点,每次划线前后均需灼烧接种环,稀释度要足够高，为确保试验成功能够增加稀释度,在含有显著菌落特征菌落中挑取菌体,从适宜稀释度平板上菌落中挑取菌体,能够依据菌落特点取得某种微生物单细胞菌落,既能够取得单细胞菌落,又能对微生物计数,不能对微生物计数,操作复杂，需要涂布多个平板,第17页,第18页,第一次操作,每次划线之间,划线结束,目标,杀死接种环上原有微生物,杀死上次划线后接种环上残留菌种，使下次划线菌种直接起源于上次划线末端，使每次划线菌种数目降低,杀死接种环上残余菌种，防止细菌污染环境和感染操作者,第19页,第20页,检测培养基平板灭菌是否合格,第21页,灼烧,将聚集菌体逐步稀释方便取得单个菌落,B,第22页,溶解氧,营养物质,第23页,成份,粉状硫,10 g,KH,2,PO,4,4 g,FeSO,4,0.5 g,蔗糖,10 g,(NH,4,),2,SO,4,0.4 g,第24页,成份,H,2,O 100 mL,MgSO,4,9.25 g,CaCl,2,0.5 g,固氮,自养,异养,第25页,解析,:(1),为了检测培养基平板灭菌是否合格，可在涂布接种,前，随机取灭菌后空白平板先行培养一段时间。,(2),接种,环、接种针等金属用具可直接在酒精灯火焰充分燃烧层灼,烧，以到达快速彻底灭菌目标。在第二次及以后划线,时，总是从上一次划线末端开始划线，其目标是将聚集菌体逐步稀释方便取得单个菌落。,(3),比较,A,和,B,能够看出：,A,培养基中细菌分布呈线性，是用平板划线法接种培养后得到结果；,B,培养基中细菌均匀分布，是用稀释涂布平板法接种培养后得到结果。,第26页,(4),振荡培养能够提升培养液中溶解氧含量，还能够使菌体与培养液充分接触，提升了营养物质利用率，所以振荡培养细菌比静置培养细菌生长速度快。,(5),从表格中可看,出，,培养基中无氮源，,中无碳源，,中为完全培养基。由此可知能在,中生存甲只能是固氮微生物，能在,中生存乙是自养微生物，丙只在,中存活，为异养微生物。,第27页,考点二微生物计数方法,比较项目,间接计数法,(,稀释涂布平板法,),直接计数法,(,显微计数法,),原理,当样品稀释度足够高时,培养基表面生长一个菌落,起源于样品稀释液中一个活菌,经过统计平板上菌落数,就能推测出样品中大约含有多少活菌,利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积样品中微生物数量,第28页,比较项目,间接计数法,(,稀释涂布平板法,),直接计数法,(,显微计数法,),公式,缺点,结果,每克样品中菌落数,(CV),M,C,:,某稀释度下平板上生长平均菌落数,;,V,:,涂布平板时所用稀释液体积,(mL),;,M,:,稀释倍数,每毫升原液所含细菌数,:,每小格平均细菌数,400,10,4,稀释倍数,当两个或多个菌体连在一起时,平板上观察到只是一个菌落,不能区分细胞死活,比实际值偏小,比实际值偏大,第29页,比较项目,对照,重复,目标,实例,排除非测试原因对试验结果影响,排除偶然原因对试验结果影响,空白对照：确定培养基制作是否合格,同一稀释度涂布最少,3,个平板,第30页,第31页,第32页,第33页,70,75,煮,30,分钟,(,或,80,煮,15,分钟,),牛奶营养成份不被破坏,B,第34页,3.4,10,6,偏小,个别菌落可能是由,2,个或多个细菌形成,伊红,美蓝,(,金属光泽紫,),黑色,第35页,考点三微生物筛选与判别,第36页,第37页,比较项目,土壤中分解尿素细菌分离分解纤维素微生物分离,方法,原理,利用以尿素为唯一氮源选择培养基进行选择培养,利用富含纤维素选择培养基进行选择培养,只有分解尿素细菌能够合成脲酶，才能在以尿素为唯一氮源培养基上生长,因为培养基中含有丰富纤维素，所以能够分解纤维素微生物含有更多生存机会而大量繁殖,第38页,比较项目,土壤中分解尿素细菌分离,分解纤维素微生物分离,判别,在培养基中加入酚红指示剂,指示剂变红说明菌落中菌体为分解尿素细菌,刚果红染色法，周围出现透明圈菌落为分解纤维素微生物菌落,第39页,涂布平板,选择,第40页,B,培养基灭菌、接种过程中进行无菌操作,第41页,培养液,A,B,C,D,纤维素,25 g/L,25 g/L,25 g/L,纤维素酶,1g/L,NaNO,3,3 g/L,3 g/L,牛肉膏,3 g/L,K,2,HPO,4,1 g/L,1 g/L,1 g/L,1 g/L,KCl,0.5 g/L,0.5 g/L,0.5 g/L,0.5 g/L,MgSO,4,7H,2,O,1 g/L,1 g/L,1 g/L,1 g/L,FeSO,4,0.01 g/L,0.01 g/L,0.01 g/L,0.01 g/L,A,、,B,、,C,第42页,人工诱变,(,紫外线照射等,),处理菌株，再进行筛选,酚红,刚果红,第43页,