目的基因的获取(实用).ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,基因工程的基本操作程序,专题基因工程,DNA,重组技术的基本工具,“分子手术刀”,“分子缝合针”,“分子运输车”,复习,限制酶,DNA连接酶,基因进入受体细 胞的载体,运载体,基因工程培育抗虫棉的简要过程：,普通棉花,(,无抗虫特性,),苏云金芽孢杆菌,提取,抗虫基因,与运载体DNA拼接,导入,棉花细胞,棉花植株,(,有,抗虫特性,),(,含,抗虫基因,),基因工程的基本操作程序,主要包括,四个基本步骤,一 目的基因的获取,二 基因表达载体的构建,三 将目的基因导入受体细胞,四 目的基因的检测与鉴定结构基因或调控因子,2.获取目的基因的常用方法,（1）从基因文库中获取,（2）利用PCR技术扩增,（3）人工合成,一、获取目的基因,1.目的基因是指,或,从细胞中分离,与,人工合成,编码蛋白质,，,连续不间断,原核细胞的 基因结构,编码区,：,非编码区,不编码蛋白质。,调控,遗传信息表达,。,真核细胞的基因结构,编码区,非编码区,非编码区,与RNA聚合酶结合位点,启动子,终止子,编码区上游,编码区下游,内含子,外显子,转录部位为基因编码区,结构基因,外显子,内含子,转录、加工修饰,mRNA,非编码区,非编码区,编码区,外显子,内含子,原核,真核,基因的结构,种类,部分基因文库（如:cDNA文库）,.,基因文库的概念和种类,(1)从基因文库中获取目的基因,概念,：,基因组文库,基因文库,供体细胞中的DNA,许多DNA片段,重组质粒,限制酶,分别与运 载体连接,不同的受体细胞,分别 导入,构建基因文库,基因组文库,B 反转录法：,.构建基因文库,DNA聚合酶,反转录酶,cDNA,mRNA,双链DNA,基因重组,重组质粒,部分,基因文库,基因文库,中不是直接保管相应基因，而是,保存受体菌,，菌中含基因,依据目的基因的有关信息,如：根据,基因的核苷酸序列,基因在染色体上的位置,基因的转录产物mRNA,基因表达产物蛋白质,等特性,。,如何从基因文库中得到所需要的基因？,(2)利用PCR技术扩增目的基因,概念,原理,前提条件,基本条件,方式,结果,过程,模板、原料、酶、能量,引物,变性、退火、延伸三步曲,延伸：,加热至,7075,以目的基因为模板，合成互补的新DNA链,变性：,加热至,9095,双链DNA解链成为单链DNA,退火：,冷却至,5560,部分引物与模板的单链DNA的特定互补部位相配对和结合,变性,延伸,退火,模板,DNA,95,PCR的基本原理,PCR反应条件,PCR过程,PCR的特点,50,引物,1,引物,2,DNA引物,PCR的基本原理,PCR反应条件,PCR过程,PCR的特点,引物,1,引物,2,DNA引物,72,Taq酶,Taq酶,PCR的基本原理,PCR反应条件,PCR过程,PCR的特点,72,第,1轮结束,第,2轮开始,蛋白质的氨基酸序列,mRNA的核苷酸序列,结构基因的核苷酸序列,推测,推测,目的基因,化学合成,人工合成目的基因,根据已知的氨基酸序列合成DNA,目的基因可从基因文库中获得，下列有关基因文库的描述正确的是,A.某生物的全套基因就是一个基因文库,B.将含有某种生物不同的许多DNA片段导入某个生物 体内，则这个生物 就是一个基因文库,C.含有一种生物所有基因的基因文库叫,做基因组文库,D.含有一种生物的一部分基因的基因文库,叫cDNA文库,练习,2.在遗传工程中，若有一个控制有利性状的,DNA分子片段为ATGTGTACAC，要使其数量增多，可用PCR技术进行人工复制，复制时应给予的条件是,双链DNA分子为模板 ATGTG或,TACAC模板链 四种脱氧核苷酸,四种核苷酸 DNA聚合酶,热稳定DNA 聚合酶 引物,温度变化 恒温,A.B.,C.D.,3,.下列获取目的基因的方法中需要模板链的是,从基因文库中获取目的基因,利用PCR技术扩增目的基因,反转录法,通过DNA合成仪利用化学方法人工合成,A.B.,C.D.,4,.在基因工程中，把选出的目的基因（共1000个脱氧核苷酸对，其中腺嘌岭脱氧核苷酸是460个）放入DNA扩增仪中扩增4代，那么，在扩增仪中应放入胞嘧啶脱氧核苷酸的个数是,A.540个 B.8100个,C.17280个 D.7560个,