生化实验-血糖的测定.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,.,*,血糖的测定,实验四,1,.,血糖及血糖水平的概念：,血糖：指血液中的单糖：葡萄糖,血糖水平：血浆中葡萄糖浓度,血糖总维持在恒定水平：3.96.7mmol/L,2,.,调节血糖水平的激素：,胰岛素,、胰高血糖素、糖皮质激素和肾上腺素。,血糖水平异常：高血糖及糖尿病；低血糖,3,.,临床：血糖检测是目前诊断糖代谢异常相关疾病的主要依据。,科研：在代谢疾病的研究中，常测定血糖。在某些药物的研究中，也涉及血糖的测定。,测定血糖的意义,4,.,体液糖的测定项目：,血糖浓度测定,口服糖耐量试验,糖化血红蛋白试验,糖化血清白蛋白测定,胰岛素测定,C-肽测定等,5,.,测定方法,无机化学法：Folin-Wu法,有机化学法：邻甲苯胺法,酶法：,葡萄糖氧化酶法,血糖测定的常用方法,6,.,葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法原理,（1）葡萄糖O,2,H,2,O,（2）H,2,O,2,4-氨基安替吡啉苯酚,葡萄糖酸H,2,O,2,葡萄糖氧化酶（GOD）,H,2,O 红色醌式物质,过氧化物酶,（POD）,Trinder反应,505nm,光吸收法测定,相对血糖浓度,7,.,分光光度计的原理,分光光度技术,电泳技术,层析技术,离心技术,生物化学的四大研究技术：,光的波粒二象性,物质的光吸收性,分光光度计的原理,8,.,分光光度计的工作原理,9,.,朗伯-比尔定律,朗伯定律,：A=k,1,L,比尔定律,：A=k,2,C,朗伯-比尔定律,：如同时考虑液层厚度和溶液浓度对吸光度的影响，则吸光度与溶质的浓度和溶液的厚度的乘积成正比。,A=KLC,10,.,朗伯-比尔定律应用,A,标,=KC,标,L,A,样,=KC,样,L,标准品法测定未知样品含量,C,样,=,A,样,A,标,C,标,11,.,1.接通电源，,调整波长,。,2.比色杯中加入空白及待测样品，并放入分光光度计中，,注意：加入样品量不超过比色杯体积的2/3。,3.,调模式为“,透射比,”，,对空白对照进行调“,0,”（开盖）和调“,100,”（闭盖）。,4.,调模式为“,吸光度,”，,将空白对照调“,0,”，测定待测样品的吸光度值。,分光光度计的使用,12,.,13,.,14,.,葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法检测激素对血糖浓度的影响,方法,15,.,（1）,取,4,支试管，按下表加入试剂:,试剂,标准管(ml),测定管1(ml),测定管2(ml),空白管(ml),血清样品,0.02,0.02,葡萄糖标准液,0.02,蒸馏水,0.02,酶酚混合试剂,3.00,3.00,3.00,3.00,实验步骤：,充分混匀，37 水浴中保温20min；,冷却至室温后,，505nm处比色,比色方法：以空白管调零，读取标准管及测定管光密度值。,16,.,（2）计算,：,依据,朗伯-比尔定律,：A=,KL,C,标准管葡萄糖浓度：5mmol/L,测定管,葡萄糖含量（mmol/L）,测定管光密度,标准管光密度,5,17,.,正确使用比色器皿：手拿比色皿的毛面；比色液应占比色皿的,2/3,。,血糖测定应在取血后,2,小时内完成，放置太久，血糖易分解，故使含量降低。,酶酚混合液一般现用现配。,注意事项,18,.,补充实验,测,2-3,名同学早餐后和空腹血糖的水平，并比较二者之间的区别。,使用怡成,JPS-5,型血糖仪。,19,.,小结,1、葡萄糖氧化酶-过氧化物酶比色法测定血糖的原理。,2、分光光度计的正确使用。,3、实验操作中存在的问题。,20,.,其他常用血糖测定方法介绍,葡萄糖氧化酶,-,过氧化物酶比色法,Folin,-Wu,法,邻,-,甲苯胺法,21,.,原理,葡萄糖在和碱性铜试剂混合加热后，可使,Cu,2+,还原成,Cu,+,，,后者与磷钼酸试剂作用生成蓝色的钼蓝。通过比色法测定蓝色化合物，计算出血糖的含量。,评价,稳定、准确、但对葡萄糖无特异性，受血中非糖,还 原物质,的影响。,空腹正常血糖参考值,4.46.7mmol/L,或,80-120mg/dL,Folin-Wu法,22,.,其他常用血糖测定方法介绍,葡萄糖氧化酶,-,过氧化物酶比色法,Folin,-Wu,法,邻,-,甲苯胺法,23,.,原理,葡萄糖在冰醋酸中加热脱水后，与邻,-,甲苯胺缩合产生蓝绿色的席弗,(Schiff),碱，颜色的深浅与葡萄糖含量成正比，可通过比色法测得血糖含量。,评价,结果较可靠、但邻,-,甲苯胺须蒸馏后使用，有毒性。,空腹正常血糖参考值,3.96.1mmol/L,或,70-110mg/dL,邻-甲苯胺法,24,.,葡萄糖氧化酶法：,该法特异性高，反应条件温和，能反映血中葡萄糖的真实含量，且已推广出试剂盒，广泛应用与临床。,Folin-Wu法：,该法对葡萄糖无特异性，一切还原物质均可产生同样的反应。虽血液中葡萄糖为主要还原物质，但仍存在其他非糖还原物质，故该法其参考值较其他方法略高。,邻-甲苯胺法：,该法涉及强酸、加热等反应条件，不便于大规模检测，且使用的试剂具有毒性，临床和科研上已很少采用。,25,.,思考题,1、为何不同检测方法所提供的空腹正常血糖参考值存在差异？,葡萄糖氧化酶法：3.96.1mmol/L,Folin-Wu法：4.46.7mmol/L,邻-甲苯胺法：3.96.1mmol/L,2、肾上腺素使血糖升高的机理是什么？能够升高血糖的激素有哪些？,26,.,